Name: 설치류 모델에서 구강 배게이지에 대한 대체 방법으로 마이크로피펫 유도 약물 투여 사용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-26T13:40:00.000+00:00
Duration: 2 min 44 s
Description: 배우세요 마이크로피펫 유도 약물 투여(MDA)를 사용하여 설치류 모델에서 구강 배게이지 대안으로 약물을 투여하는 방법을. 이 기술은 동물의 스트레스를 줄이고 실험 편향을 최소화하여 전립선암 연구의 데이터 신뢰성을 높입니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>마이크로피펫 유도 약물 투여를 통한 연구 동물 스트레스 감소

<ol><li>Vandenberg, L. N., Welshons, W. V., Vom Saal, F. S., Toutain, P. -L., Myers, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Should+oral+gavage+be+abandoned+in+toxicity+testing+of+endocrine+disruptors%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health%22%5BJournal%5D)">Should oral gavage be abandoned in toxicity testing of endocrine disruptors.</a> Environ Health. 13 (1), 46(2014).</li>
<li>Craig, M. A., Elliott, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+fed+radiolabeled+protein+by+gavage+show+sporadic+passage+of+large+quantities+of+intact+material+into+the+blood%2C+an+artifact+not+associated+with+voluntary+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Contemp+Top+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Mice fed radiolabeled protein by gavage show sporadic passage of large quantities of intact material into the blood, an artifact not associated with voluntary feeding.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 38 (5), 18-23 (1999).</li>
<li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+substances+to+laboratory+animals%3A+routes+of+administration+and+factors+to+consider%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).</li>
<li>Gulin, J. E. N., Bisio, M., García-Bournissen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Refining+drug+administration+in+a+murine+model+of+acute+infection+with+Trypanosoma+cruzi%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+Res%22%5BJournal%5D)">Refining drug administration in a murine model of acute infection with Trypanosoma cruzi.</a> Lab Anim Res. 36, 37(2020).</li>
<li>Bonnichsen, M., Dragsted, N., Hansen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+welfare+impact+of+gavaging+laboratory+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Welf%22%5BJournal%5D)">The welfare impact of gavaging laboratory rats.</a> Anim Welf. 14 (3), 223-227 (2005).</li>
<li>Brown, A. P., Dinger, N., Levine, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+produced+by+gavage+administration+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Contemp+Top+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Stress produced by gavage administration in the rat.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 39 (1), 17-21 (2000).</li>
<li>Scarborough, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+validation+of+the+micropipette-guided+drug+administration+%28MDA%29+method+in+the+maternal+immune+activation+model+of+neurodevelopmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">Preclinical validation of the micropipette-guided drug administration (MDA) method in the maternal immune activation model of neurodevelopmental disorders.</a> Brain Behav Immun. 88, 461-470 (2020).</li>
<li>Germann, P. G., Ockert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granulomatous+inflammation+of+the+oropharyngeal+cavity+as+a+possible+cause+for+unexpected+high+mortality+in+a+Fischer+344+rat+carcinogenicity+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Granulomatous inflammation of the oropharyngeal cavity as a possible cause for unexpected high mortality in a Fischer 344 rat carcinogenicity study.</a> Lab Anim Sci. 44 (4), 338-343 (1994).</li>
<li>Martins, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+gelatin+flavors+for+oral+dosing+of+C57BL%2F6J+and+FVB%2FN+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Comparison of gelatin flavors for oral dosing of C57BL/6J and FVB/N mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 61 (1), 89-95 (2022).</li>
<li>Huynh, N., Arabian, N., Lieu, D., Asatryan, L., Davies, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utilizing+an+orally+dissolving+strip+for+pharmacological+and+toxicological+studies%3A+A+simple+and+humane+alternative+to+oral+gavage+for+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Utilizing an orally dissolving strip for pharmacological and toxicological studies: A simple and humane alternative to oral gavage for animals.</a> J Vis Exp. (109), e53770(2016).</li>
