Name: 합성 세포 구축을 위한 Cell-Free 단백질 합성 시스템 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: 배우세요 합성 세포 구축을 위한 Cell-Free 단백질 합성 시스템으로 다양한 미세구획 환경에서 단백질을 합성하는 방법입니다. 이 프로토콜은 미세유체 장치와 생체적합성 재료를 활용하여 연구자들이 최소 세포 구축을 위한 모듈형 세포 모방 시스템을 개발하는 데 기여합니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>Micro-Compartmentalized Synthetic Cells를 위한 CFPS 프로토콜

<table><tbody><tr><td>1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DOPC)</td><td>아반티</td><td>850375P</td><td></td></tr><tr><td>1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포-L-세린(나트륨염)(DOPS)</td><td>아반티</td><td>840035P</td><td></td></tr><tr><td>1,4 디티오트레이톨(DTT)</td><td>시그마-알드리치</td><td>1.11474</td><td></td></tr><tr><td>1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC)</td><td>아반티</td><td>850457P</td><td></td></tr><tr><td>3,5-사이클릭 AMP (cAMP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9501</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 튜브</td><td>Eppendorf</td><td>Eppendorf 튜브 바이오 기반</td><td></td></tr><tr><td>50% 과산화수소</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>516813</td><td></td></tr><tr><td>아세테이</td>트 <td>Sigma-Aldrich</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>한천 분말</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>05040</td><td></td></tr><tr><td>Alanin</td><td>시그마-알드리치</td><td>A4349</td><td></td></tr><tr><td>아미콘 교반 세포</td><td>머크밀리포어</td><td>UFSC05001</td><td></td></tr><tr><td>암모늄 아세테이트(NH4OAc)</td><td>시그마-알드리치</td><td>A7262</td><td></td></tr><tr><td>아르기닌</td><td>시그마-알드리치</td><td>A4474</td><td></td></tr><tr><td>아스파라긴</td><td>시그마-알드리치</td><td>A0884</td><td></td></tr><tr><td>아스파타트</td><td>시그마-알드리치</td><td>A5474</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>Roche</td><td>11140965001</td><td></td></tr><tr><td>Atto 488 DOPE</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>67335</td><td></td></tr><tr><td>Atto 647N DOPE</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>42247</td><td></td></tr><tr><td>배플 삼각 플라스크</td><td>Shuniu</td><td>250 mL, 1000mL</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민(BSA)</td><td>Roche</td><td>10711454001</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Eppendorf</td><td>Eppendorf Tubes 3810X</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugetube rack</td><td>Eppendorf</td><td>0030119819</td><td></td></tr><tr><td>화학발광 및 상피 형광 이미징 시스템</td><td>Uvitec</td><td>Alliance Q9 Advanced</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>288306</td><td></td></tr><tr><td>Confocal Laser Scanning Microscopy (LSM)</td><td>ZEISS</td><td>LSM 780</td><td></td></tr><tr><td>Countess Cell Counting Chamber Slides</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C10283</td><td></td></tr><tr><td>Coverslip</td><td>Thermo Scientific</td><td>Menzel BB02400500A113MNZ0</td><td></td></tr><tr><td>크레아틴 키나아제(CK)</td><td>로슈</td><td>10127566001</td><td></td></tr><tr><td>크레아틴 인산염(CP)</td><td>시그마-알드리치</td><td>10621714001</td><td></td></tr><tr><td>배양 접시</td><td>Huanqiu</td><td>90mm</td><td></td></tr><tr><td>시스테인</td><td>시그마-알드리치</td><td>C5360</td><td></td></tr><tr><td>시티딘 5'-트리포스페이트 디소듐 염(CTP)</td><td>알라딘</td><td>C101487</td><td></td></tr><tr><td>투석막</td><td>스펙트럼</td><td>표준 RC 튜빙 MWCO: 12-14 kD</td><td></td></tr><tr><td>E.Z.N.A. 사이클 퓨어 키트</td><td>Omega Bio-Tek</td><td>D6492-01</td><td></td></tr><tr><td>전기 가열 대기 온도 경운기</td><td>Yiheng 기기</td><td>DHP-9602</td><td></td></tr><tr><td>에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)</td><td>바이오샤프</td><td></td><td></td>1100027</tr><tr><td>형광판 판독기</td><td>BioTek</td><td>Synergy 2</td><td></td></tr><tr><td>불소화 오일</td><td>Suzhou CChip 과학 기기</td><td>2%HFE7500</td><td></td></tr><tr><td>Folinic acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47612</td><td></td></tr><tr><td>French Press</td><td>G.Heinemann</td><td>HTU-DIGI-Press</td><td></td></tr><tr><td>포도당</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>글루타마트</td><td>시그마-알드리치</td><td>G5667</td><td></td></tr><tr><td>글루타민</td><td>시그마-알드리치</td><td>G5792</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>시그마-알드리치</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>글리신</td><td>시그마-알드리치</td><td>G7126</td><td></td></tr><tr><td>구아노신 5'-트리포스페이트 나트륨 염 수화물(GTP)</td><td>로슈</td><td>10106399001</td><td></td></tr><tr><td>헤페스</td><td>시그마-알드리치</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>HiPrep Q FF 