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고처리량 및 정량적 발광 기반 리포터 분석을 사용한 DNA 이중 가닥 파손 복구 활성 평가
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This content is Free Access.
JoVE Journal Cancer Research
Assessment of DNA Double Strand Break Repair Activity Using High-throughput and Quantitative Luminescence-Based Reporter Assays

고처리량 및 정량적 발광 기반 리포터 분석을 사용한 DNA 이중 가닥 파손 복구 활성 평가

Full Text
2,269 Views
05:01 min
June 14, 2024

DOI: 10.3791/66969-v

Diego Grande*1, Eeson Rajendra*1, Bethany Mason1, Alessandro Galbiati1, Simon J. Boulton1,2, Graeme C. M. Smith1, Helen M. R. Robinson1

1Artios Pharma Ltd, Cambridge, 2The Francis Crick Institute, London

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

우리는 발광 기반 염색체 외 리포터 기질 세트를 사용하여 세포에서 이중 가닥 절단 복구 경로 숙련도를 평가하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

Artios는 DNA 손상 반응을 표적으로 하는 새로운 항암 약물을 개발하고 있습니다. 이를 위해 당사는 세포 DNA 복구 활성을 측정하기 위한 다양한 새로운 분석을 개발했습니다. 이러한 분석은 우리 프로그램에 큰 영향을 미쳤으며, 미충족 의료 요구가 높은 환자를 대상으로 임상 단계 자산을 테스트하게 되었습니다.

표적 세포 활성을 정확하게 측정하는 것은 새로운 표적 치료제를 발전시키는 데 필수적입니다. 효율적인 약물 발견 캠페인을 촉진하는 데 필요한 특성을 가진 DNA 복구 인자에 대한 분석을 생성하는 것은 높은 처리량, 강력한 신호 대 잡음비, 빠른 턴어라운드, 이상적으로는 다양한 생물학적 시스템으로의 이식성에 대한 요구 여부에 관계없이 어려운 일이었습니다. 당사는 4가지 주요 이중 가닥 파손 복구 경로, 상동 재조합, 비상동 말단 접합, 미세 상동 매개 말단 접합 및 단일 가닥 어닐링의 숙련도를 측정하기 위해 견고하고 정량적이며 적정 가능한 발광 기반 리포터 분석 제품군을 개발했습니다.

이러한 리포터 분석은 경로 의존적 복구를 판독하는 것으로 검증되었고, 약리학적 조절에 민감하며, 빠른 처리 시간을 가지고 있습니다. 우리가 개발한 repair substrate는 염색체 외(extrachromosomal)이므로 관심 모델로 일시적으로 transfection하고 고처리량 형식으로 쉽게 확장할 수 있습니다. 우리는 우리의 분석 시스템이 DDR 약물 발견을 가능하게 할 뿐만 아니라 DDR 생물학에 대한 이해를 보다 광범위하게 넓히는 데 중요한 위치를 차지한다고 믿습니다.

이러한 점에서, 우리는 이 방법이 신약 표적의 식별 및 기소를 가속화하는 데 도움이 될 것으로 기대하며, 미충족 의료 수요가 높은 암과 같은 질병에 대한 의약품으로 이어지기를 바랍니다.

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Cancer Research Issue 208 Non-homologous End Joining Microhomology-mediated End Joining Single Strand Annealing Nanoluciferase Reporter Assay High-throughput Screening DNA Repair Research Drug Discovery

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