<li>Hoggatt, A. F., Hoggatt, J., Honerlaw, M., Pelus, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spoonful+of+sugar+helps+the+medicine+go+down%3A+a+novel+technique+to+improve+oral+gavage+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">A spoonful of sugar helps the medicine go down: a novel technique to improve oral gavage in mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 49 (3), 329-334 (2010).</li>
<li>Neto, T., Faustino-Rocha, A. I., Gilda Costa, R. M., Medeiros, R., Oliveira, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quick+and+low-intensity+method+for+oral+administration+to+large+numbers+of+mice%3A+A+possible+alternative+to+oral+gavage%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">A quick and low-intensity method for oral administration to large numbers of mice: A possible alternative to oral gavage.</a> Lab Anim. 56 (2), 185-190 (2022).</li>
<li>Küster, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voluntary+ingestion+of+antiparasitic+drugs+emulsified+in+honey+represents+an+alternative+to+gavage+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Voluntary ingestion of antiparasitic drugs emulsified in honey represents an alternative to gavage in mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (2), 219-223 (2012).</li>
<li>Gonzales, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+method+of+oral+administration+by+peanut+butter+pellet+formulation+results+in+target+engagement+of+BACE1+and+attenuation+of+gavage-induced+stress+responses+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Alternative method of oral administration by peanut butter pellet formulation results in target engagement of BACE1 and attenuation of gavage-induced stress responses in mice.</a> Pharmacol Biochem Behav. 126, 28-35 (2014).</li>
<li>Teixeira-Santos, L., Albino-Teixeira, A., Pinho, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+method+for+oral+drug+administration+by+voluntary+intake+in+male+and+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">An alternative method for oral drug administration by voluntary intake in male and female mice.</a> Lab Anim. 55 (1), 76-80 (2021).</li>
<li>Schalbetter, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+application+of+clozapine-N-oxide+using+the+micropipette-guided+drug+administration+%28MDA%29+method+in+mouse+DREADD+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Oral application of clozapine-N-oxide using the micropipette-guided drug administration (MDA) method in mouse DREADD systems.</a> Lab Anim (NY). 50 (3), 69-75 (2021).</li>
<li>Vanhecke, D., Bugada, V., Buch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Refined+tamoxifen+administration+in+mice+by+encouraging+voluntary+consumption+of+palatable+formulations%29%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Refined tamoxifen administration in mice by encouraging voluntary consumption of palatable formulations).</a> bioRxiv. , (2023).</li>
<li>Heraudeau, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropipette-guided+drug+administration+%28MDA%29+as+a+non-invasive+chronic+oral+administration+method+in+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Micropipette-guided drug administration (MDA) as a non-invasive chronic oral administration method in male rats.</a> J Neurosci Methods. 398, 109951(2023).</li>
<li>Sfanos, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compositional+differences+in+gastrointestinal+microbiota+in+prostate+cancer+patients+treated+with+androgen+axis-targeted+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate+Cancer+Prostatic+Dis%22%5BJournal%5D)">Compositional differences in gastrointestinal microbiota in prostate cancer patients treated with androgen axis-targeted therapies.</a> Prostate Cancer Prostatic Dis. 21 (4), 539-548 (2018).</li>
<li>Shrestha, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+the+urinary+microbiome+in+men+with+positive+versus+negative+biopsies+for+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Profiling the urinary microbiome in men with positive versus negative biopsies for prostate cancer.</a> J Urol. 199 (1), 161-171 (2018).</li>
