Name: 수술 후 장폐색 쥐 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-12T13:10:00.000+00:00
Duration: 4 min 26 s
Description: 배우세요 쥐에서 장 조작을 통해 수술 후 장폐색 모델을 수립하는 방법을. 이 프로토콜은 장 면역 및 병태생리학 연구와 새로운 항염증 치료법 개발에 활용됩니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>장 조작을 통한 수술 후 장폐색(Postoperative Ileus)을 연구하기 위한 쥐 모델(Murine Model for Study Postative Ileus through Intestinal Manipulation)

<ol><li>Chapman, S. J., Pericleous, A., Downey, C., Jayne, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postoperative+ileus+following+major+colorectal+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Postoperative ileus following major colorectal surgery.</a> Br J Surg. 105 (7), 797-810 (2018).</li>
<li>Farro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCR2-dependent+monocyte-derived+macrophages+resolve+inflammation+and+restore+gut+motility+in+postoperative+ileus%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">CCR2-dependent monocyte-derived macrophages resolve inflammation and restore gut motility in postoperative ileus.</a> Gut. 66 (12), 2098-2109 (2017).</li>
<li>Wouters, M. M., Vicario, M., Santos, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mast+cells+in+functional+GI+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">The role of mast cells in functional GI disorders.</a> Gut. 65 (1), 155-168 (2016).</li>
<li>Engel, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+helper+type+1+memory+cells+disseminate+postoperative+ileus+over+the+entire+intestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">T helper type 1 memory cells disseminate postoperative ileus over the entire intestinal tract.</a> Nat Med. 16 (12), 1407-1413 (2010).</li>
<li>Schwartz, C., Voehringer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+murine+basophils+by+flow+cytometry+and+histology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Identification of murine basophils by flow cytometry and histology.</a> Methods Mol Biol. 2163, 367-375 (2020).</li>
<li>Funk, E. K., Weissbrod, P., Horgan, S., Orosco, R. K., Califano, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+experience+with+a+novel+single-port+platform+for+transoral+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Endosc%22%5BJournal%5D)">Preclinical experience with a novel single-port platform for transoral surgery.</a> Surg Endosc. 35 (8), 4857-4864 (2021).</li>
<li>Nemoto, S., Mailloux, A. W., Kroeger, J., Mulé, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OMIP-031%3A+Immunologic+checkpoint+expression+on+murine+effector+and+memory+T-cell+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">OMIP-031: Immunologic checkpoint expression on murine effector and memory T-cell subsets.</a> Cytometry A. 89 (5), 427-429 (2016).</li>
<li>Brandi, J., Wiethe, C., Riehn, M., Jacobs, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OMIP-93%3A+A+41-color+high+parameter+panel+to+characterize+various+co-inhibitory+molecules+and+their+ligands+in+the+lymphoid+and+myeloid+compartment+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">OMIP-93: A 41-color high parameter panel to characterize various co-inhibitory molecules and their ligands in the lymphoid and myeloid compartment in mice.</a> Cytometry A. 103 (8), 624-630 (2023).</li>
