Name: Fibro-Adipogenic Progenitor Isolation, Expansion, and Differentiation from the Spiny Mouse Model(스파이니 마우스 모델로부터의 섬유-지방형성 전구세포 분리, 확장 및 분화) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-15T12:20:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: 학습하세요 스파이니 마우스(Acomys)에서 섬유-지방형성 전구세포(FAP)를 효소 분해 및 FACS로 분리, 확장, 분화하는 방법을. 이 프로토콜은 재생의학 및 줄기세포 연구에 활용됩니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>섬유-지방형성 전구세포 배양을 위한 생쥐 심장 및 골격근 소화

<ol><li>Gaire, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spiny+mouse+%28Acomys%29%3A+An+emerging+research+organism+for+regenerative+medicine+with+applications+beyond+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Spiny mouse (Acomys): An emerging research organism for regenerative medicine with applications beyond the skin.</a> NPJ Regen Med. 6, 1(2021).</li>
<li>Sandoval, A. G. W., Maden, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+in+the+spiny+mouse%2C+Acomys%2C+a+new+mammalian+model%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Genet.+Dev%22%5BJournal%5D)">Regeneration in the spiny mouse, Acomys, a new mammalian model.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 64, 31-36 (2020).</li>
<li>Judson, R. N., Zhang, R. H., Rossi, F. M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+mesenchymal+stem%2Fprogenitor+cells+in+skeletal+muscle%3A+Collaborators+or+saboteurs%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident mesenchymal stem/progenitor cells in skeletal muscle: Collaborators or saboteurs.</a> FEBS J. 280 (17), 4100-4108 (2013).</li>
<li>Uezumi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+and+adipogenesis+originate+from+a+common+mesenchymal+progenitor+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Fibrosis and adipogenesis originate from a common mesenchymal progenitor in skeletal muscle.</a> J Cell Sci. 124, 3654-3664 (2011).</li>
<li>Joe, A. W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+injury+activates+resident+fibro%2Fadipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nat Cell Biol. 12, 153-163 (2010).</li>
<li>Uezumi, A., Fukada, S. I., Yamamoto, N., Takeda, S., Tsuchida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+progenitors+distinct+from+satellite+cells+contribute+to+ectopic+fat+cell+formation+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal progenitors distinct from satellite cells contribute to ectopic fat cell formation in skeletal muscle.</a> Nat Cell Biol. 122 (12), 143-152 (2010).</li>
<li>Soliman, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenic+Potential+of+Hic1-Expressing+Cardiac+Stromal+Progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Pathogenic Potential of Hic1-Expressing Cardiac Stromal Progenitors.</a> Cell Stem Cell. 26 (2), 205-220 (2020).</li>
<li>Hall, C., Gehmlich, K., Denning, C., Pavlovic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+relationship+between+cardiac+fibroblasts+and+cardiomyocytes+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Heart+Assoc%22%5BJournal%5D)">Complex relationship between cardiac fibroblasts and cardiomyocytes in health and disease.</a> J Am Heart Assoc. 10, 1-15 (2021).</li>
<li>Gawriluk, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+ear-hole+closure+identifies+epimorphic+regeneration+as+a+discrete+trait+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of ear-hole closure identifies epimorphic regeneration as a discrete trait in mammals.</a> Nat Commun. 71 (7), 1-16 (2016).</li>
<li>Seifert, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+shedding+and+tissue+regeneration+in+African+spiny+mice+%28Acomys%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Skin shedding and tissue regeneration in African spiny mice (Acomys).</a> Nature. 489, 561(2012).</li>
