Name: Equine Enteric Glial Culture and Application to the Study of a Neural Inflammatory Mechanism in Equine Colic (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: 배우세요 말 장염 신경 염증 메커니즘 연구를 위한 장 신경교세포 분리 배양법. 이 재현 가능한 프로토콜은 수술 후 합병증 예방과 장 상피 장벽 기능 이해에 활용됩니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>배앓이 관련 염증에서 장내 신경교세포-상피 상호작용 연구(Studying Enteric Glial-Epithelial Interactions in Colic-Related Inflammation)

<ol><li>Tinker, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+study+of+equine+colic+incidence+and+mortality%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Prospective study of equine colic incidence and mortality.</a> Equine Vet J. 29 (6), 448-453 (1997).</li>
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<li>Al-Sadi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-6+modulation+of+intestinal+epithelial+tight+junction+permeability+is+mediated+by+JNK+pathway+activation+of+claudin-2+gene%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Interleukin-6 modulation of intestinal epithelial tight junction permeability is mediated by JNK pathway activation of claudin-2 gene.</a> PLoS One. 9 (3), e85345(2014).</li>
<li>Ochoa-Cortes, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glial+cells%3A+A+new+frontier+in+neurogastroenterology+and+clinical+target+for+inflammatory+bowel+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Enteric glial cells: A new frontier in neurogastroenterology and clinical target for inflammatory bowel diseases.</a> Inflamm Bowel Dis. 22 (2), 433-449 (2016).</li>
<li>Ziegler, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glial+cell+network+function+is+required+for+epithelial+barrier+restitution+following+intestinal+ischemic+injury+in+the+early+postnatal+period%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Enteric glial cell network function is required for epithelial barrier restitution following intestinal ischemic injury in the early postnatal period.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 326 (3), G228-G246 (2024).</li>
<li>Grubišić, V., Gulbransen, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glia%3A+the+most+alimentary+of+all+glia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Enteric glia: the most alimentary of all glia.</a> J Physiol. 595 (2), 557-570 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 M HEPES 버퍼</td><td>Gibco</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>10 mM HEPES</td><td>Life Technologies</td><td>15630-106</td><td></td></tr><tr><td>2 mM GlutaMAX</td><td>Life Technologies</td><td>25050-061</td><td></td></tr><tr><td>4' 6-Diaminidino-2-Phenylindol</td><td>Invitrogen</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F12</td><td>Life Technologies</td><td>12634-010</td><td></td></tr><tr><td>알파 평활근 액틴 항체</td><td>Abcam</td><td>7817</td><td></td></tr><tr><td>Amphotericin B</td><td>Sigma</td><td>AA9529</td><td>4.4 g/mL 스톡 분취량, 최종 농도 1.1 &마이크로; g/mL</td></tr><tr><td>항진균제 1x</td><td>Gibco</td><td>15240-096</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>혈청 알부민</td><td>Sigma</td><td>AA3311</td><td></td></tr><tr><td>BSA 50mg/mL 원액</td><td>Sigma</td><td>A3311</td><td></td></tr><tr><td>CaCL2</td><td>ACROS 유기적</td><td>206791000</td><td>Equine Ringer ' 의 구성 요소 s 스톡 1: 다른 성분과 결합한 다음 이 스톡 100mL를 눈금이 매겨진 실린더에 넣고 탈이온수로 1L로 희석합니다. 5% CO2. 로 pH를 7.4로 조정 Equine Ringer와 결합' s 재고 2 완료 " 링거' s Solution"을 참조하십시오.