16/10</td><td>Cytiva</td><td>28936543</td><td></td></tr><tr><td>Histidin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6034</td><td></td></tr><tr><td>이소류신</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5281</td><td></td></tr><tr><td>Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5502</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8281</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>Leucin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L6914</td><td></td></tr><tr><td>Lysin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L5501</td><td></td></tr><tr><td>마그네슘 아세테이트 사수화물(Mg(OAc)2) )</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5661</td><td></td></tr><tr><td>염화마그네슘(MgCl2)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2670</td><td></td></tr><tr><td>Methionin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8439</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기</td><td>Eppendorf</td><td>5424 R</td><td></td></tr><tr><td>미네랄 오일</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5904</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra Cell Systems</td><td>Bio-Rad</td><td>1645050</td><td></td></tr><tr><td>Multipurpose Centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5810 R</td><td></td></tr><tr><td>NaN3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>핵산 및 단백질 UV 분석 측정</td><td>IMPLEN</td><td>NanoPhotometer N60</td><td></td></tr><tr><td>Transfection 등급 플라스미드용 NucleoBond Xtra Maxi 키트 DNA</td><td>MACHEREY-NAGEL</td><td>740414.5</td><td></td></tr><tr><td>Nunc-Immuno MicroWell 96웰 폴리스티렌 플레이트</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8616</td><td></td></tr><tr><td>PCR Thermal Cycler</td><td>Eppendorf</td><td>Mastercycler nexus</td><td></td></tr><tr><td>Peptone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>83059</td><td></td></tr><tr><td>페닐알라닌</td><td>- 시그마 - 알드리치</td><td>P8740</td><td></td></tr><tr><td>포스 포엔 피루뱃 (PEP)</td> <td>GLPBIO</td><td>GC44635</td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>PMSF - RO</td><td></td></tr><tr><td>폴리에틸렌 글리콜 8000 (PEG 8000)</td> <td>시그마 - 알드리치</td><td>89510</td><td></td></tr><tr><td>칼륨 아세테이트 (KOAc)</td> <td>시그마 - 알드리치</td><td>P5708</td><td></td></tr><tr><td>염화칼륨 ( KCl)</td><td>시그마-알드리치</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>글루타민산칼륨(K-글루타메이트)</td><td>시그마-알드리치</td><td>G1501</td><td></td></tr><tr><td>수산화칼륨(KOH)</td><td>시그마-알드리치</td><td>221473</td><td></td></tr><tr><td>프롤린</td><td>시그마-알드리치</td><td>P8865</td><td></td></tr><tr><td>피루브산 키나아제(PK)</td><td>시그마-알드리치</td><td>P9136</td><td></td></tr><tr><td>세린</td><td>시그마-알드리치</td><td>S4311</td><td></td></tr><tr><td>셰이커</td><td>Zhichushakers</td><td>ZQZY-AF8</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨 (NaCl)</td> <td>시그마 - 알드리치</td><td>S5886</td><td></td></tr><tr><td>수산화 나트륨 (NaOH)</td> <td>시그마 - 알드리치</td><td>S5881</td><td></td></tr><tr><td>설탕</td><td>알라딘</td><td>S112226</td><td></td></tr><tr><td>황산</td><td>시그마 알드리치</td><td>339741</td><td></td></tr><tr><td>주사기 필터</td><td>Jinteng</td><td>0.45 μ m</td><td></td></tr><tr><td>시험관</td><td>Shuniu</td><td>20 mL</td><td></td></tr><tr><td>TGX FastCast 아크릴아미드 키트, 12%</td><td>Bio-Rad</td><td>#1610175</td><td></td></tr><tr><td>ThermoMixer</td><td>Eppendorf</td><td>ThermoMixer C</td><td></td></tr><tr><td>트레오닌</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8441</td><td></td></tr><tr><td>Tris base</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900483</td><td></td></tr><tr><td>tRNA</td><td>Roche</td><td>10109550001</td><td></td></tr><tr><td>트립톤</td>, <td>시그마-알드리치</td>, <td>T7293</td><td></td></tr>, <tr><td>트립토판</td><td>, 시그마-알드리치</td>, <td>T8941</td><td></td></tr>, <tr><td>티로신</td><td>, 시그마-알드리치</td>, <td>T8566</td><td></td></tr>, <tr><td>UTP, 트리소듐 염(UTP)</td><td>알라딘</td><td>U100365</td><td></td></tr><tr><td>순환 수계가 있는 진공 펌프</td>, <td>정저우, Greatwall, Scientific, 산업 및 무역 Co.Ltd</td><td>SHB-<img alt="방정식 1" src="/files/ftp_upload/66626/66626eq01.jpg" style="margin: auto; "></td><td></td></tr><tr><td>Valin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V4638</td><td></td></tr><tr><td>Vortex Mixers</td><td>Kylin-Bell</td><td>Vortex QL-861</td><td></td></tr><tr><td>정수 시스템</td><td>MerckMillipore</td><td>Direct 초순수(Type 1)</td><td></td></tr><tr><td>효모 추출물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70161</td><td></td></tr><tr><td>β-메르캅토에탄올</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>444203</td><td></td></tr></tbody></table>