<li>Peiffer, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition+of+gastrointestinal+microbiota+in+association+with+treatment+response+in+individuals+with+metastatic+castrate+resistant+prostate+cancer+progressing+on+enzalutamide+and+initiating+treatment+with+anti-PD-1+%28pembrolizumab%29%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Composition of gastrointestinal microbiota in association with treatment response in individuals with metastatic castrate resistant prostate cancer progressing on enzalutamide and initiating treatment with anti-PD-1 (pembrolizumab).</a> Neoplasia. 32, 100822(2022).</li>
<li>Jones, C. B., Peiffer, L. B., Davis, C. M., Sfanos, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examining+the+effects+of+4He+exposure+on+the+gut-brain+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Radiat+Res%22%5BJournal%5D)">Examining the effects of 4He exposure on the gut-brain axis.</a> Radiat Res. 197 (3), 242-252 (2022).</li>
<li>Walker, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+less+stressful+alternative+to+oral+gavage+for+pharmacological+and+toxicological+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Appl+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">A less stressful alternative to oral gavage for pharmacological and toxicological studies in mice.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 260 (1), 65-69 (2012).</li>
<li>Miguelena Chamorro, B., Swaminathan, G., Mundt, E., Paul, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+more+translatable+research%3A+Exploring+alternatives+to+gavage+as+the+oral+administration+route+of+vaccines+in+rodents+for+improved+animal+welfare+and+human+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Towards more translatable research: Exploring alternatives to gavage as the oral administration route of vaccines in rodents for improved animal welfare and human relevance.</a> Lab Anim (NY). 52 (9), 195-197 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>200 &마이크로; L 피펫 팁</td><td>Mettler Toledo</td><td>17005860</td><td></td></tr><tr><td>AB SCIEX Triple QTRAP 5500 질량 분광 검출기</td><td>Sciex</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Akkermansia muciniphila strain muc genomic DNA</td><td>American Type Culture Collection</td><td>BAA-835D-5</td><td></td></tr><tr><td>Ammonium acetate</td><td>Sigma&ndash; Aldrich</td><td>5.43834</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J 마우스</td><td>Jackson Laboratories</td><td>Strain# 000664</td><td></td></tr><tr><td>C. scindens strain 35704</td><td>American Type Culture Collection</td><td>35704</td><td></td></tr><tr><td>Cefoxitin</td><td>Sagent&nbsp;</td><td>NDC25021-109-10</td><td></td></tr><tr><td>옥수수 기름</td><td>MedChemExpress</td><td>HY-Y1888</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC611050040</td><td></td></tr><tr><td>포름산</td><td>Sigma&ndash; Aldrich</td><td>5.33002</td><td></td></tr><tr><td>FVB/NJ 마우스</td><td>Jackson Laboratories</td><td>Strain# 001800</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>시그마&ndash; Aldrich</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Hexane</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-002-996</td><td></td></tr><tr><td>LC-MS 등급 물</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-650-357</td><td></td></tr><tr><td>메탄올</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-003-340</td><td></td></tr><tr><td>Microtainer 혈청 분리기 튜브</td><td>Becton Dickinson</td><td>02-675-185</td><td></td></tr><tr><td>분자 생물학 등급 물</td><td>Corning</td><td>46-000-CI</td><td></td></tr><tr><td>NSG 마우스</td><td>Jackson Laboratories</td><td>Strain# 005557</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Qubit DNA HS kit</td><td>Invitrogen</td><td>Q32851</td><td></td></tr><tr><td>Racemic&nbsp; equol-d4</td><td>산타크루즈 생명공학</td><td>sc-219827</td><td></td></tr><tr><td>강화 클로스트리듐 한천</td><td>혐기압 시스템</td><td>AS-6061</td><td></td></tr><tr><td>강화 클로스트리듐 육수</td><td>혐기압 시스템</td><td>AS-606</td><td></td></tr><tr><td>S-equol</td><td>MedChemExpress</td><td>HY-100583</td><td></td></tr><tr><td>LC-MS</td><td>케이맨 화학</td><td>10010173</td><td></td></tr><tr><td>단일 참조 표준 채널 피펫</td><td>Rainin</td><td>17008652</td><td></td></tr><tr><td>Streptococcus salivarius genomic DNA</td><td>American Type Culture Collection</td><td>BAA-1024D-5</td><td></td></tr><tr><td>Sweetened condensed milk</td><td>California Farms</td><td>B09TGQ7WV8</td><td></td></tr><tr><td>VSL#3 VSL#3</td><td></td><td>B07WX1LVHL</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-glucuronidase from Helix pomatia</td><td>Sigma&ndash; 알드리치</td><td>G7017</td><td></td></tr></tbody></table>

