Name: 경미한 외상성 뇌 손상의 마우스 모델에서 혈액-뇌 장벽 파괴 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-18T13:05:00.000+00:00
Duration: 5 min 19 s
Description: 배우세요 경미한 외상성 뇌 손상 마우스 모델에서 혈액-뇌 장벽 파괴 평가 방법을. 이중 형광 염료를 활용해 BBB 손상 시점과 회복 과정을 정밀 분석하며 치료 효과를 평가합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>마우스의 혈액-뇌 장벽 파괴에 대한 형광 염료 기반 시각화

<ol><li>Sweeney, M. D., Zhao, Z., Montagne, A., Nelson, A. R., Zlokovic, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier%3A+From+physiology+to+disease+and+back%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier: From physiology to disease and back.</a> Physiol Rev. 99 (1), 21-78 (2019).</li>
<li>Kabu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blast-associated+shock+waves+result+in+increased+brain+vascular+leakage+and+elevated+ros+levels+in+a+rat+model+of+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Blast-associated shock waves result in increased brain vascular leakage and elevated ros levels in a rat model of traumatic brain injury.</a> PLoS One. 10 (5), e0127971(2015).</li>
<li>Kuriakose, M., Rama Rao, K. V., Younger, D., Chandra, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+and+spatial+effects+of+blast+overpressure+on+blood-brain+barrier+permeability+in+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Temporal and spatial effects of blast overpressure on blood-brain barrier permeability in traumatic brain injury.</a> Sci Rep. 8 (1), 8681(2018).</li>
<li>Yeoh, S., Bell, E. D., Monson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+blood-brain+barrier+disruption+in+primary+blast+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Distribution of blood-brain barrier disruption in primary blast injury.</a> Ann Biomed Eng. 41 (10), 2206-2214 (2013).</li>
<li>Readnower, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+blood-brain+barrier+permeability%2C+oxidative+stress%2C+and+activated+microglia+in+a+rat+model+of+blast-induced+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Increase in blood-brain barrier permeability, oxidative stress, and activated microglia in a rat model of blast-induced traumatic brain injury.</a> J Neurosci Res. 88 (16), 3530-3539 (2010).</li>
<li>Shetty, A. K., Mishra, V., Kodali, M., Hattiangady, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+dysfunction+and+delayed+neurological+deficits+in+mild+traumatic+brain+injury+induced+by+blast+shock+waves%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier dysfunction and delayed neurological deficits in mild traumatic brain injury induced by blast shock waves.</a> Front Cell Neurosci. 8, 232(2014).</li>
<li>Nishii, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evans+blue+and+fluorescein+isothiocyanate-dextran+double+labeling+reveals+the+precise+sequence+of+vascular+leakage+and+glial+responses+after+exposure+to+mild-level+blast-associated+shock+waves%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Evans blue and fluorescein isothiocyanate-dextran double labeling reveals the precise sequence of vascular leakage and glial responses after exposure to mild-level blast-associated shock waves.</a> J Neurotrauma. 40 (11-12), 1228-1242 (2023).</li>
<li>Hoffmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+and+low+molecular+weight+fluorescein+isothiocyanate+%28FITC%29-dextrans+to+assess+blood-brain+barrier+disruption%3A+Technical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">High and low molecular weight fluorescein isothiocyanate (FITC)-dextrans to assess blood-brain barrier disruption: Technical considerations.</a> Transl Stroke Res. 2 (1), 106-111 (2011).</li>
<li>Saunders, N. R., Dziegielewska, K. M., Møllgård, K., Habgood, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+for+blood-brain+barrier+integrity%3A+How+appropriate+is+Evans+blue+in+the+twenty-first+century+and+what+are+the+alternatives%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Markers for blood-brain barrier integrity: How appropriate is Evans blue in the twenty-first century and what are the alternatives.</a> Front Neurosci. 9, 385(2015).</li>
<li>Manaenko, A., Chen, H., Kammer, J., Zhang, J. H., Tang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+Evans+blue+injection+routes%3A+Intravenous+versus+intraperitoneal%2C+for+measurement+of+blood-brain+barrier+in+a+mice+hemorrhage+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison Evans blue injection routes: Intravenous versus intraperitoneal, for measurement of blood-brain barrier in a mice hemorrhage model.</a> J Neurosci Methods. 195 (2), 206-210 (2011).</li>
