Name: 스트렙타비딘 기반 생물층 간섭계를 사용한 DNA-단백질 상호작용 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: 배우세요 생물층 간섭계(BLI)를 사용한 DNA-단백질 상호작용 분석 방법입니다. 이 기법은 replication protein A와 단일가닥 DNA의 결합 친화도를 실시간으로 측정하여 단백질 동역학 연구에 활용됩니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>Label-Free 방법을 사용한 RPA-ssDNA 결합 동역학의 정량 분석

<table><tbody><tr><td>0.5mL 마이크로 원심분리기 튜브</td><td>Globe Scientific</td><td>111554A</td><td></td></tr><tr><td>96웰 스탠다드 블랙 마이크로플레이트</td><td>Dot Scientific</td><td>4ti-0223</td><td></td></tr><tr><td>비오틴화 폴리 dT 올리고뉴클레오티드</td><td>IDT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민(BSA)</td><td>시그마-알드리치</td><td>A2153-10G</td><td></td></tr><tr><td>디티오트레이톨(DTT)</td><td>도트 사이언티픽</td><td>DSD11000-10</td><td></td></tr><tr><td>에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA)</td><td>Dot Scientific</td><td>DSE57020-500</td><td></td></tr><tr><td>염산&nbsp;</td><td>피셔 사이언티픽&nbsp;</td><td>A144-500</td><td></td></tr><tr><td>Kimtec 과학 Kimwipes&nbsp;</td><td>Kimtech</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Octet N1 소프트웨어</td><td>Sartorius&nbsp;</td><td>1.4.0.13</td><td></td></tr><tr><td>Octet SA 바이오센서&nbsp;</td><td>싸토리우스&nbsp;</td><td>18-5019</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.2 (10x)</td><td>Gibco</td><td>1666711</td><td></td></tr><tr><td>개인 분석 Octet N1 시스템</td><td>Sartorius&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인산&nbsp;</td><td>Ward's Science</td><td>470302-024</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨 (NaCl)</td><td>Dot Scientific</td><td>DSS23020-5000</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Dot Scientific</td><td>DST60040-5000</td><td></td></tr><tr><td>Tween20&nbsp;</td><td>바이오 라드</td><td>170-6531</td><td></td></tr></tbody></table>

스트렙타비딘 기반 생물층 간섭계를 사용한 dna-단백질 상호작용 분석

Analyzing DNA-Protein Interactions with Streptavidin-Based Biolayer Interferometry

BLI에서 백색광은 생물층/버퍼의 계면 및 분광계에 대한 내부 참조 계면에서 반사됩니다. 결과 간섭 패턴이 기록되고 스펙트럼 이동이 일정 기간 동안 측정되고 nm 단위의 결합 곡선 응답으로 표시됩니다. 분석물 결합이 있거나 없는 바이오센서 팁과 해당 스펙트럼 파장 이동(nm)을 보여주는 대표적인 그림이 그림 1에 나와 있습니다. 결합 곡선은 그림 2와 같이 기준선, 미끼 적재 및 분석물 결합에 따른 분석물 해리에 해당합니다.
이 분석을 위해 BLI kinetics buffer는 프로토콜에 언급된 대로 준비되었으며 3'Bio-ss-poly(dT)32 스톡 및 RPA 단백질 스톡을 만드는 데 사용되었습니다. 분석 전반에 걸쳐 모든 희석액에 동일한 완충액을 사용하는 것이 좋습니다. 스트렙타비딘 바이오센서를 실온에서 BLI 동역학 완충액으로 수화한 다음 기본 동...

스트렙타비딘 기반 생물층 간섭계를 사용한 DNA-단백질 상호작용 분석

Protein-DNA interactions underpin essential cellular processes. Understanding these interactions is critical for elucidating the molecular mechanisms of ...

analyzing-dna-protein-interactions-with-streptavidin-based-biolayer

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

이 동영상에서는 리간드와 표적 분석물 간의 분자간 상호 작용을 실시간으로 검출하는 BLI(Biolayer Interferometry) 기술을 시연합니다. BLI는 용액 내 분석물과 상호 작용할 때 바이오센서 표면의 고정된 리간드 층에서 반사된 백색광의 간섭 패턴 변화를 측정합니다.

리간드와 분석물 간의 상호 작용을 감지하기 위한 Biolayer Interferometry 기술

여기에 프로토콜은 바이오 층 간섭과 단백질 - 단백질 상호 작용의 운동 분석을 설명합니다. 셀룰러 에너지 대사에 관여 F 형 ATP 합성 효소는, 세균에서의 ε 서브 유닛에 의해 억제 될 수있다. 우리는 ε의 억제 C-말단 도메인과 촉매 복합체의 상호 작용을 연구하는 바이오 층 간섭을 채택했다.

