2024년 6월 28일
산화된 글루타치온과 환원된 형태의 글루타치온(각각 GSSG 및 GSH)의 정량화는 오르토프탈알데히드(OPA)를 사용하여 달성되었습니다. OPA는 GSH에 접합되면 고농도 형광성이 되지만 감소될 때까지 GSSG를 접합할 수 없습니다. 여기에서는 정규화를 위해 단백질 정량을 사용하여 두 가지를 모두 정량화하는 다중 파라메트릭 분석에 대해 설명합니다.
당사는 현장에서 수행할 수 있는 다양한 세포주의 GSH 및 GSSG 농도에 특히 중점을 두고 티올 농도를 정량화하는 새로운 방법을 제공하는 것을 목표로 합니다. 우리는 이것이 과학계에 유용한 프로토콜이라고 생각합니다. 활성산소종의 관심 있는 틈새 및 특정 바이오마커를 검출하기 위해 수많은 노력이 이루어졌으며, 일부는 라디칼 검출 및 하이드록실 및 일중항 산소와 같은 소분자와 같은 단기 활성산소 종을 검출하는 데 큰 관심을 보였습니다.
여러 기관의 주요 과제 중 하나는 값비싼 장비나 번거로운 프로세스 없이 관심 있는 바이오마커를 정확하고 구체적으로 검출할 수 있는 능력이었습니다. 이 프로토콜은 다중 파라미터 분석을 가능하게 하여 별도의 프로토콜 없이 데이터를 정규화할 수 있으며, 시간이 많이 걸리거나 호환되지 않는 시약이 존재하거나 건강에 해로운 시약을 사용하는 다른 분석에서 발견되는 여러 단계를 제거합니다. 나노물질안전그룹은 다양한 나노물질과 고분자가 인체 건강에 미칠 수 있는 영향을 지속적으로 평가할 것입니다.
우리는 이 프로토콜이 추가 바이오마커를 검출하기 위해 잠재적으로 다중화될 수 있기 때문에 이 목표를 달성하는 데 있어 툴킷의 필수적인 부분이라고 생각합니다.
본 연구는 다양한 세포주에서 환원형 글루타치온(GSH)과 산화형 글루타치온(GSSG)의 농도를 정량화하는 새로운 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 형광 검출을 위해 Ortho-phthalaldehyde(OPA)를 활용하며, 복잡한 과정 없이도 효율적인 데이터 정규화를 가능하게 합니다.
배양된 포유류 세포 내 환원형 및 산화형 글루타치온의 정량적 평가는 초기 신약 개발 단계에서 세포의 산화환원 상태와 산화 스트레스 반응을 평가하는 데 매우 중요합니다. 이 OPA 기반 분석법은 GSH와 GSSG의 신속한 다중 정량을 가능하게 하여, 특수 장비 없이도 강력한 바이오마커 분석을 지원합니다. 본 프로토콜은 정규화 및 세포독성 분석과의 호환성이 뛰어나, 신약 개발 및 전임상 워크플로우 전반의 데이터 통합을 효율화합니다.
이 OPA 기반 글루타치온 정량법은 초기 발견부터 전임상 단계까지의 연속 과정에 적합하며, 리드 화합물 발굴 및 기전 연구에 산화-환원 바이오마커 분석을 원활하게 통합할 수 있게 합니다.