<li>Yen, L. F., Wei, V. C., Kuo, E. Y., Lai, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+patterns+of+cerebral+extravasation+by+Evans+blue+and+sodium+fluorescein+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Distinct patterns of cerebral extravasation by Evans blue and sodium fluorescein in rats.</a> PLoS One. 8 (7), e68595(2013).</li>
<li>Kawai, S., Takagi, Y., Kaneko, S., Kurosawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+three+types+of+mixed+anesthetic+agents+alternate+to+ketamine+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Anim%22%5BJournal%5D)">Effect of three types of mixed anesthetic agents alternate to ketamine in mice.</a> Exp Anim. 60 (5), 481-487 (2011).</li>
<li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+restraint+and+common+compound+administration+routes+in+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats.</a> J Vis Exp. 67, e2771(2012).</li>
<li>Satoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+hydrogen+prevents+social+deficits+and+depression-like+behaviors+induced+by+low-intensity+blast+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Molecular hydrogen prevents social deficits and depression-like behaviors induced by low-intensity blast in mice.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 77 (9), 827-836 (2018).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> J Vis Exp. 65, e3564(2012).</li>
<li>Selever, J., Kong, J. Q., Arenkiel, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+approach+to+high-resolution+fluorescence+imaging+in+semi-thick+brain+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A rapid approach to high-resolution fluorescence imaging in semi-thick brain slices.</a> J Vis Exp. 53, e2807(2011).</li>
<li>Jiao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+sensitive+antigen+retrieval+method+for+free-floating+and+slide-mounted+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple and sensitive antigen retrieval method for free-floating and slide-mounted tissue sections.</a> J Neurosci Methods. 93 (2), 149-162 (1999).</li>
<li>Nagaraja, T. N., Keenan, K. A., Fenstermacher, J. D., Knight, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+leakage+patterns+of+fluorescent+plasma+flow+markers+after+transient+focal+cerebral+ischemia+suggest+large+openings+in+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Acute leakage patterns of fluorescent plasma flow markers after transient focal cerebral ischemia suggest large openings in blood-brain barrier.</a> Microcirculation. 15 (1), 1-14 (2010).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+blood-brain-barrier+leakage+using+a+combination+of+Evans+blue+and+high+molecular+weight+fitc-dextran%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantifying blood-brain-barrier leakage using a combination of Evans blue and high molecular weight fitc-dextran.</a> J Neurosci Methods. 325, 108349(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10% 포르말린 중성 완충 용액</td><td>FUJIFILM Wako Chemicals</td><td>062-01661</td><td></td></tr><tr><td>Anti GFAP, Rabbit</td><td>DAKO-Agilent</td><td>IR524</td><td></td></tr><tr><td>Anti Iba1, Rabbit</td><td>FUJIFILM Wako Chemicals</td><td>019-19741</td><td></td></tr><tr><td>Chicken anti-Mouse IgG(H+L) 교차 흡착 2차 항체, Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21200</td><td></td></tr><tr><td>크라이오 마운트</td><td>Muto Pure Chemicals</td><td>33351</td><td>조직 동결 매체</td></tr><tr><td>Domitor</td><td>Orion Corporation</td><td></td><td>메데토미딘</td></tr><tr><td>당나귀 항토끼 IgG (H+L) 고교차 흡착 2차 항체, Alexa Fluor 546</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A10040</td><td></td></tr><tr><td>Evans Blue</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 24-웰 폴리스티렌 클리어 플랫 바텀 미처리 세포 배양 플레이트, 뚜껑 포함, 개별 포장, 멸균, 50/케이스</td><td>CORNING</td><td>351147</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescein isothiocyanate&ndash; 덱스트란 평균 mol wt 40,000</td><td>시그마-알드리치&nbsp;</td><td>FD40S</td><td>FITC-dextran</td></tr><tr><td>유리 베이스 디쉬 27mm (No.1 유리)</td><td>AGC TECHNO GLASS</td><td>3910-035</td><td>35 mm 유리 바닥 디쉬</td></tr><tr><td>IX83 반전 현미경</td><td>OLYMPUS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MAS 친수성 접착 현미경 슬라이드</td><td>Matsunami Glass</td><td>MAS-04</td><td></td></tr><tr><td>Matsunami&nbsp; 커버 유리(No.1)&nbsp; 18 x 18mm</td><td>마쓰나미 유리</td><td>C018181</td><td></td></tr><tr><td>미다졸람 주사 10mg [SANDOZ]</td><td>산도즈</td><td></td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드 EMPROV ESSENTIAL DAC</td><td>Merck Millipore</td><td>1.04005.1000</td><td></td></tr><tr><td>연동 펌프</td><td>ATTO</td><td>SJ-1211 II-H</td><td></td></tr><tr><td>RODENT BRAIN MATRIX Adult Mouse, 30g, Coronal</td><td>ASI INSTRUMENTS</td><td>RBM-2000C</td><td>브레인 슬라이서</td></tr><tr><td>Vetorphale</td><td>Meiji 동물 건강</td><td>VETLI5</td><td>부토르파놀</td></tr></tbody></table>