합성 세포 구축을 위한 cell-free 단백질 합성 시스템

Cell-Free Protein Synthesis System for Building Synthetic Cells

세포 추출물 및 T7 RNA 중합효소의 새로운 배치마다 CFPS 시스템의 최적 성능을 보장하기 위해 Mg2+ 및 K+ 농도 모두에 대한 기본 스크리닝을 수행하는 것이 좋습니다. 슈퍼폴더 GFP의 형광은 그림 1A,B와 같이 다양한 조건에서 CFPS 시스템의 전체 수율을 나타내는 지표 역할을 할 수 있습니다. 또한, 서로 다른 구획에 걸친 CFPS 시스템의 병렬 수율 비교가 그림 1C에 나와 있으며, 이는 잠재적으로 sucrose46의 영향으로 인해 GUV가 약간 감소하긴 하지만 캡슐화된 CFPS 시스템에서 일관된 성능을 보여줍니다. 또한 CFPS 반응은 액적(그림 2), GUV(그림 3) 및 SLB(그림 4) 상단에 성공적으로 캡슐화되었습니다.
그림 2A 는 오일 용액이 난류가 될 때 분명한 에멀젼 방울의 형성을 보여줍니다. 녹색/적색 형광 단백질(GFP 및 mCherry)의 발현은 컨포칼 레이저 스캐닝 현미경을 사용하여 캡처했습니다. 그림 3 은 간단한 에멀젼 전달 공정을 통해 GUV 내에서 CFPS 반응을 캡슐화하는 데 성공한 것을 보여줍니다. 빨간색 채널은 라벨링된 지질을 나타냅니다. 녹색 채널은 상위 폴더 GFP의 표현을 보여주었습니다. 노란색 채널은 불활성 형광 염료를 나타냅니다. 그림 4A 는 CFPS 반응이 증착될 수 있는 SLB 챔버를 보여줍니다. 이 챔버 내에서 유리 커버슬립 위에 SLB를 형성하고 CFPS 반응 혼합물을 사전 성형된 SLB 위에 배치하여 컨포칼 레이저 스캐닝 현미경을 통한 이미징을 가능하게 했습니다. 그림 4B에서 볼 수 있듯이 SLB는 녹색으로 표시된 라벨링된 지질로 시각화되었으며, mCherry와 융합된 발현된 작은 GTPase Cdc42는 자홍색으로 표시되었습니다. mCherry-Cdc42의 현장 발현은 현미경으로 가역적 멤브레인 표적화 공정과 함께 관찰할 수 있었습니다. 그러나, 사용된 CFPS 시스템은 최근 간행물47에 자세히 설명된 바와 같이 프레닐화 기계로 보완되었습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig01.jpg"> 그림 1: CFPS 시스템의 최적화 및 비교. CFPS 시스템에 대한 (A) Mg2+ 농도 및 (B) K+ 농도를 대량으로 스크리닝합니다. (C) 다양한 구획에서 단백질 발현 수율을 보여주는 막대 차트. 슈퍼폴더 GFP의 형광은 플레이트 리더 또는 컨포칼 레이저 스캐닝 현미경으로 측정한 CFPS 시스템의 수율을 결정하는 데 사용되었습니다. 약어: CFPS = cell-free protein synthesis; GFP = 녹색 형광 단백질; sfGFP = 상부 폴더 GFP; GUV = 거대 단층 소포; SLB = supported lipid bilayer(지원되는 지질 이중층). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig02.jpg"> 그림 2: 액적에서의 무세포 단백질 합성. (A) 계면활성제 안정화 유중수(water-in-oil) 방울에서 캡슐화된 CFPS 반응의 사진. (B) 컨포칼 레이저 스캐닝 현미경으로 시각화된 액적에 캡슐화된 (C) mCherry 및 (D) 슈퍼폴더 GFP의 CFPS의 명시야 및 (C,D) 형광 이미지. Superfolder GFP는 녹색으로 표시됩니다. mCherry는 자홍색으로 표시됩니다. 스케일 바 = 20 μm. 약어: CFPS = cell-free protein synthesis; GFP = 녹색 형광 단백질. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig03.jpg"> 그림 3: GUV의 무세포 단백질 합성. (A) GUV의 캡슐화된 CFPS 반응 사진. (비-디) POPC GUV 내에 캡슐화된 CFPS의 형광 이미지로, 슈퍼폴더 GFP를 표현합니다. (B) 지질 이중층은 빨간색으로 표시된 0.05% 표지된 Atto647N-DOPE 지질, (C) 노란색으로 표시된 불활성 염료, (D) 상부폴더 GFP로 표시되었습니다. 스케일 바 = 20 μm. 약어: CFPS = cell-free protein synthesis; GFP = 녹색 형광 단백질; GUV = 거대 단층 소포; POPC = 1-팔미토일-2-올레오일-글리세롤-3-포스포콜린; DOPE = 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig04.jpg"> 그림 4: SLB 상부에 있는 작은 GTPase 단백질-Cdc42의 무세포 단백질 합성. (A) 컨포칼 레이저 스캐닝 현미경으로 시각화한 SLB에서 Cdc42의 막 표적화 및 RhoGDI 종속 막 추출의 재구성에 대한 개략도. 프레닐화 기계는 프레닐화효소-농축 추출물을 통해 구현되었으며, 이는 다른 곳에서 자세히 설명되었습니다. 47. (B) SLB 상부에 있는 반응 혼합물의 사전 및 사후 프레닐화에 대한 직교도. (씨,디) (C) 멤브레인 타겟팅 및 (D) 멤브레인 추출 중 멤브레인(분홍색) 및 용액(검은색)에 대한 mCherry-Cdc42 강도의 시계열. 스케일 바 = 10 μm. (A-D)는 Kai et al.47에서 수정되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
표 1: 버퍼 목록. 참고: 사용 직전에 β-메르캅토에탄올과 DTT를 첨가하십시오. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%201_rev.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
표 2: Mg2+ 농도 스크리닝을 위한 피펫팅 계획. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%202_rev.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
표 3: K+ 농도 스크리닝을 위한 피펫팅 방식. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%203_rev.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
표 4: 내부 용액 조성. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%204_rev.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
표 5: 외부 용액 조성. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%205_rev.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
표 6: 프리너 용액 조성. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%206_rev.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