<li>Swidsinski, A., Weber, J., Loening-Baucke, V., Hale, L. P., Lochs, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+organization+and+composition+of+the+mucosal+flora+in+patients+with+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Spatial organization and composition of the mucosal flora in patients with inflammatory bowel disease.</a> J Clin Microbiol. 43 (7), 3380-3389 (2005).</li>
<li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> J Vis Exp. (113), e54161(2016).</li>
<li>van Bree, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+method+for+studying+postoperative+ileus+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Physiol+Pathophysiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Novel method for studying postoperative ileus in mice.</a> Int J Physiol Pathophysiol Pharmacol. 4 (4), 219-227 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 M HEPES</td><td>Thermo</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>APC 안티 마우스 I-A/I-E (MHC-II)</td><td>바이오레전</td><td>드 107614</td><td></td></tr><tr><td>APC 안티 마우스 TCRb</td><td>바이오레전</td><td>드 109212</td><td></td></tr><tr><td>APC/Cy7 안티 마우스 CD4</td><td>바이오레전</td><td>드 100414</td><td></td></tr><tr><td>APC/Cy7 안티 마우스 Ly6G</td><td>바이오레전</td><td>드 127624</td><td></td></tr><tr><td>브릴리언트 바이올렛 421 안티 마우스 CD69</td><td>Biolegend</td><td>104545</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 안티 마우스 F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123132</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 785 안티 마우스/인간 CD44</td><td>Biolegend</td><td>103041</td><td></td></tr><tr><td>BUV395 안티 마우스 CD8a</td><td>BD</td><td>563786</td><td></td></tr><tr><td>BUV737 안티 마우스 CD3e</td><td>BD</td><td>612771</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐 분해 효소 IV</td><td>시그마-알드리치</td><td>C5138</td><td></td></tr> 소 췌장에서 <tr><td>추출한 배양 현미경</td><td>CKX53</td><td>Olympus</td><td></td></tr><tr><td>Deoxyribonuclease I(DNase I)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25-5G</td><td></td></tr><tr><td>DL-Dithiothreitol 용액</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>43816-10ML</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>EDS-100G</td><td></td></tr><tr><td>FITC 안티 마우스 CD45</td><td>Biolegend</td><td></td><td></td>147709</tr><tr><td>FITC-덱스트란(70kWM)</td><td>시그마-알드리치</td><td>FD70-100MG</td><td>위장 통과 분석</td></tr><tr><td>HE 염색 키트</td><td>solarbio</td><td>G1120</td><td></td></tr><tr><td>PE 안티 마우스 CD11b</td><td>Biolegend</td><td>101208</td><td></td></tr><tr><td>PE 안티 마우스 PD-1</td><td>Biolegend</td><td>114118</td><td></td></tr><tr><td>PE/Cy7 안티 마우스 CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117318</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>GE (Pharmacia)</td><td>17-0891-01</td><td></td></tr><tr><td>Symphony A5 유세포 분석기</td><td>BD-</td><td></td><td>면역 세포 검출 및 분류</td></tr><tr><td>Tribromoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td><td>마취</td></tr><tr><td>Varioskan LUX</td><td>Thermo</td><td>N16699</td><td>다중 모드 마이크로플레이트 리더</td></tr><tr><td>Zombie Aqua Fixable Viability kit</td><td>Biolegend</td><td>423102</td><td>Fluorescent 생존 염료&nbsp;</td></tr></tbody></table>