경미한 외상성 뇌 손상의 마우스 모델에서 혈액-뇌 장벽 파괴 평가

Evaluation of Blood-Brain Barrier Breakdown in a Mouse Model of Mild Traumatic Brain Injury

그림 1A 는 BSW의 시작과 관련된 염료 주입의 시간 경과를 보여주며, 최대 과압은 25kPa입니다. 'Post' 프로토콜에서 Evans blue solution은 FITC-dextran 관류 2시간 전에 혈관 내 투여되었으며, 이는 BSW 노출 후 6시간, 1일, 3일 및 7일 후에 수행되었습니다. 'Pre' 프로토콜에서 Evans 블루 용액은 BSW 노출 직전에 주입되었습니다. 'Post' 프로토콜에서 Evans blue의 농도는 관류 고정 약 2시간 전에 최대에 도달할 것으로 예상되는 반면, 'Pre' 프로토콜에서는 BSW 노출 시점 즈음에 최대에 도달할 것으로 예상됩니다(그림 1B). 뇌혈관 내 FITC-dextran의 농도는 관류 중 2분 동안 일정하게 유지되었습니다.
Evans 파란색 라벨링은 BBB 분해가 6시간 이내에 시작되어 BSW 노출 후 7일까지 계속되었음을 보여주었습니다(그림 2A). 특히, 'Pre' 프로토콜에서 3시간에 Evans 청색 염료 유출이 없었기 때문에 BSW 노출 직후 BBB 파괴가 발생하지 않았습니다(그림 2B). 놀랍게도, Evans blue를 사용한 장기 라벨링은 'Pre' 프로토콜에서 누적 특성을 나타냅니다(그림 2B)7.
각각 2시간 이상의 간격으로 도입된 두 가지 별개의 염료를 사용하여 분포를 비교하여 BBB 무결성의 시간적 변화를 조사할 수 있었습니다. 그림 3 은 Evans blue와 FITC-dextran의 분포에서 유의한 차이를 보인 절편의 형광 이미지를 보여줍니다.
다양한 크기의 수많은 형광 핫스팟이 관찰되었습니다. 일부 핫스팟은 픽셀의 상위 0.1%에 속할 만큼 충분히 밝았지만 대부분은 주변 조직보다 약간 더 밝았습니다. 염료 간의 불일치는 이 간격 내에서 변화가 발생했음을 시사합니다. Evans blue 형광만 표시하는 핫스팟은 Evans blue 주입 시 BBB 파괴가 진행 중임을 나타냈으며, 이는 나중에 FITC-dextran 주입으로 복구되었습니다. 대조적으로, FITC-dextran 형광만 보이는 핫스팟은 두 염료 주입 사이에 BBB 파괴가 발생했음을 시사합니다. 마지막으로, 두 염료에서 형광을 나타내는 핫스팟은 전체 주입 기간 동안 지속적인 BBB 파괴를 나타냈습니다.
그림 4A 는 Evans blue(Evans blue-only 및 Evans blue/FITC-dextran 이중 양성 핫스팟 모두 포함), FITC-dextran(FITC-dextran-only 및 Evans blue/FITC-dextran 이중 양성 핫스팟 모두 포함) 또는 두 염료(Evans blue/FITC-dextran 이중 양성 핫스팟만 포함)에 대해 양성인 핫스팟의 수를 나타냅니다. 3시간 시점의 'Pre' 프로토콜에서 수많은 FITC-덱스트란 전용 핫스팟이 관찰되었습니다. 'Post' 프로토콜에서 6시간 및 1일째에 Evans 블루 전용 및 FITC-덱스트란 전용 핫스팟이 모두 검출되었습니다. 그러나 'Post' 프로토콜에서 3일과 7일째에 핫스팟은 두 염료 모두에 대해 주로 양성이었습니다. 이러한 결과는 BBB 파괴가 3시간에 발생하고, 1일 후에 리모델링되었으며, BSW 노출 후 7일까지 지속되었음을 시사합니다(그림 4B). 중요한 것은 앞서 언급한 바와 같이 BBB 분해 정도가 7일 감소하는 경향이 있었다는 것입니다.
염료 유출 실험이 완료된 후, 슬라이스의 면역조직화학적 염색을 수행했습니다7. 면역조직화학 물질 이미지 스캔은 염료 유출의 이미지 스캔과 일관되게 비교되었으며, 형광 물질의 캐리오버 효과가 실질적으로 무시할 수 있는 수준임을 확인했습니다7. 그림 5에서 볼 수 있듯이, 반응성 성상세포의 클러스터는 BBB 파괴 부위와 밀접한 관련이 있었습니다. 추가 관찰에서는 활성화된 아메보이드 미세아교세포가 BSW 노출 3일 후 반응성 성상세포와 함께 존재한다는 사실이 밝혀졌습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig01.jpg"> 
그림 1: 실험 설계. (A) 실험의 시간 경과. Evans 블루 용액은 BSW 노출 후('Post' 프로토콜) 또는 직전('Pre' 프로토콜)에 정맥 주사한 반면, FITC-dextran은 고정 전 2분 동안 경심 관류했습니다. (B) 각각 'Post' 및 'Pre' 프로토콜에서 혈관 내 Evans blue 및 FITC-dextran의 예상 농도. BSW, 폭발 유도 충격파; FITC의 플루오레세인 이소티오시아네이트. 이 그림은 Nishii et al.7에서 발췌한 것입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig02.jpg"> 