설치류 모델에서 구강 배게이지에 대한 대체 방법으로 마이크로피펫 유도 약물 투여 사용

Use of Micropipette-Guided Drug Administration as an Alternative Method to Oral Gavage in Rodent Models

MDA는 마우스 모델에서 박테리아 균주의 경구 전달에 사용할 수 있습니다. C57BL/6J 마우스는 MDA 교육 세션을 시작하기 전에 공생 미생물 군집을 제거하기 위해 2일 동안 항생제(음용수 내 세폭시틴)를 투여했습니다. 가당 연유/물 용액을 처리 투여 전 3일 동안 매일 1회 연속으로 투여하였다. 마우스는 MDA 치료 투여 중 부드러운 목덜미에 의해 잠시 제지되었습니다. 4일째에, 마우스에게 PBS(음성 대조군, n=4) 또는 이전에 가당 연유/물 용액에 재현탁한 C. scindens (desA+ 박테리아, n=4)의 혐기성 배양물을 한 번 처리했습니다. 모든 마우스는 일반적으로 몇 초 이내에 치료를 받고 전체 용량(100μL)을 마셨습니다. 혐기성 세균의 전달과 존재를 검증하기 위해 항생제 처리 후 채취한 대변 샘플과 PBS 또는 C. scindens 처리 후 24시간 후에 채취한 대변 샘플을 비교했습니다(그림 1). 대변 DNA를 분리, 정량화 및 10ng/μL로 정규화하여 C. scindens ATCC 35704 desA 유전자 특이적 프라이머를 사용하여 qPCR을 수행했습니다(표 1). 항생제를 투여한 마우스는 desA+ 박테리아가 거의 또는 전혀 없는 것을 관찰했습니다. 예상대로, C. scindens를 투여한 마우스에서 상당히 더 많은 양의 desA+ 박테리아가 관찰되었으며, 이는 PBS 대조군의 박테리아와 유의하게 달랐습니다(p = 0.0286, 그림 1).
MDA 방법을 사용한 실험 화합물(S-equol)의 전달. NSG(n=15) 및 FVB/NJ(n=18) 마우스는 처리 투여 2일 전에 가당 연유/물 용액으로 훈련을 받았습니다. NSG 마우스는 항생제 처리(식수 내 세폭시틴)를 통해 에퀴올 생성 장내 세균을 제거하고, 이에 따라 내인성 에퀴올 생산을 제거했습니다. FVB/NJ 마우스는 내인성 에쿠올 생산을 제거하기 위해 콩이 없는 식단을 먹였습니다. 모든 쥐는 치료를 시행하기 위해 부드러운 목덜미로 잠시 제지되었습니다. 대조군은 옥수수유와 함께 가당 연유/물 용액을, DMSO 그룹(S-equol의 차량 제어)은 옥수수 기름에 가당 연유/물 용액 및 DMSO를, 에쿠올 그룹은 옥수수 기름에 가당 연유/물 용액 및 에쿠올을 투여받았습니다. 생쥐는 총 43일 동안 MDA 기술로 일주일에 5일 동안 치료를 받았습니다. 생쥐는 일반적으로 몇 초 이내에 치료를 받고 전체 용량(100μL)을 마셨습니다. 전반적으로, 모든 마우스는 특정 날짜에 용량의 절반 이상을 소비했습니다 (특정 날짜에 부분 용량, 그러나 전날 또는 다음 날 전체 용량). 연구 기간 동안 치료를 완전히 거부한 쥐는 없었습니다. 우리는 스크러핑 후 생쥐를 등에 눕히면 치료 소비 시간이 단축되고 동물이 전체 복용량을 복용하도록 하는 것을 관찰했습니다.
순환하는 에쿠올 수치는 효과적인 MDA 약물 전달을 보여줍니다. 연구가 끝날 때 안락사 후 NSG 마우스에서 혈액 샘플을 채취하여 MDA의 이퀄 전달이 연구 동물의 순환 에쿠올 수치로 이어졌는지 확인했습니다. 적도를 투여한 마우스 중 하나에서 LC/MS/MS 분석을 수행하기에 충분한 혈액을 회수하지 못했습니다. 혈청 적혈구 수치는 존스 홉킨스 의과대학의 분석 약리학 공유 리소스(Analytical Pharmacology Shared Resource)에서 LC/MS/MS로 측정했습니다. 대조군과 DMSO(equol vehicle) 그룹에서는 순환 이퀄이 관찰되지 않은 반면, 이퀄 처리한 마우스에서는 검출 가능한 순환 이퀄이 관찰되었습니다(그림 2). 중요한 것은, 이 실험에서 동물 희생 날짜와 시간이 다르기 때문에 에퀴올 처리한 쥐의 순환 에퀴올 수치에 약간의 변화가 있을 것으로 예상된다는 것입니다.
장내 미생물 군집은 MDA 처리 후에도 변하지 않습니다. MDA 우유 용액(에쿠올 유무)이 장내 미생물총(microbiota)에 미치는 영향은 FVB/NJ 마우스를 사용하여 평가했습니다. 기준선에서 채취한 샘플(처리 없음/MDA 없음)과 치료 시작 후 7일(MDA 시작 후 9일, 교육일 포함)에서 채취한 샘플의 미생물 조성을 정량화했습니다. 앞서 설명한 바와 같이 종 특이적 qPCR 분석(그림 3)으로 평가한 바와 같이 핵심 장내 미생물군(Akkermansia muciniphila, Bifidobacterium spp., Streptococcus salivarius, Lactobacillus spp.)의 총 박테리아 부하 또는 전체 미생물 구성에서 유의한 변화는 관찰되지 않았습니다21,22. 한 케이지는 기준선과 MDA 처리 후 사이에 락토바실러스에서 상당한 차이를 보였습니다. 그러나 이 발견은 DMSO 차량 제어에서 관찰되었으며 모든 케이지에서 일관되지 않았습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66836/66836fig01.jpg"> 
그림 1: MDA는 분변 qPCR을 통해 정량화할 수 있는 혐기성 박테리아를 쥐의 장에 전달합니다. C57BL/6J 마우스는 식수에서 이틀 연속 항생제를 투여했습니다. 그런 다음 MDA 방법을 사용하여 혐기성 박테리아 C. scindens 로 마우스에 처리했습니다. 분변 C. scindens (desA+) 박테리아 부하를 항생제 처리 후 및 MDA 처리(PBS 또는 C. scindens) 후 24시간 후에 desA 유전자에 대해 qPCR로 측정했습니다. (A) C. scindens-specific desA 유전자 정량화는 항생제 처리 후 및 MDA 처리 후 24시간 후 PBS- 및 C. scindens-투여된 마우스 사이에서 나타납니다. (B) (A)에서 MDA 후 24시간 동안 표시된 것과 동일한 데이터가 열 그래프로 표시됩니다. 통계적 유의성은 비모수 Mann-Whitney 검정을 사용하여 결정되었습니다. (*) p = 0.0286, 오차 막대 = SD. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66836/66836fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66836/66836fig02.jpg"> 