<li>Koopmans, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+tolerance+and+cardiac+repair+in+the+spiny+mouse+%28Acomys%29%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Ischemic tolerance and cardiac repair in the spiny mouse (Acomys).</a> NPJ Regen Med. 6, 78(2021).</li>
<li>Peng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+spiny+mice+%28Acomys%29+exhibit+endogenous+cardiac+recovery+in+response+to+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Adult spiny mice (Acomys) exhibit endogenous cardiac recovery in response to myocardial infarction.</a> NPJ Regen Med. 6, 74(2021).</li>
<li>Maden, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfect+chronic+skeletal+muscle+regeneration+in+adult+spiny+mice%2C+Acomys+cahirinus%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Perfect chronic skeletal muscle regeneration in adult spiny mice, Acomys cahirinus.</a> Sci Rep. 8, 8920(2018).</li>
<li>Riparini, G., Simone, J. M., Sartorelli, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS-isolation+and+culture+of+fibro-adipogenic+progenitors+and+muscle+stem+cells+from+unperturbed+and+injured+mouse+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">FACS-isolation and culture of fibro-adipogenic progenitors and muscle stem cells from unperturbed and injured mouse skeletal muscle.</a> J Vis Exp. (184), e63983(2022).</li>
<li>Low, M., Eisner, C., Rossi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibro%2Fadipogenic+progenitors+%28FAPs%29%3A+Isolation+by+FACS+and+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Fibro/adipogenic progenitors (FAPs): Isolation by FACS and culture.</a> Methods Mol Biol. 1556, 179-189 (2017).</li>
<li>Molina, T., Fabre, P., Dumont, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibro-adipogenic+progenitors+in+skeletal+muscle+homeostasis%2C+regeneration+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Biol%22%5BJournal%5D)">Fibro-adipogenic progenitors in skeletal muscle homeostasis, regeneration and diseases.</a> Open Biol. 11 (12), 210110(2021).</li>
<li>Contreras, O., Rossi, F. M. V., Theret, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins%2C+potency%2C+and+heterogeneity+of+skeletal+muscle+fibro-adipogenic+progenitors-time+for+new+definitions%5BTitle%5D)+AND+%22Skelet+Muscle%22%5BJournal%5D)">Origins, potency, and heterogeneity of skeletal muscle fibro-adipogenic progenitors-time for new definitions.</a> Skelet Muscle. 111 (11), 1-25 (2021).</li>
<li>Fitzgerald, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MME%2B+fibro-adipogenic+progenitors+are+the+dominant+adipogenic+population+during+fatty+infiltration+in+human+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">MME+ fibro-adipogenic progenitors are the dominant adipogenic population during fatty infiltration in human skeletal muscle.</a> Commun Biol. 61 (6), 1-21 (2023).</li>
<li>Babaeijandaghi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DPPIV%2B+fibro-adipogenic+progenitors+form+the+niche+of+adult+skeletal+muscle+self-renewing+resident+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">DPPIV+ fibro-adipogenic progenitors form the niche of adult skeletal muscle self-renewing resident macrophages.</a> Nat Commun. 141 (14), 1-10 (2023).</li>