단백질 - 단백질 상호 작용 및 알로 스테 릭 리간드 효과의 속도론을 측정하는 바이오 층 간섭

여기에서 우리는이 광학적으로 포획 된 마이크로 스피어 사이 일시 중지 하나의 DNA 분자와 상호 작용하는 하나의 형광 표지 단백질 분자를 검출하기위한 장비 및 방법에 대해 설명합니다.

단백질-DNA 상호 작용의 연구에 대한 단일 분자 조작 및 이미지를 결합

여기 선물이 조립과 해체 biolayer 간섭계 (씨)를 사용 하 여 탄 저 균 독 소의 모니터링 하는 프로토콜. 조립/분해 바이오 센서 표면에, 다음 큰 단백질 복합물 시각화 및 각각 전자 현미경 검사 법 및 질량 분석를 사용 하 여 단지의 구성 요소 식별에 대 한 표면에서 해제 됩니다.

동적 단백질 복합물 분석에 조립 하 고 질량 분석 및 전자 현미경을 사용 하 여 Biolayer 간섭계 바이오 센서에서 발표

RNA 중합효소와의 전사 인자 (TFs)의 상호 작용은 일반적으로 풀다운 검정을 사용하여 연구됩니다. 우리는 클라미다이얼 RNA 폴리머라제와 GrgA의 상호 작용을 특성화하기 위해 생체층 간섭측정기(BLI) 기술을 적용합니다. 풀다운 분석과 비교하여 BLI는 실시간 연결 및 해리를 감지하고 더 높은 감도를 제공하며 정량적입니다.

전사에서 단백질-단백질 상호 작용을 연구하기 위한 생체층 간섭측정기(BLI) 적용

구조적 유연성은 단백질 기능에 중요한 역할을한다. 여기서, 우리는 주문과 무질서 단백질의 기능을 구동 급속한 구조적 변화를 프로빙 수소 - 중수소 교환 결합 시분 전기 분무 이온화 질량 분석법의 사용을 설명합니다.

시간 해결 전기 분무 이온화 수소 - 중수소 교환 질량 분석 단백질 구조와 역학 연구를위한

이 프로토콜은 기능적 미토콘드리아 전자 수송 사슬 복합체 (Cx) IV와 그 복합체 (supercomplexes)의 분리를 기술하여 네이티브 전기 영동을 사용하여 어셈블리 및 구조에 대한 정보를 나타냅니다. 네이티브 젤은 면역 블로 팅 (immunoblotting), 겔 (in-gel) 분석법, 전기 분해 (electroelution)로 정제하여 개별 복합체를 추가로 특성 분석 할 수 있습니다.

네이티브 전기 영동, In-gel Assay 및 Electroelution으로 미토콘드리아 전자 수송 사슬의 수퍼 콤플렉스 분석

선물이 바이오 폴딩 및 바인딩 차동 스캐닝 열 량 측정을 사용 하 여 thermolabile ligands와의 상호 작용의 신속한 특성화에 대 한 프로토콜.

바이오 DSC 프로필 Thermolabile Ligands 빠르게 폴딩 및 바인딩 상호 작용의 특성을 측정

여기에 프로토콜 작은 분자 지질 ligand phosphatidylinositol 4, 5 bisphosphate (핍2)을 정제 hEAG1 이온 채널 단백질의 상호 작용을 설명합니다. 측정 씨 소설 작은 분자 이온 채널 ligand 심사에 대 한 잠재적인 방법이 될 수 보여 줍니다.

바이오-레이어 간섭계 분석 결과 의해 작은 분자와 이온 채널 단백질의 상호 작용 활동을 캡처

사이트 지시 된 mutagenesis deoxyribonucleic 산 (DNA) 특정 돌연변이 소개 하는 기술 이다. 이 프로토콜 사이트 감독 mutagenesis 2 스텝을 수행 하는 방법을 설명 하 고 3 단계 중 합 효소 연쇄 반응 (PCR) 기반 접근, 관심의 모든 DNA 조각에 적용 됩니다.

사이트 감독 Mutagenesis에 대 한 생체 외에서 그리고 Vivo 실험 대장균 RNA 상호 Exemplified에서

배우세요 생물층 간섭계(BLI)를 사용한 DNA-단백질 상호작용 분석 방법입니다. 이 기법은 replication protein A와 단일가닥 DNA의 결합 친화도를 실시간으로 측정하여 단백질 동역학 연구에 활용됩니다.

스트렙타비딘 기반 생물층 간섭계를 사용한 DNA-단백질 상호작용 분석

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