그림 2: MDA 기법을 통해 equol을 투여한 NSG 마우스의 순환 equol 수치 분석. 혈청 이퀄 수치는 대조군(n=5), DMSO(비히클, n=5) 및 이퀄(n=4) 처리한 마우스의 LC/MS/MS(MS)를 통해 정량화되었습니다. 에콰올을 투여한 쥐 중 하나에서 LC/MS/MS를 수행하기에 충분한 혈액이 회수되지 않았습니다. 이러한 치료법은 MDA 방법을 사용하여 전달되었습니다. 혈청 에쿠올은 에쿠올 투여군에서만 검출될 수 있었다. 정량화 한계&lt; 5ng/mL입니다. 통계적 유의성은 다중 비교를 통한 비모수 일원 분산 분석(Non-Parametric One-Way ANOVA)을 사용하여 결정되었습니다(Dunn의 수정). (**) p = 0.0053, 오차 막대 = SD. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66836/66836fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66836/66836fig03.jpg"> 
그림 3: MDA 처리 후 FVB/NJ 마우스에서 핵심 장내 세균 및 총 세균 부하 수준은 변하지 않았습니다. MDA 방법을 사용한 치료 투여 전후에 표적 미생물 군집에 대한 qPCR Cq 값에서 유의미한 변화는 관찰되지 않았습니다. 락토바실러스는 베이스라인과 MDA 처리 사이의 케이지 3에서만 유의한 차이(*, p = 0.0321)를 보였습니다. 이 발견은 케이지 간에 일관되지 않았습니다. 케이지 번호는 C1-C4로 표시됩니다. 통계적 유의성은 다중 비교를 통한 일원 분산 분석(Tukey correction)을 사용하여 결정되었습니다. 오차 막대 = SD. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66836/66836fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>프라이머 이름</td>
			<td>프라이머 염기서열</td>
			<td>PCR 조건</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DesA_CS_F</td>
			<td>5'-GGACAGGGTGTCGGCTTTATG-3'</td>
			<td rowspan="2">93°C 3분, 34사이클(95°C 30초, 54°C 30초)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DesA_CS_R</td>
			<td>5'-TTACTTCACCTTCGCCAGTTTCTG-3'</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 1: desA+ 박테리아(C. scindens)에 대한 프라이머 및 qPCR 조건.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>프라이머 이름</td>
			<td>프라이머 염기서열</td>
			<td>PCR 조건</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V6_F V6_R</td>
			<td>5'-CAACGCGWRGAACCTTACC-3' 5'-CRACACGAGCTGACGAC-3'</td>
			<td>95 °C, 3분 36 사이클 95 °C, 30 초 53 °C, 30 초</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A.muc_F A.muc_R</td>
			<td>5'-CAGCACGTGAAGGTGGGGAC-3' 5'-CCTTGCGGTTGGCTTCAGAT-3'</td>
			<td>50 °C, 5분 95 °C, 10 분 40 사이클 95 °C, 15 초 60 °C, 1분</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bifido_F Bifido_R</td>
			<td>5'-CGGGTGAGTAATGCGTGACC-3' 5'-TGATAGGACGCGACCCCA-3'</td>
			<td>95 °C, 3분 36 사이클 95 °C, 30 초 53 °C, 30 초</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S. salivarius_F S. salivarius_R</td>
			<td>5'-CACGCCATGCTGGAAGTG-3' 5'-GCGATGAGCCAAGCTGAAG-3'</td>
			<td>95 °C, 10 분 44 사이클 95 °C, 15 초 60 °C, 1분</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lacto_F Lacto_R</td>
			<td>5'-TGGAAACAGRTGCTAATACCG-3' 5'-GTCCATTGTGGAAGATTCCC-3'</td>
			<td>50 °C, 2 분 95 °C, 10 분 40 사이클 95 °C, 15 초 62 °C, 1분</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 2: 핵심 장내 미생물총(core gut microbiota)에 대한 MDA의 효과를 측정하기 위해 사용된 프라이머 및 qPCR 조건.