<li>Schutz, P. W., Cheung, S., Yi, L., Rossi, F. M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+activation+patterns+of+CD10%2B+fibro-adipogenic+progenitors+across+acquired+disease+states+in+human+skeletal+muscle+biopsies%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Cellular activation patterns of CD10+ fibro-adipogenic progenitors across acquired disease states in human skeletal muscle biopsies.</a> Free Neuropathol. 5, 3-3 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.5M EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>15575&ndash; 038</td><td></td></tr><tr><td>1.7 mL 마이크로 원심분리기 튜브</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td></td></tr><tr><td>15&nbsp; mL 원심분리기 튜브</td><td>Falcon</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>1x Dulbecco' s 인산염 완충 식염수 (DPBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>20 mL 주사기</td><td>BD</td><td>309661</td><td></td></tr><tr><td>4&prime;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td><td>Invitrogen</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>40&nbsp; &뮤; m 세포 여과기</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>48 웰 평면 조직 배양 플레이트</td><td>Falcon</td><td>53078</td><td></td></tr><tr><td>5 mL 폴리프로필렌</td><td>Falcon</td><td>352063</td><td></td></tr><tr><td>5 mL 폴리스티렌 라운드 바닥 튜브와 세포 여과기 캡 Falcon</td><td></td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>5 mL 주사기</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>50&nbsp; mL 원심분리기 튜브</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>60mm 페트리 접시</td><td>Falcon</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>96 웰 V-바닥 조직 배양 플레이트</td><td>Corning</td><td>3894</td><td></td></tr><tr><td>Acomys dimidiatus 마우스(가시 마우스)</td><td></td><td></td> <td>Ashley W. Seifert 박사(켄터키 대학교)가 선물했습니다.</td></tr><tr><td>암모늄-염화물-칼륨 (ACK) 용해 완충액</td><td>Gibco</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>안티-페리리핀 (1:100)</td><td>시그마</td><td>P1873</td><td></td></tr><tr><td>안티-SMA (1:100)</td><td>인비트로젠</td><td>14-9760-82</td><td></td></tr><tr><td>APC PDGFRa (1:800)</td><td>Abcam</td><td>ab270085</td><td></td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide 바늘 18 G</td><td>BD</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide 바늘 23 G</td><td>BD</td><td>305145</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>Sigma</td><td>A7906-100g</td><td></td></tr><tr><td>BV605 CD31 (1:500)</td><td>BD biosciences</td><td>744359</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>Donkey 안티 마우스 Alexa 555 (1:1000)</td><td>Invitrogen</td><td>A31570</td><td></td></tr><tr><td>당나귀 안티 토끼 Alexa 647 (1:1000)</td><td>Invitrogen</td><td>A31573</td><td></td></tr><tr><td>당나귀 혈청</td><td>시그마</td><td>S30-100ML</td><td></td></tr><tr><td>FACS 분류기 - MoFlo Astrios 5 lasers</td><td>Beckman coulter</td><td>B52102</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Gemini</td><td>100-500</td><td></td></tr><tr><td>Fine scissors</td><td>FST</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>겸자</td><td>FST</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Hemostat</td><td>FST</td><td>91308-12</td><td></td></tr><tr><td>인간 FGF 염기성 재조합 단백질(bFGF)</td><td>Gibco</td><td>13256029</td><td></td></tr><tr><td>인간 TGF 베타 1 재조합 단백질(TGFb1)</td><td>eBiosciences</td><td>14-8348-62</td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터 - Heracell 160i CO2</td><td>ThermoFisher</td><td>51033557</td><td></td></tr><tr><td>도립 현미경 - Revolve</td><td>ECHO</td><td>해당 없음</td><td></td></tr><tr><td>Liberase</td><td>Roche</td><td>5401127001</td><td></td></tr><tr><td>Mouse MesenCult Adipogenic Differentiation 10x Supplement</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>5507</td><td></td></tr><tr><td>Mouse on mouse (MOM) 차단 시약</td><td>Vector Laboratories</td><td>MKB-2213</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>시그마</td><td>P1648-500g</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>Gibco</td><td>15140&ndash; 122</td><td></td></tr><tr><td>PicoLab Mouse Diet 20</td><td>LabDiet</td><td>3005750-220</td><td></td></tr><tr><td>Propidium iodide (PI)</td><td>Invitrogen</td><td>P3566</td><td></td></tr><tr><td>수송 바이알 5mL 튜브</td><td>Caplugs Evergreen</td><td>222-3005-080</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>9036-19-5</td><td></td></tr></tbody></table>