합성 세포 구축을 위한 Cell-Free 단백질 합성 시스템

The Cell-Free Protein Synthesis (CFPS) system has been widely employed to facilitate the bottom-up assembly of synthetic cells. It serves as the host for ...

cell-free-protein-synthesis-system-for-building-synthetic-cells

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

이 5 일간의 프로토콜은 모든 단계, 장비 및 기반의 효율적인 내생 대장균 처음부터 TX-TL의 무 세포 발현 시스템을 구축 및 실행에 필요한 추가 소프트웨어를 설명합니다. 시약, 프로토콜은 8 셋업 시간 이하의 반응, 수집, 및 프로세스 데이터를 걸린다.

구현을위한 프로토콜 대장균을 바탕으로 TX-TL의 무 세포 발현 시스템

여기에서 우리는 소포, 전사 및 번역 기계 캡슐, 단백질 생산의 모니터링 준비를위한 간단한 방법을 설명합니다. 그 결과 세포가없는 시스템은 점점 더 복잡 해지는 세포의 모방을 구축하기 시작 지점으로 사용할 수 있습니다.

휴대 모방 자의 건설을위한 소포는의 셀이없는 전사 및 번역 기계의 캡슐화

우리는 봄에는에 셀 무료 유전자 식 실험을 수행 하기 위해 사용 될 수 있는 표면에 유전자 길이 DNA 분자의 동원 정지에 대 한 간단한 석판 절차를 설명 합니다.