수술 후 장폐색 쥐 모델

Postoperative Ileus Murine Model

이 프로토콜에서 POI는 임상 수술의 효과와 유사한 장 조작(IM)에 의해 외과적으로 유도되었습니다. 가짜 그룹에서는 IM 없이 절개가 이루어졌습니다. POI 마우스는 POI 수술 후 24시간 동안 가짜 대조군 마우스와 함께 희생되었습니다. 소화관의 중요한 기능인 내용물 전달 기능은 FITC-덱스트란의 위장에 의해 감지되었습니다. POI 모델은 소장의 근위부에서 FITC 강도가 증가했기 때문에 성공적인 것으로 간주되었습니다(그림 2B). 평균 GC는 IM의 통과 기능 장애를 정량화하고 작동의 일관성을 나타내기 위해 계산되었습니다(그림 2C).
HE 염색은 소화관의 여러 세그먼트의 형태를 나타냅니다(그림 3). 십이지장과 회장의 점막하층과 평활근층은 POI 유도 후 24시간 후에 부풀어 올랐습니다(그림 3A, B). 가짜 마우스와 비교했을 때, 십이지장을 염색한 결과 POI 마우스에서 면역 세포 침투가 증가한 것으로 나타났습니다(그림 3A).
다색 유세포 분석은 면역 세포의 비율, 상태 및 기능을 분석하기 위한 핵심 방법입니다. 장 조직을 콜라겐 분해 효소와 데옥시리보뉴클레아제로 소화하고 유세포 분석을 위해 단세포 현탁액으로 분리했습니다. 게이팅 전략은 LPL 중 CD3 T 세포 및 관련 하위 집단의 비율을 결정하는 데 사용되었습니다(그림 4A). POI 마우스에서는 활성화 및 부착 마커 CD69와 CD4 T 세포, CD8 T 세포 및 gd T 세포의 발현이 상향 조절됩니다(그림 4B)7. 마찬가지로, CD44+ PD-1+(활성화, 말단 분화 및 소진 마커) 하위 모집단의 비율은 증가하는 경향을 보였습니다(그림 4C)7. 림프구 외에도 IM 수술 후 골수성 세포 부분집합(호중구, 수지상 세포 및 대식세포)의 비율도 증가합니다(그림 4D)8.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig1v2.jpg"> 
그림 1: 수술 후 장폐색의 쥐 모델. (A) 수술 후 장폐색의 쥐 모델의 개략도. (B) 마취 및 면도 후 마우스 고정. (C) 절개 부위를 노출시키고 의료용 멸균 거즈로 덮었습니다. (D) 복부 절개를 통해 장관을 복강 밖으로 짜내어 멸균 거즈에 올려 노출시켰다. (E) 소장 전체를 축축한 멸균 면봉에 노출시켰다. (F) 근육층은 외과적 봉합사로 봉합되었다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig1v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig02v2.jpg"> 
그림 2: 소화관 기능 평가를 위한 위장관 통과 분석법. 수술 후 22.5시간에 가짜 또는 POI 마우스에 FITC-덱스트란 용액을 주입하고 90분 후에 희생했습니다. (A) 소화관은 15개의 부분으로 나뉘고 생리학적 위치에 따라 번호가 매겨졌습니다. (B) 가짜 마우스와 POI 마우스의 소화관에서 나온 모든 분절의 FITC 강도. (C) 투여된 FITC-덱스트란의 기하학적 중심을 계산하여 바이올린 플롯으로 표시했습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig03.jpg"> 
그림 3: POI 마우스의 소장의 대표적인 HE 염색. 가짜 마우스와 POI 마우스의 (A) 십이지장과 (B) 회장의 단면을 염색하는 HE. 스케일 바: 100 μm 또는 25 μm(삽입 이미지 확대). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig04.jpg"> 
그림 4: POI 마우스의 소장 면역 세포에 대한 대표적인 유세포 분석. (A) 수술 24시간 후 POI 마우스의 소장 조직에서 T 세포 집단에 대한 유세포 분석 게이팅 전략. (B) 가짜 마우스와 POI 마우스의 소장에서 CD4 T 세포, CD8 T 세포 및 gd T 세포에서 T 세포 활성 마커 CD69+의 비율. (C) 가짜 마우스와 POI 마우스의 소장에서 CD4 T 세포, CD8 T 세포 및 gd T 세포 중 CD44+ PD-1+ 활성 마커의 비율. (D) 가짜 마우스와 POI 마우스의 소장에서 CD45+ 아쿠아 살아있는 면역 세포 중 호중구(Ly6G+, CD11b+), 수지상 세포(CD11c+, MHC-II+) 및 대식세포(CD11b+, F4/80+)의 비율. 각 패널의 숫자는 각 셀 유형의 백분율을 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI ...

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

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수술 후 장폐색 (POI)가 증가 병적 상태와 장시간 입원으로 이어지는 복부 수술의 합병증입니다. 예방 또는 치료 전략이 심화 연구를 부족하기 때문에하는 것은 필요합니다. 따라서 우리는 POI의 pathophysiology를 조사하고 잠재적 인 치료 옵션을 연구하기위한 표준화하고 실현 가능한 마우스 모델을 만들었습니다.

장 조작의 표준화 된 모델의 분석 : 쥐의 장 운동성 및 내장 벽의 염증의 기능 평가

이 비디오는 쥐 모델에서 장 절제에 대한 자세한 프로토콜을 설명합니다. 이 기술은 쥐 장에서 회장절제술로 인한 담즙 흡수 장애, 과다 축적 및 독성에 대한 통찰력을 제공합니다.

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배우세요 쥐에서 장 조작을 통해 수술 후 장폐색 모델을 수립하는 방법을. 이 프로토콜은 장 면역 및 병태생리학 연구와 새로운 항염증 치료법 개발에 활용됩니다.

수술 후 장폐색 쥐 모델

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