fibro-adipogenic progenitor isolation, expansion, and differentiation from the spiny mouse model(스파이니 마우스 모델로부터의 섬유-지방형성 전구세포 분리, 확장 및 분화)

Fibro-Adipogenic Progenitor Isolation, Expansion, and Differentiation from the Spiny Mouse Model

골격근 및 심장 FAP를 분리하고 배양하기 위한 이 프로토콜의 회로도는 그림 1에 요약되어 있습니다. 조직 채취의 경우 간 색이 짙은 빨간색에서 옅은 노란색으로 변하는 것은 일반적으로 성공적인 관류를 나타냅니다. 가시 쥐의 지정된 연령대에서 심장 무게는 일반적으로 약 200mg이고 대퇴사두근은 약 350mg입니다.
3.5-3.7 단계에서 각 분해 완충액이 변경될 때마다 세포가 조직에서 방출됨에 따라 분해관의 분해 완충액이 불투명하게 나타납니다. 분해가 끝나면 용액은 일부 조직 조각이 남아 있는 비교적 균질한 슬러리여야 합니다. 세포의 생존력과 배양 결과에 부정적인 영향을 미치는 과다 소화를 피하기 위해 모든 조직이 완전히 소화되기 전에 분해를 종료해야 합니다.
FACS에 대한 예상 흐름 플롯은 그림 2에 나와 있습니다. FAP는 활세포와 LIN-세포의 약 2%를 차지할 것으로 예상됩니다. PI+ 이벤트의 백분율은 시료 전처리의 품질을 나타내는 지표이며 10% 미만이어야 합니다. 이 연구에서는 일반적으로 심장당 150k FAP(심실만) 및 두 개의 대퇴사두근에서 100k FAP를 얻습니다.
플레이트에 들어간 세포는 일반적으로 72시간 이내에 부착되고 5일 이내에 80% 밀도에 도달하며 돌출부와 함께 전형적인 섬유아세포 형태를 표시합니다(그림 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig01.jpg"> 그림 1: 프로토콜의 개략도 및 각 단계에 필요한 대략적인 시간. 조직 채취: 마우스당 10분. 조직 소화 : 1.5-2 시간. 세포 염색: 45분-75분 형광 활성화 세포 분류: 2시간 섬유-지방형성 전구세포(FAP) 확장: 4일. FAP 분화: 섬유화 분화의 경우 48시간, 골격근 FAP의 경우 지방 분화의 경우 6일, 심장 FAP의 경우 14일. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig02.jpg"> 그림 2: 골격근(위) 및 심장(아래) FAP 분리에 대한 대표적인 FACS 플롯. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig03.jpg"> 그림 3: 가시쥐 골격근 FAP 분화. (A) 섬유화 분화 제어. (B) 섬유화 분화. (C) 지방 분화 제어. (D) 지방형성 분화. 페리리핀(녹색), SMA(자홍색), DAPI(파란색), 스케일 바 = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig04.jpg"> 그림 4: 가시 마우스 심장 FAP 분화. (A) 섬유화 분화 제어. (B) 섬유화 분화. (C) 지방 분화 제어. (D) 지방형성 분화. 페리리핀(녹색), SMA(자홍색), DAPI(파란색), 스케일 바 = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig05.jpg"> 그림 5: 가시쥐 골격근(A)과 심장(B) FAP의 5일 배양 후 분화 전의 명시야 이미지. 스케일 바 = 360 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>컨트롤</td>
			<td>CD31 사우스 캐롤라이나</td>
			<td>PDGFRα 사우스 캐롤라이나</td>
			<td>CD31 FMO</td>
			<td>PDGFRα FMO</td>
			<td>견본</td>
		</tr><tr><td>CD31 항체</td>
			<td>+</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>+</td>
			<td>+</td>
		</tr><tr><td>PDGFRα 항체</td>
			<td>-</td>
			<td>+</td>
			<td>+</td>
			<td>-</td>
			<td>+</td>
		</tr></tbody></table>표 1: 대조군 및 시료를 위한 항체 염색 칵테일 설정을 위한 개략도. SC = 단색 제어, FMO = 형광에서 하나의 제어를 뺀 값, + = 해당 항체 포함, - = 해당 항체 없음.

Fibro-Adipogenic Progenitor Isolation, Expansion, and Differentiation from the Spiny Mouse Model(스파이니 마우스 모델로부터의 섬유-지방형성 전구세포 분리, 확장 및 분화)

Due to its exceptional repair program, the spiny mouse is an emerging research model for regenerative medicine. Fibro-adipogenic progenitors are ...

fibro-adipogenic-progenitor-isolation-expansion-differentiation-from

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

여기에서는 MCS (Magnetic-activated Cell Sorting)를 사용하여 Perivascular Adipose Tissue (PVAT)에서 지방 세포 전구 세포 (Adipocyte Progenitor Cell, APC) 개체군을 분리하는 방법을보고합니다. 이 방법은 FACS (Fluorescence-Activated Cell Sorting)와 비교할 때 지방 조직 1g 당 APC의 증가 된 분리를 허용합니다.

자기 활성화 세포 정렬에 의해 분리 된 혈관 주위 지방 조직으로부터의 지방 전구 세포 전구 세포의 확장 및 지방 생성 유도

이 프로토콜은 형광 활성화 세포 분류 또는 면역자기 비드 분리를 통해 쥐 복강 내 백색 지방 조직(WAT) 저장소에서 지방 형성 및 섬유 염증성 기질 세포 하위 집단을 분리하는 기술적 접근 방식을 설명합니다.

Isolation of Adipogenic and Fibro-Inflammatory Stromal Cell Subpopulations from Murine Intra-Abdominal Adipose Depots

우리는 형광 활성화 세포 분류를 사용하여 마우스 전도성 지방 패드에서 매우 실행 가능한 지방 전구 세포를 분리하는 간단한 방법을 제시한다.

