CRISPR-Based Modular Assembly for High-Throughput Construction of a UAS-cDNA/ORF Plasmid Library

Si Xu; Mengyu Chen; Guang Chen; Si Luo; Wen Xue; Xuelian Liu; Jiwu Wang; Ping Wei

doi:10.3791/66581

UAS-cDNA/ORF Plasmid Library의 고처리량 구축을 위한 CRISPR-based Modular Assembly

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Genetics

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CRISPR-Based Modular Assembly for High-Throughput Construction of a UAS-cDNA/ORF Plasmid Library

UAS-cDNA/ORF Plasmid Library의 고처리량 구축을 위한 CRISPR-based Modular Assembly

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05:30 min

May 17, 2024

DOI: 10.3791/66581-v

Si Xu*^1,2, Mengyu Chen*^1,2, Guang Chen^1,3, Si Luo⁴, Wen Xue^1,2, Xuelian Liu^1,2, Jiwu Wang^1,2,3, Ping Wei⁴

¹Clinical Research Institute, The Affiliated Nanhua Hospital, Hengyang Medical School,University of South China, ²Department of Neurology, The Affiliated Nanhua Hospital, Hengyang Medical School,University of South China, ³Department of Clinical Laboratory, The Affiliated Nanhua Hospital, Hengyang Medical School,University of South China, ⁴Shanghai Diabetes Institute, Shanghai Key Laboratory of Diabetes Mellitus, Shanghai Clinical Center for Diabetes,Shanghai Sixth People's Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University School of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

공개적으로 사용 가능한 cDNA/ORF 리소스를 사용하여 Drosophila 에서 UAS-cDNA/ORF 플라스미드 라이브러리의 고처리량 구축 방법인 CRISPR-based modular assembly (CRISPRmass)를 위한 프로토콜을 제시합니다. CRISPRmass는 다양한 플라스미드 라이브러리 편집에 적용할 수 있습니다.

기능적 게놈 스크리닝은 유전자 기능을 조사하기 위한 강력한 접근법을 제공하며, 게놈 전반의 플라스미드 라이브러리의 구축에 의존합니다. plasmid library 구축을 위한 기존의 접근법은 시간과 노력이 많이 듭니다. 이 질문을 해결하기 위해 우리는 간단하고 효율적인 방법인 CRISPR 기반 모듈식 어셈블리(CRISPRmass)를 개발합니다.

CRISPR/Cas9에 의한 cDNA 또는 ORF 플라스미드의 공유 벡터 염기서열 절단과 인접 어셈블리에 의한 UAS 모듈의 후속 삽입을 통해 CRISPRmass에 의한 게놈 전체 플라스미드 라이브러리 구축 절차는 세균 형질전환 전 대규모 병렬 2단계 시험관 반응으로 표준화됩니다. CRISPRmass를 사용하면 다양한 플라스미드 라이브러리를 간단하고 빠르며 효율적이며 비용 효율적으로 구축할 수 있습니다. 또한 일반적으로 다양한 게놈 전체 플라스미드 라이브러리를 편집하는 데 적용할 수 있으며, 고처리량 플라스미드 라이브러리 편집에서 게이트웨이 기술의 대안으로 생물학적 네트워크에 대한 글로벌 연구를 위한 길을 닦고 있습니다.

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