다단계 가닥 변위 리소 그래피를 사용 하 여 유전자의 기능 표면-동원 정지

이 프로토콜 세부 단계, 비용, 그리고 대장균을 생성 하는 데 필요한 장비-셀 추출 물 및 단백질 합성 반응을 시험관에서 4 일 안에 구현. 광범위 한 응용 프로그램에 대 한이 플랫폼의 유연한 특성을 활용 하 여 우리는 적응 되 고 최적화 될 수 있는 반응 조건 논의.

대장균-셀 무료 단백질 합성 기반: 강력 하 고 유연 하며 액세스할 수 있는 플랫폼 기술에 대 한 프로토콜

이 프로토콜은 RNA 및 단백질 생산 합성 세포의 상향식 준비를 위한 방법, 물질, 장비 및 단계를 설명합니다. 합성 세포의 내부 수성 구획은 지질 이중층(즉, 안정한 리포솜) 내에 캡슐화된 S30 세균 용해물을 함유하고, 수중 오일 에멀젼 전달 방법을 사용하였다.

세포가 없는 세균 추출물, 리포좀 및 에멀젼 전달을 사용하여 합성 세포를 생산하는 단백질 을 준비합니다.

표준 실험실 장비를 사용하여 재조합 PURE 세포 없는 TX-TL 시스템을 생산하는 빠르고 비용 효율적인 방법을 제시합니다.

원팟 퓨어 셀 프리 시스템

연구 결과는 복제하거나 살아있는 세포를 사용하지 않고 합성 유전자 단편에서 단백질 검열 캠페인을 위한 DNA의 큰 (μg-mg) 양을 만들기 위한 프로토콜을 기술합니다. 최소 템플릿은 효소적으로 소화되고 원형화된 다음, 이더스말 롤링 서클 증폭을 사용하여 증폭됩니다. 세포 없는 발현 반응은 불정제 된 제품으로 수행 될 수있다.

세포 없는 시스템을 사용하여 단백질 프로토타이핑을 위한 최소선형 템플릿의 증폭을 위한 신속하고 효소적인 방법

잘 특성화 된 유전 부분은 새로운 유전 회로의 설계에 필요합니다. 여기에서는 유전 부분을 신속하게 특성화하기 위한 비용 효율적이고 처리량이 높은 방법을 설명합니다. 당사의 방법은 무세포 용해물, 복제를 방지하기 위한 선형 DNA, 처리량을 늘리고 반응량을 줄이기 위한 음향 액체 처리를 결합하여 비용과 시간을 줄입니다.

무세포 시스템을 사용한 유전 부분의 신속한 특성 분석

이 연구는 에스케리치아 콜라이 (E. coli )에서 세포 추출물을 제조한 후 24 시간 이내에 무세포 단백질 합성 (CFPS) 반응을 설명합니다. 무세포 자동 유도 (CFAI) 프로토콜에 대한 설명은 연구자의 감독을 줄이고 얻은 세포 추출물의 양을 늘리기 위해 개선 된 내용을 자세히 설명합니다.

무세포 자동 유도 워크플로우를 사용하여 24시간 이내에 세포에서 무세포 단백질 합성까지

여기에 제시된 것은 대장 균 BL21 Rosetta2 (ΔrecBCD 및 ΔrecB)의 엑소 뉴 클레아 제 V 녹아웃 균주로부터 세포 추출물의 제조 및 완충액 교정을위한 프로토콜입니다. 이것은 선형 DNA 주형을 사용하는 무세포 단백질 합성 시스템에서 발현을 위한 빠르고 쉽고 직접적인 접근 방식입니다.

선형 DNA 주형을 활용한 엑소뉴클레아제 결핍 세포 추출물의 무세포 단백질 합성

우리는 배치 간 변동을 최소화하기 위해 세포 성장을 제어하는 데 중점을 두고 무세포 단백질 합성을 위한 OnePot '재조합 요소를 사용한 단백질 합성'(PURE) 시스템 및 조 리보솜의 생산을 위한 업데이트된 프로토콜을 제시합니다.

재현 가능한 무세포 단백질 합성을 위한 OnePot PURE 및 조류 리보솜 생산 개선

배우세요 합성 세포 구축을 위한 Cell-Free 단백질 합성 시스템으로 다양한 미세구획 환경에서 단백질을 합성하는 방법입니다. 이 프로토콜은 미세유체 장치와 생체적합성 재료를 활용하여 연구자들이 최소 세포 구축을 위한 모듈형 세포 모방 시스템을 개발하는 데 기여합니다.

합성 세포 구축을 위한 Cell-Free 단백질 합성 시스템

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