</td></tr><tr><td>Collagenase</td><td>Sigma</td><td>9891</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-F12 매체</td><td>Thermo Fisher</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>당나귀 토끼 방지 IgG Alexa Fluor 594</td><td>Invitrogen</td><td>21207</td><td></td></tr><tr><td>EVOM EndOhm 이중 전극 TEER 측정 챔버</td><td>World Precision Instruments</td><td>EVM-EL-03-01</td><td></td></tr><tr><td>EVOM Manual for TEER Measurement</td><td>World Precision Instruments</td><td>EVM-MT-03-01</td><td></td></tr><tr><td>G5</td><td>Gibco</td><td>17503012</td><td></td></tr><tr><td>겐타마이신 용액</td><td>Sigma</td><td>G1272</td><td>최종 농도 20 &마이크로; g/mL</td></tr><tr><td>GFAP 항체</td><td>Abcam</td><td>4674</td><td></td></tr><tr><td>염소 안티 마우스 IgG Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>28175</td><td></td></tr><tr><td>IL-1&beta; ELISA</td><td>Thermo Fisher</td><td>ESIL1B</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Thermo Fisher</td><td>P330-500</td><td>Equine Ringer 구성 요소 s 스톡 1: 다른 성분과 결합한 다음 이 스톡 100mL를 눈금이 매겨진 실린더에 넣고 탈이온수로 1L로 희석합니다. 5% CO2. 로 pH를 7.4로 조정 Equine Ringer와 결합' s 재고 2 완료 " 링거' s Solution"을 참조하십시오.</td></tr><tr><td>L-글루타민 용액</td><td>Corning</td><td>25-00-Cl</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>BD Bioscience</td><td>354277</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Thermo Fisher</td><td>M33-500</td><td>Equine Ringer' 구성 요소 s 스톡 1: 다른 성분과 결합한 다음 이 스톡 100mL를 눈금이 매겨진 실린더에 넣고 탈이온수로 1L로 희석합니다. 5% CO2. 로 pH를 7.4로 조정 Equine Ringer와 결합' s 재고 2 완료 " 링거' s Solution"을 참조하십시오.</td></tr><tr><td>N2</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Thermo Fisher</td><td>BP332-1</td><td>Equine Ringer' 구성 요소 s 스톡 2: 다른 성분과 결합한 다음 이 스톡 100mL를 눈금이 매겨진 실린더에 넣고 탈이온수로 1L로 희석합니다. 5% CO2. 로 pH를 7.4로 조정 Equine Ringer와 결합' s 재고 1 완료 " 링거' s Solution"을 참조하십시오.</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Thermo Fisher</td><td>S271-10</td><td>Equine Ringer의 구성 요소 s 스톡 1: 다른 성분과 결합한 다음 이 스톡 100mL를 눈금이 매겨진 실린더에 넣고 탈이온수로 1L로 희석합니다. 5% CO2. 로 pH를 7.4로 조정 Equine Ringer와 결합' s 재고 2 완료 " 링거' s Solution"을 참조하십시오.</td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Thermo Fisher</td><td>BP329-500</td><td>말 링거의 구성 요소 s 스톡 2: 다른 성분과 결합한 다음 이 스톡 100mL를 눈금이 매겨진 실린더에 넣고 탈이온수로 1L로 희석합니다. 5% CO2. 로 pH를 7.4로 조정 Equine Ringer와 결합' s 재고 1 완료 " 링거' s Solution"을 참조하십시오.</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Thermo Fisher</td><td>S637-212</td><td>말 링거의 구성 요소 s 스톡 2: 다른 성분과 결합한 다음 이 스톡 100mL를 눈금이 매겨진 실린더에 넣고 탈이온수로 1L로 희석합니다. 5% CO2. 로 pH를 7.4로 조정 Equine Ringer와 결합' s 재고 1 완료 " 링거' s Solution"을 참조하십시오.</td></tr><tr><td>펜/스트렙 용액</td><td>Gemini</td><td>400-109</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-lysine</td><td>Sigma</td><td>P2636</td><td>0.5 mg/mL in 1x borate buffer</td></tr><tr><td>Prism 소프트웨어</td><td>GraphPad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Protease</td><td>Sigma</td><td>P4630</td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨 용액</td><td>Sigma</td><td>S8761</td><td>7.5% 원액</td></tr></tbody></table>

equine enteric glial culture and application to the study of a neural inflammatory mechanism in equine colic

Equine Enteric Glial Culture and Application to the Study of a Neural Inflammatory Mechanism in Equine Colic

효소 및 기계적 소화를 추가로 진행하여 점막하층(그림 1)에 말 jejunum을 미세해부하면 말 장아교세포의 생존 가능한 세포 배양을 생성할 수 있습니다. 세포는 다른 종의 장내 신경교세포(enteric glia)와 일치하는 방추형 세포의 우세를 가진 다형성(pleomorphism)을 보여주었습니다(그림 2A). 배양 결과, 선택적 신경교세포 마커인 신경교세포(glial fibrillary acidic protein, GFAP)에 대해 양성이었으며, 섬유아세포 오염이 적었습니다(alpha SMA, 그림 2B). 일부 경우에는 점막하층의 미세해부가 충분히 제어되지 않았으며, 섬유아세포 마커 평활근 액틴의 면역형광을 통해 관찰된 높은 비율의 섬유아세포로 배양물이 오염되었습니다(그림 3).