그림 2: 뇌 절편의 형광 강도 비교. 뇌에서 가장 밝은 0.1%의 픽셀의 형광 강도를 12개 슬라이스 모두에 걸쳐 평가하고 '사후'(A)와 '사전'(B) 조건을 비교했습니다. 차이의 가변성과 중요성이 표시됩니다. XXX는 P &lt; 0.001을 나타냅니다. xxxx는 p &lt; 0.0001(F-test의 p 값)을 나타냅니다. *P &lt; 0.05; p &lt; 0.0001 (Dunnett의 다중 비교 사후 검정을 사용한 분산 분석). 이 그림은 Nishii et al.7에서 발췌한 것입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig03.jpg"> 
그림 3: Evans blue 및 FITC-dextran을 사용한 이중 라벨링을 사용하여 다양한 시점에서 관찰된 BBB 분석. Evans 파란색(자홍색), FITC-dextran(녹색) 및 병합된 이미지가 표시됩니다. 염료 주입 프로토콜은 왼쪽에 표시되어 있습니다. 일부 핫스팟은 Evans blue(화살표) 또는 FITC-dextran(화살촉)의 우세한 형광을 보였습니다. 별표는 맥락막신경총(choroid plexus) 및 관련 혈관을 나타냅니다. BBB, 혈액-뇌 장벽; FITC, 플루오레세인 이소티오시아네이트; CVO, 제3뇌실의 심실 주위 기관. 눈금 막대: 1mm. 이 그림은 Nishii et al.7에서 발췌한 것입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig04.jpg"> 
그림 4: 형광 핫스팟의 정량화. (A) Evans blue(자홍색), FITC-dextran(녹색) 및 두 염료(회색)에 대해 양성인 핫스팟 수. 'Pre' 프로토콜에서 3시간에 얻은 이미지와 'Post' 프로토콜에서 6시간, 1일, 3일 및 7일에 얻은 이미지로부터 수집되었습니다. 3시간에서 1일까지는 형광 핫스팟의 상당 부분이 염료 간 불일치를 보인 반면, 3일에서 7일까지는 이러한 불일치가 거의 관찰되지 않았습니다. (B) BBB 고장의 시간 경과를 요약한 계획. 세로축은 BBB 파괴로 인한 염료 누출의 강도를 개념적으로 나타냅니다. 3 시간에서 1 일까지의 지그재그 패턴은이 기간 동안 염료 누출의 위치와 강도가 불안정하다는 것을 나타냅니다. FITC, 플루오레세인 이소티오시아네이트; BBB, 혈액-뇌 장벽; BSW, 폭발로 인한 충격파. 이 그림은 Nishii et al.7에서 발췌한 것입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig05.jpg"> 
그림 5: GFAP와 Iba1이 각각 성상세포와 미세아교세포에 대한 마커로 발현. 그림의 각 열에는 GFAP 또는 Iba1 면역조직화학 이미지와 함께 Evans blue 또는 FITC-dextran을 사용한 염료 유출의 형광 이미지가 포함되어 있습니다. 색상 막대는 GRN 내의 형광 강도를 사용하여 Evans blue 및 FITC-dextran의 정규화된 형광 강도를 나타냅니다. 염료 주입 프로토콜은 왼쪽에 표시되어 있습니다. 'Pre' 프로토콜의 1일 슬라이스는 Evans blue와 FITC-dextran의 형광을 모두 보여주는 반면, 'Pre' 프로토콜의 3일 slice는 Evans blue(화살표)의 형광만 보여줍니다. 염료 유출 이미지에서 화살표로 표시된 영역은 면역조직화학 이미지와 일치합니다. 화살촉은 반응성 성상세포의 클러스터를 나타냅니다. 다클론 GFAP 항체는 백질 안팎뿐만 아니라 pia mater에 인접한 신경 조직에서도 성상세포를 표지했습니다. 결과적으로, dcw 내부 및 dcw에 가까운 성상세포가 이 그림에서 표지되어 있습니다. Iba1 열의 프레임 또는 화살표에 해당하는 확대된 이미지가 삽입에 표시됩니다. 스케일 바: 염료 유출 및 면역조직화학 이미지를 위한 각각 1mm 및 200μm. GFAP, 신경교섬유산성 단백질; Iba1, 이온화된 칼슘 결합 어댑터 분자 1; FITC, 플루오레세인 이소티오시아네이트; BSW, 폭발 유도 충격파; DCW, 깊은 대뇌 백질. 이 그림은 Nishii et al.7에서 발췌한 것입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Fluorescent dyes are used to determine the extent of dye extravasation that occurs due to blood-brain barrier (BBB) breakdown. Labeling with these dyes is ...

