Name: 소엽에 걸친 생쥐의 폐 미세혈관 밀도 정량화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-03T12:40:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: 배우세요 생쥐 폐 소엽의 미세혈관 밀도 정량화 방법을 isolectin B4 염색과 ImageJ 분석을 통해 알아보세요. 이 연구는 천식과 COVID-19 등 폐 질환의 미세혈관 변화 이해에 활용됩니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>마우스에서 Isolectin B4 염색을 사용한 폐 미세혈관 평가

<ol><li>Jia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf-2+promotes+angiogenesis+through+a+srsf1%2Fsrsf3%2Fsrpk1-dependent+axis+that+controls+vegfr1+splicing+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Fgf-2 promotes angiogenesis through a srsf1/srsf3/srpk1-dependent axis that controls vegfr1 splicing in endothelial cells.</a> BMC Biol. 19 (1), 173(2021).</li>
<li>Schneider, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aging+lung%3A+Physiology%2C+disease%2C+and+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The aging lung: Physiology, disease, and immunity.</a> Cell. 184 (8), 1990-2019 (2021).</li>
<li>Rafii, S., Butler, J. M., Ding, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiocrine+functions+of+organ-specific+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiocrine functions of organ-specific endothelial cells.</a> Nature. 529 (7586), 316-325 (2016).</li>
<li>Lipskaia, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+telomerase+in+p21-positive+cells+counteracts+capillaries+rarefaction+in+aging+mice+lung%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Induction of telomerase in p21-positive cells counteracts capillaries rarefaction in aging mice lung.</a> bioRxiv. , (2022).</li>
<li>Hoshino, M., Takahashi, M., Aoike, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+vascular+endothelial+growth+factor%2C+basic+fibroblast+growth+factor%2C+and+angiogenin+immunoreactivity+in+asthmatic+airways+and+its+relationship+to+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Expression of vascular endothelial growth factor, basic fibroblast growth factor, and angiogenin immunoreactivity in asthmatic airways and its relationship to angiogenesis.</a> J Allergy Clin Immunol. 107 (2), 295-301 (2001).</li>
<li>Ackermann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+endothelialitis%2C+thrombosis%2C+and+angiogenesis+in+covid-19%5BTitle%5D)+AND+%22New+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular endothelialitis, thrombosis, and angiogenesis in covid-19.</a> New Engl J Med. 383 (2), 120-128 (2020).</li>
<li>Wertheim, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolating+pulmonary+microvascular+endothelial+cells+ex+vivo%3A+Implications+for+pulmonary+arterial+hypertension%2C+and+a+caution+on+the+use+of+commercial+biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Isolating pulmonary microvascular endothelial cells ex vivo: Implications for pulmonary arterial hypertension, and a caution on the use of commercial biomaterials.</a> PLoS One. 14 (2), e0211909(2019).</li>
<li>Thomas, S. M., Bednarek, J., Janssen, W. J., Hume, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Air-inflation+of+murine+lungs+with+vascular+perfusion-fixation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Air-inflation of murine lungs with vascular perfusion-fixation.</a> J Vis Exp. (168), e62215(2021).</li>
<li>Ramasamy, S. K., Kusumbe, A. P., Adams, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+tissue+morphogenesis+by+endothelial+cell-derived+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of tissue morphogenesis by endothelial cell-derived signals.</a> Trends Cell Biol. 25 (3), 148-157 (2015).</li>
<li>Amersfoort, J., Eelen, G., Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulation+by+endothelial+cells+-+partnering+up+with+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunomodulation by endothelial cells - partnering up with the immune system.</a> Nat Rev Immunol. 22 (9), 576-588 (2022).</li>
<li>Niethamer, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+role+of+pulmonary+endothelial+cell+heterogeneity+in+the+response+to+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Defining the role of pulmonary endothelial cell heterogeneity in the response to acute lung injury.</a> eLife. 9, e53072(2020).</li>
<li>Corliss, B. A., Mathews, C., Doty, R., Rohde, G., Peirce, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+label%2C+image%2C+and+analyze+the+complex+structural+architectures+of+microvascular+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Methods to label, image, and analyze the complex structural architectures of microvascular networks.</a> Microcirculation. 26 (5), e12520(2019).</li>
<li>Phillips, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+evaluating+the+murine+pulmonary+vasculature+using+micro-computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A method for evaluating the murine pulmonary vasculature using micro-computed tomography.</a> J Surg Res. 207, 115-122 (2017).</li>
<li>Chadwick, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vessel+network+extraction+and+analysis+of+mouse+pulmonary+vasculature+via+x-ray+micro-computed+tomographic+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Comput+Biol%22%5BJournal%5D)">Vessel network extraction and analysis of mouse pulmonary vasculature via x-ray micro-computed tomographic imaging.</a> PLoS Comput Biol. 17 (4), e1008930(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4% 파라포름알데히드</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td>조직 고정제</td></tr><tr><td>4',6-디아미디노-2-페닐린돌</td><td>MCE</td><td>HY-D0814</td><td>핵 염료</td></tr><tr><td>Alexa-647 Fluor Conjugated Isolectin B4</td><td>Thermo</td><td>I32450</td><td>바인딩 마이크로혈관</td></tr><tr><td>안티 형광 정제 실러</td><td>Abcam</td><td>AB104135</td><td>샘플 고정</td></tr><tr><td>항원 수리 유체</td><td>Biosharp</td><td>BL151A</td><td>항원 부위 수리</td></tr><tr><td>생검 카세트</td><td>ActivFlo</td><td>39LC-500-1</td><td>고정 및 위치 결정 조직 샘플</td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>시그마</td><td>B2064-50G</td><td>밀봉 솔루션</td></tr><tr><td>냉각 플레이트</td><td>Leica</td><td>HistoCore Arcadia H&nbsp;</td><td>냉동 샘플</td></tr><tr><td>항온 전기 건조 오븐</td><td>Taisite</td><td>101-0AB</td><td>고온 수리</td></tr><tr><td>일회용 마이크로톰 블레이드</td><td>라이카</td><td>14035838383</td><td>절단 조직 샘플을 준비하기 위해</td></tr> 임베디드 <tr><td>몰드</td><td>Shitai</td><td>26155166627</td><td>고정 조직 샘플</td></tr><tr><td>에탄올</td><td>Kelong</td><td>CAS 64-17-5</td><td>조직 탈수 용액</td></tr><tr><td>가열 파라핀 임베딩 스테이션</td><td>Leica</td><td>EG1150</td><td>파라핀에 Tssue 샘플 임베딩</td></tr><tr><td>HistoCore 수조</td><td>Leica</td><td>HI1220</td><td>조직 샘플 평탄화 및 고정</td></tr><tr><td>ImageJ (피지)&nbsp;</td><td>NIH</td><td>1.54f</td><td>정량적 도구</td></tr><tr><td>면역 조직 화학 펜</td><td>Biosharp</td><td>BC004</td><td>방수 에이전트</td></tr><tr><td>의료 겸자</td><td>상하이 의료 장비</td><td>N / A</td><td>조직 샘플 파악, 조작 또는 이동</td></tr><tr><td>현미경</td><td>Nikon</td><td>Ts2</td><td>이미징 장치</td></tr><tr><td>장착 매체</td><td>Jiangyuan</td><td>무미의</td><td>고정 및 보존 조직 섹션</td></tr><tr><td>파라핀 왁스</td><td>SCHLEDEN</td><td>80200-0014</td><td>고정 조직 구조</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Beyotime</td><td>C0221A</td><td>세척 버퍼</td></tr><tr><td>펜토바르비탈 나트륨</td><td>베이징 화학 시약 회사</td><td>Q/H82-F158-2002</td><td>마취</td></tr><tr><td>로터리 마이크로톰</td><td>바이오베이스</td><td>BK-2258</td><td>준비 슬라이스</td></tr><tr><td>멸균 가위</td><td>Shanghai Medical 장비</td><td>N/A</td><td>세분화 조직 샘플</td></tr><tr><td>수술용 메스</td><td>상하이 의료 장비</td><td>N/A</td><td>절단 조직 샘플</td></tr><tr><td>Triton&nbsp;</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td>투과화 솔루션</td></tr><tr><td>워시 프리 슬라이드</td><td>PLATINUM PRO</td><td>PRO-04</td> 염색<td>용 고정 샘플</td></tr><tr><td>크실렌</td><td>SUM</td><td>XK13-011-00031</td><td>티슈 디왁싱 솔루션</td></tr></tbody></table>