마우스 전형 지방 조직에서 지방 전구의 준비

이 보고서는 신생아 마우스에서 1 차적인 갈색 및 백색 프레드포스세포의 동시 적인 격리를 위한 프로토콜을 기술합니다. 분리된 세포는 배양에서 재배되고 완전히 성숙한 백색과 갈색 지방세포로 분화하도록 유도될 수 있다. 이 방법은 배양시 1차 지방세포의 유전적, 분자 및 기능적 특성화를 가능하게 한다.

신생아 마우스에서 기본 백색및 갈색 프레드포스세포의 격리 및 분화

이 프로토콜은 피하 지방에서 마우스 지방전구세포의 분리, 성숙한 지방세포로의 분화 및 인슐린 저항성 유도를 설명합니다. 인슐린 작용은 웨스턴 블롯을 통한 인슐린 신호 전달 경로 구성원의 인산화/활성화에 의해 평가됩니다. 이 방법을 사용하면 원발성 지방세포에서 인슐린 저항성/민감도를 직접 측정할 수 있습니다.

1차 배양에서 분화된 마우스 지방세포: 인슐린 저항성 모델

섬유-지방형성 전구세포(FAP)와 근육 줄기세포(MuSC)의 정확한 식별은 생리학적 및 병리학적 조건에서 생물학적 기능을 연구하는 데 중요합니다. 이 프로토콜은 성인 마우스 근육에서 FAP 및 MuSC의 분리, 정제 및 배양에 대한 지침을 제공합니다.

교란되지 않고 손상된 마우스 골격근에서 섬유 지방 형성 전구 세포 및 근육 줄기 세포의 FACS 분리 및 배양

지방세포는 갓 태어난 마우스의 견갑골 간 갈색 지방 조직의 기질 혈관 분획에서 분리하여 지질 방울을 축적하고 분자 마커를 발현하며 성숙한 갈색 지방세포의 미토콘드리아 형태를 보여주는 세포로 분화합니다. 이러한 세포는 면역 형광 및 투과 전자 현미경으로 추가로 분석됩니다.

Differentiation and Imaging of brown adipocytes from the Stromal Vascular Fraction of Interscapular Adipose Tissue from Newborn Mice(신생아 마우스의 견갑간 지방 조직의 기질 혈관 분획에서 갈색 지방세포의 분화 및 이미징)

이 프로토콜은 지방전구세포를 얻고 시험관 내에서 지방세포 분화를 달성하기 위해 쥐 지방 조직에서 기질 혈관 분획(SVF)의 반자동 분리를 설명합니다. 콜라게나제 분해를 위해 조직 해리제를 사용하면 실험 변동이 줄어들고 재현성이 높아집니다.

조직 해리기를 사용하여 쥐 백색 지방 조직에서 기질 혈관 분획의 반자동 분리

여기서는 생쥐 대동맥 주위 지방 조직에서 기질 혈관 분획 유래 지방세포의 분리, 배양 및 지방 유도를 설명하여 혈관 주위 지방 조직 기능 및 혈관 세포와의 관계를 연구할 수 있습니다.

Isolation, Culture, and Adipogenic Induction of Stromal Vascular Fraction-derived Preadipocytes from Mouse Periaortic Adipose Tissue(마우스 대동맥 주위 지방 조직에서 기질 혈관 분획 유래 지방세포의 분리, 배양 및 지방 유도)

성숙한 지방세포의 크기와 취약성으로 인해 연구 및 분리에 사용할 수 있는 기술과 도구가 제한되어 있습니다. 여기에서는 성숙한 쥐 지방세포의 분리를 위한 프로토콜이 설명되어 있으며, 이는 다양한 지방세포 및 마우스 사료에 쉽게 적용할 수 있습니다.

Isolation and Culturing of Primary Murine Adipocytes from Lean and Obese Mice

학습하세요 스파이니 마우스(Acomys)에서 섬유-지방형성 전구세포(FAP)를 효소 분해 및 FACS로 분리, 확장, 분화하는 방법을. 이 프로토콜은 재생의학 및 줄기세포 연구에 활용됩니다.

Fibro-Adipogenic Progenitor Isolation, Expansion, and Differentiation from the Spiny Mouse Model(스파이니 마우스 모델로부터의 섬유-지방형성 전구세포 분리, 확장 및 분화) (동영상) | JoVE Journal

Fibro-Adipogenic Progenitor Isolation, Expansion, and Differentiation from the Spiny Mouse Model(스파이니 마우스 모델로부터의 섬유-지방형성 전구세포 분리, 확장 및 분화)

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