evaluation-blood-brain-barrier-breakdown-mouse-model-mild-traumatic

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

출처: Macheda, T., et. al. 마우스의 경미한 외상성 뇌 손상의 전자기 제어 폐쇄 머리 모델. J. Vis. Exp. (2022) 이 영상은 입체 프레임을 사용하여 마우스 모델에서 폐쇄 머리 부상을 유도하는 절차를 보여줍니다. 통제된 충격은 경미한 외상성 뇌 손상을 복제하여 연구원들은 부상 후 반사 신경과 행동을 측정하여 신경학적 영향과 회복을 연구할 수 있습니다.

마우스 모델에서 경미한 외상성 뇌 손상 유도

출처: Kuts, R. et al. 쥐의 운동 피질에서 레이저로 인한 뇌 손상. J. Vis. Exp. (2020)이 비디오는 쥐의 레이저 유도 뇌 손상 후 혈액 뇌 장벽(BBB) 무결성을 평가하는 방법을 보여줍니다. 추적 염료를 꼬리 정맥에 주입하여 뇌로 순환하고 손상된 BBB를 통해 조직으로 누출되도록 합니다. 그런 다음 뇌를 추출하고 가공하여 염료를 방출합니다. 염료의 형광 강도는 레이저로 인한 BBB 손상의 정도를 정량화하기 위해 측정됩니다.

레이저로 유도된 뇌 손상 쥐 모델에서 혈액-뇌 장벽 무결성 평가 

이 프로토콜은 마우스의 일시적인 중대뇌동맥 폐색 후 경색 부피와 혈액-뇌 장벽 파괴를 감소시키는 반복적인 저산소증 전조건화 또는 전신 저산소증에 대한 짧은 노출을 설명합니다. 또한 신경혈관 보호의 효능을 평가하기 위해 뇌졸중 후 경색 용적과 혈액-뇌 장벽 파괴의 이중 정량화에 대해 자세히 설명합니다.