Oral gavage (OG) with the use of a cannula attached to a syringe is one of the most common methods used to deliver precise dosing of compounds to the ...

use-micropipette-guided-drug-administration-as-an-alternative-method

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

중추 신경계의 행동 약물의 철저한 잠복기 테스트는 종종 평가 및 관리의 구체적인 노선과 공동으로 마약 biodistribution을 비교를 포함합니다. 여기 세 일반적으로 사용되는 체계 배달 방법 (정맥 intraperitoneal, 그리고 구두)뿐만 아니라 로컬 배달하는 방법 (대류 향상된 전송)은 생쥐에서 증명하고 있습니다.

쥐 모델에서 중추 신경계의 질병 치료를위한 체계와 지역 마약 배달

연구 설치류와 함께 안전하고 편안하게 일하는 것은 처리 및 규제 방법의 핵심 역량이 필요합니다. 이 문서는 안전하게 처리하고 효과적으로 마우스 및 쥐에 화합물을 관리하는 데 필요한 기본 원칙을 제시합니다.

수동 규제와 마우스 및 쥐 일반적인 합성 관리 경로

정맥자가 관리 (IVSA) 패러다임은 동물의 학대 약물의 강화 속성을 검사의 황금 표준으로 간주됩니다. 이 원고는 신뢰할 수있는 IVSA 데이터를 얻기 위해 필요한 실험 절차와 수술 기법을 설명합니다. 특히, 세심한 카테 테르 주입 및 유지 관리가 강조 표시됩니다.