소엽에 걸친 생쥐의 폐 미세혈관 밀도 정량화

Quantifying Pulmonary Microvascular Density in Mice Across Lobules

주요 기관지와 작은 기도 가지의 병변을 구별하려면 이 두 가지 유형의 기도에서 병변의 연속적인 구조를 관찰하는 것이 중요합니다. 이는 그림 1에 설명된 절단 및 임베딩 절차에 따라 달성할 수 있습니다. 다양한 방향으로 향하고 그물망과 같은 구조를 가진 쥐의 수많은 폐엽을 감안할 때 다른 고형 조직에 비해 붕괴에 더 취약합니다. 대상 부위의 병변을 명확하고 직관적으로 관찰하려면 절단하기 몇 시간 전에 조직 샘플을 고정하는 것이 좋습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66681/66681fig01.jpg"> 그림 1: 쥐의 폐엽을 대표하는 사진은 총 5개의 뚜렷한 폐엽을 보여줍니다. 왼쪽 폐...

The abnormal alternation of pulmonary angiogenesis is related to lung microvascular dysfunction and is deeply linked to vascular wall integrity, blood ...

quantifying-pulmonary-microvascular-density-in-mice-across-lobules

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

동시에 오른쪽 심장 기능, 폐 염증 및 면역 반응을 조사하기 위해 구체적이고 빠른 프로토콜은 학습 도구로 설명되어 있습니다. 비디오 및 그림은 큰 규모의 연구에 작은에 사용할 수에 적용 할 수 있습니다 조직 팀 접근 방식에서 생리학 및 microdissection 기술을 설명합니다.

