2024년 5월 31일
이 논문에서는 닭 GSDME(chGSDME-NT) 및 요오드화 프로피듐(PI)의 N 말단 단편에 대한 항체로 이중 염색 후 유세포 분석을 사용하여 발열 세포를 식별하는 방법에 대해 설명합니다.
우리 연구팀의 목표는 조류 세포가 포유류 세포와 유사한 pyroptosis를 겪는지 여부를 확인하는 것입니다. 또한, 보다 정확하고 쉬운 방법으로 파이롭토시스를 판별하는 것을 목표로 합니다. 조류 종의 많은 유전자는 포유류의 유전자와 크게 다르기 때문에 조류 세포 사멸 연구를 위해 포유류 세포 연구에 일반적으로 사용되는 시약을 사용하기가 어렵습니다.
따라서 조류 세포 사멸에 대한 연구는 인간 세포나 쥐 세포에 대한 연구보다 훨씬 더 어렵다. 우리는 gasdermin N-말단 단편에 의해 형성된 pyroptotic cell의 특징적인 원형질막 공극을 활용하여 pyroptosis의 결정을 위한 유세포 기반 전략을 개발합니다. 이 새로운 접근법을 통해 우리는 조류 세포에서 감염성 활액낭 질환 유발 열(pyroptosis)의 발생을 관찰했습니다.
웨스턴 블롯 또는 AFM 분석과 같은 이전 방법과 달리, 당사의 프로토콜은 원형질막 공극 형성과 원형질막 파열이라는 두 가지 매개변수를 동시에 통해 발열 세포의 비율을 정확하게 정량화할 수 있어 열병합 세포를 다른 형태의 세포 사멸과 구별할 수 있습니다.
본 논문은 유세포 분석법을 이용한 식별을 통해 조류 세포가 포유류 세포와 유사한 파이롭토시스(pyroptosis)를 겪는지 조사합니다. 이 연구에서는 닭 GSDME의 N-말단 단편에 대한 항체와 프로피듐 아이오다이드(propidium iodide)를 이용한 이중 염색법을 사용합니다.
유세포 분석법을 이용한 조류 세포 내 파이롭토시스(pyroptosis)의 정량적 식별은 염증성 세포 사멸을 다른 형태의 세포 사멸과 구별하는 데 있어 중요한 공백을 메우며, 특히 유전적 차이로 인해 종 간 분석법 전이가 제한적인 경우에 매우 유용합니다. 이러한 이중 파라미터 접근 방식은 세포 사멸 경로 분석의 예측 신뢰도를 높여, 바이오 의약품 및 백신 R&D의 조기 발견과 기전적 리스크 감소를 지원합니다. 본 방법은 질병 관련 조류 모델에서 세포 사멸 기전을 명확히 함으로써 견고한 포트폴리오 의사결정을 가능하게 합니다.
이 이중 매개변수 유세포 분석법은 초기 발견 및 분석 개발 단계에 통합되어, 조류 세포 사멸 연구를 위한 표적 검증과 전임상 모델 선택 사이의 가교 역할을 합니다.