마우스 모델에서 정맥 주사 자기 관리를위한 방법

출처: Poland, R. et al. 동기 부여된 행동의 분자 기질을 연구하기 위한 설치류 뇌 미세 주사. J. Vis. 경험. (2015년)이 비디오에서는 주사기와 마이크로인젝터 튜브로 구성된 물로 채워진 미세 주입 설정이 정확한 약물 전달을 위해 사용됩니다. 사전 이식된 가이드 캐뉼라가 있는 쥐는 표적 뇌 미세 주사를 받아 조직 손상을 최소화하면서 깨어 있는 동물에게 치료제를 정확하게 투여할 수 있습니다.

깨어 있는 설치류 뇌에 치료제의 미세 주입 기반 전달

출처: Kanazawa, T., et al. 코에서 뇌로 약물 전달을 평가하기 위한 흡입 마취 하에 비강내 투여를 위한 새로운 방법. J. Vis. 경험. (2018년)이 비디오는 코에서 뇌로 약물 전달을 달성하기 위해 마취된 마우스에 방사성 표지 약물을 비강내 투여하는 방법을 보여줍니다. 약물이 비강 상피를 통과하고 신경 경로를 통해 뇌에 도달하는 방법과 모양체 운동이 약물 보유 및 제거에 어떤 영향을 미치는지 설명합니다. 또한 비디오에서는 식도를 통해 캐뉼라를 삽입하여 모양체 운동에 반대하여 약물을 전달하고 유지력을 높이고 수송 효율성을 향상시키는 대체 역 캐뉼라 삽입 방법에 대해 설명합니다.

코에서 뇌로 약물 전달을 위한 피펫 및 역캐뉼라 삽입을 통한 마우스의 비강내 약물 투여

우리는 카테터를 이식하거나 마우스의 오른쪽 측면 뇌실에 알약 주입을 수행하여 중추 신경계에 약물을 대상으로하는 방법을 설명합니다. 우리는 안티센스 올리고 뉴클레오티드의 전달에 특히 초점을 맞 춥니 다. 이 기술은 다른 약물과 쥐에 쉽게 적응할 수있다.

설치류 중추 신경계에 약물을 직접 심실 배달

설치류는 행동과 복잡한 정신 장애의 분자 기질을 조사하기에 적합한 모델입니다. 깨어 있는 설치류의 뇌 미세주입은 질병 기질을 밝히는 데 사용할 수 있습니다. 효율적이고 사용자 정의 가능한 뇌 미세주입 방법과 동기 부여를 정량화하는 조작적 패러다임의 실행이 제시됩니다.

쥐 뇌 미세 주입은 분자 기판 동기를 행동을 연구하기 위해

다음 프로토콜은 일반적으로 사용되는 구강 투여 방법 대신 경구 용해 스트립 (ODS)을 사용하여 만성 경구 약물 투여를위한 신규 한 방법을 설명한다. 우리는 ODS 방법을 사용하여 전임상, 경구 약물 전달은 구강 투여에 안전하고 편리하며 인도적인 대안을 나타낸다는 것을 보여줍니다.

약리 및 독성 연구에 대한 구두 또한 용해 스트립을 활용 : 동물 용 구강 투여에 대한 간단하고 동물 애호 대안

이 절차의 전반적인 목표는 수유와 비만의 마우스 모형에서 이용될 수 있는 약의 자기 관리를 위한 방법을 기술하는 것입니다.

먹이와 비만의 마우스 모형에 있는 약의 자기 관리

설치류에서 위관을 통한 경구 투여는 구속과 관련된 고통을 유발할 수 있습니다. 우리는 CBD가 풍부한 대마초 추출물의 구강점막/협측 투여를 탐색했으며, 쥐를 3mg/kg/일의 추출물로 15일 동안 치료했습니다. 치료는 동물을 다루기 위해 애정 어린 터치 기술을 사용하여 마이크로피펫으로 경구 투여되었습니다.

설치류에서 대마초 제품 투여를 위한 대체 방법으로서의 Oromucosal

배우세요 마이크로피펫 유도 약물 투여(MDA)를 사용하여 설치류 모델에서 구강 배게이지 대안으로 약물을 투여하는 방법을. 이 기술은 동물의 스트레스를 줄이고 실험 편향을 최소화하여 전립선암 연구의 데이터 신뢰성을 높입니다.

설치류 모델에서 구강 배게이지에 대한 대체 방법으로 마이크로피펫 유도 약물 투여 사용

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