폐 마우스의 면역 조직 샘플의 수확과 함께 오른쪽 심실 수축기 압력 측정

내피 내피 / glycocalyx 표면 층은 이상적인 intravital 현미경을 사용하여 공부하고 있습니다. Intravital 현미경은 기술적 같은 폐 등 움직이는 장기에 도전하고 있습니다. 우리는 동시 brightfield 및 형광 현미경은 자유롭게 - 이동에 내피 표면 층의 두께를 추정하는 데 사용할 수 있습니다 방법을...

마우스 폐 내피 표면 층의 생체 측정

저산소 폐 혈관 수축 (HPV)은 폐포 저산소증 폐 관류가 환기와 일치하는 중요한 생리학적 현상이다. HPV에 기여하는 주요 혈관 세그먼트는 인트라 아시나르 동맥입니다. 여기서, 우리는 직경 20-100 μm의 뮤린 폐 혈관의 HPV의 분석을 위한 우리의 프로토콜을 기술합니다.

Murine 정밀 절단 폐 슬라이스를 사용하여 폐 내 동맥의 저산소 폐 혈관 수축의 비디오 형태 측정 분석

고립 된 혈액 관류 폐 준비는 폐 표면에 미세 혈관의 네트워크를 시각화하는 것이 가능합니다. 여기에서 우리는 실시간 형광 이미징을 사용하여 격리 된 폐의 단일 미세 혈관의 투과성을 정량화하는 방법을 설명합니다.

고립 된 혈액 관류 쥐 폐 준비에 단일 미세 혈관 투과성의 양을

우리는 마우스의 폐 확산 능력을 빠르고 간단하게 측정하는 방법을 설명하고 여러 일반적인 폐 병리학에서 표현형 변화에 충분히 민감하다는 것을 보여줍니다.  따라서 이 메트릭은 확산 용량이 인간에서도 쉽게 측정되기 때문에 마우스 모델에 직접적인 번역 관련성을 제공합니다.

표현형 마우스 폐 기능 생체 폐 확산 능력

여기에서는 마우스의 폐압-부피 곡선을 간단하고 안정적으로 측정할 수 있는 프로토콜을 제시하며, 두 가지 일반적인 폐 병리학인 폐 섬유증과 폐기종에서 표현형 실질 변화를 감지할 수 있을 만큼 충분히 민감하다는 것을 보여줍니다. 이 지표는 병리학의 발달에 따른 폐의 구조적 변화를 정량화할 수 있는 수단을 제공합니다.

마우스 폐의 압력 볼륨 곡선의 측정

내부 폐 표면적 (ISA)은 폐 질환 및 부상 유발 폐포 재생에서 폐 형태 및 생리학을 평가하는 데 중요한 기준입니다. 폐 절제술 및 인공 삽입물 마우스 모델에서 ISA의 측정 편향을 최소화 할 수있는 표준화 된 방법을 설명합니다.

마우스 폐 전 절제술 및 보철물 삽입을 통한 내시경 표면 측정을위한 표준화 된 방법

쥐에서 실험제의 INTracheal (IT) 투여는 종종 말단 폐에 비대칭 전달을 초래한다.  이 보고에서는, 우리는 살아있는 마우스에 있는 각 폐를 비 작동가능하게 캐뉼기 위하여 직접적인 기관내 (IB) 접근을 기술합니다.  이러한 접근법은 하나의 폐에 제제를 선택적으로 투여하기 위해 사용될 수 있거나 또는 두 폐에 대한 대칭에이전트 전달을 개선하기 위해 적응될 수 있다.

마우스 폐 내 선택적 에이전트 침착을 개선하기 위한 직접 기관내 투여

우리는 마우스 간에서 담관 밀도의 정확한 정량화를 위한 다소 간단하고 민감한 방법을 제시합니다. 이 방법은 유전 및 환경 수정자의 효과와 담즙 질환의 마우스 모델에서 잠재적 인 치료의 효과를 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다.

마우스 간에서 담관 밀도 결정

이 기술의 목적은 폐 인플레이션과 폐 동맥을 통해 무선 불투명 한 폴리머 기반 화합물의 주입을 통해 초기 산후 및 성인 마우스의 폐 동맥 네트워크의 전 생체 시각화입니다. 캐스팅된 조직에 대한 잠재적 응용 프로그램도 논의됩니다.

Micro-CT 화상 진찰을 위한 성인 및 초기 산후 마우스 폐의 혈관 주조

배우세요 생쥐 폐 소엽의 미세혈관 밀도 정량화 방법을 isolectin B4 염색과 ImageJ 분석을 통해 알아보세요. 이 연구는 천식과 COVID-19 등 폐 질환의 미세혈관 변화 이해에 활용됩니다.

소엽에 걸친 생쥐의 폐 미세혈관 밀도 정량화

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