마우스의 반복 저산소 전처리 및 과도 중간 대뇌 동맥 폐쇄 후 신경 혈관 보호의 정량화

운동 선수는 매년 수백 건의 경증 외상성 뇌 손상 (mTBI) / 뇌진탕을 흡수합니다. 그러나 뇌에 대한 이들의 결과는 제대로 이해되지 못했습니다. 따라서 임상 적으로 적절한 증상을 반복적으로 반복하는 단일 및 반복 mTBI의 동물 모델은 mTBI 및 뇌진탕의 연구를 발전시킬 수있는 수단을 제공합니다.

단일 및 반복적 인 경미한 외상성 뇌 손상의 마우스 모델

이 연구에서 우리는 신경 퇴행 성 조건 하에서 혈액-뇌 장벽 장애를 평가 하기 위한 간단 하 고 효율적인 절차를 제시. 우리의 목표를 달성 하기 위해 우리는 높은 분자량 fluorescein isothiocyanate 표시 (FITC) 주입-마우스 경으로 알 부 민 정 맥 및 형광 현미경 검사 법에 의해 뇌 실질에 그것의 누설을 평가.

FITC 표시 된 알 부 민 신경 질환의 마우스 모델에서의 정 맥 주입에 의해 혈액-뇌 장벽 침투성의 평가

우리는 여기에 설치류를위한 폭발파 모델의 프로토콜을 제시하여 경증에서 중등도의 외상성 뇌 손상의 신경 생물학적 및 병리 생리학적 효과를 조사합니다. 우리는 압력 센서가 장착 된 가스 구동식 벤치 탑 설정을 구축하여 폭발로 인한 경증에서 중등도의 외상성 뇌 손상을 안정적이고 재현 가능한 생성이 가능하도록했습니다.

설치류의 폐쇄 머리 경미한 외상성 뇌 손상의 전임상 평가를위한 저강도 폭발파 모델

이 프로토콜은 경미한 외상성 뇌 손상에 대한 신경 염증 및 혈역학 반응을 특성화하고 부분 최소 제곱 회귀를 사용하는 다변량 시스템 분석의 일부로 이러한 데이터를 통합하는 방법을 제시합니다.

외상성 뇌 손상에 대한 신경 염증 및 혈역학 반응의 시스템 분석

이 프로토콜은 마우스 모델에서 경미한 외상성 뇌 손상을 설명합니다. 특히, 경미한 정중선 폐쇄 두부 손상을 유도하기 위한 단계별 프로토콜 및 동물 모델의 특성화가 충분히 설명된다.

생쥐의 경미한 외상성 뇌 손상에 대한 전자기 제어 폐쇄 머리 모델

이 프로토콜은 폐쇄성 두부 손상(CHI) 방법을 통해 유도된 반복적인 경미한 외상성 뇌 손상(rmTBI)의 수정된 마우스 모델을 제시합니다. 이 접근법은 두개골 창과 유체 타악기를 사용하여 수막 노출로 인해 일반적으로 발생하는 염증을 줄이고 설치류의 rmTBI 모델링에서 재현성 및 정확도를 향상시킵니다.

얇아진 두개골 창과 유체 타악기를 통합한 반복적인 경미한 외상성 뇌 손상의 수정된 마우스 모델

단순화된 외상성 뇌 손상(TBI) 모델은 치료적 접근의 개발을 촉진했습니다. 이 프로토콜은 바늘을 사용하여 찔린 상처 마우스 피질을 생성하는 방법을 간략하게 설명하여 출혈 및 염증을 분석할 수 있습니다. 칼에 찔린 TBI 마우스 모델은 특수 장비 없이도 수행할 수 있는 이점을 제공합니다.

외상성 뇌 손상의 출혈 및 염증을 연구하기 위한 Stab-Wound Mouse 모델

배우세요 경미한 외상성 뇌 손상 마우스 모델에서 혈액-뇌 장벽 파괴 평가 방법을. 이중 형광 염료를 활용해 BBB 손상 시점과 회복 과정을 정밀 분석하며 치료 효과를 평가합니다.

경미한 외상성 뇌 손상의 마우스 모델에서 혈액-뇌 장벽 파괴 평가

더 많은 동영상 탐색