다음으로, 말 장내 신경교세포의 유용성에 대한 예로, IL-1β에 노출된 장내 신경교세포가 장 상피장벽 기능에 미치는 영향을 평가하였다. 24시간 동안 10 ng 및 25 ng IL-1β에 노출된 말 점막하 장내 신경교세포의 배지에 대한 기저측 노출은 투과성을 유의하게 증가시켰다(p=0.05 및 0.04, 대조 배지의 평균 = 0.9, 신경교세포의 평균 10 ng IL-1β 그룹 = 0.8, 95% 신뢰 구간 = -0.2 - 0.02, 신경교의 평균 25 ng IL-1β 그룹 = 0.8, 95% 신뢰 구간 = -0.1995 - 0.01060, n = 3-4) (그림 4A). 그러나 IL-1β에 노출된 장내 신경교세포에 의해 생성되고 설치류 모델12에서 장세포 투과성 증가를 유도하는 것으로 입증된 염증성 사이토카인인 기저외측 10-25 ng 말 IL-6에 말 상피 단층이 노출된 경우, 말 장세포 단층 투과성은 유의하게 증가하지 않았습니다(그림 4B)
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67244/67244fig01.jpg"> 그림 1: 미세해부와 효소 및 기계적 소화에 의한 말 jejunum에서 장내 신경교세포의 분리. (A) 제주눔은 항간막 경계를 따라 절단하고 점막 쪽을 위로 핀으로 고정하였다. (B) 장 융모를 현미경으로 시각화하고 희미한 lamina propria가 시각화될 때까지 부드럽게 긁어내어 제거했습니다. (C) 그런 다음 평활근 섬유가 반투명 점막하를 통해 보일 때까지 라미나 프로프리아층을 제거했습니다. (D) 점막하층을 텐트로 덮고 근육층에서 벗겨내어 필요에 따라 섬유질 태그를 절단했습니다. 이미지는 10x 해부 현미경(B,C)으로 획득했습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67244/67244fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67244/67244fig02.jpg"> 그림 2: 말 점막하 장내 신경교세포 배양의 이미징. (A) 말 장내 신경교세포의 성상(화살표), 방추형(열린 화살촉) 및 신경절(닫힌 화살촉) 형태는 위상차 현미경으로 평가되었습니다. (B) 배양물의 순도는 GFAP에 대한 염색으로 평가되었으며, 섬유아세포 마커에 대한 평활근 액틴 스케일 바 = 100mm(A), 400mm(B)에 대해 평가했습니다. 약어 : GFAP = glial fibrillar acidic protein; DAPI = 4', 6-디아미디노-2-페닐린돌. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67244/67244fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67244/67244fig03.jpg"> 그림 3: 실패한 말 점막하 장내 신경교세포 배양(equine submucosal enteric glia cultures)의 이미징. 배양물의 순도는 GFAP(빨간색)와 섬유아세포 마커인 평활근 액틴(녹색)에 대한 염색으로 평가되었으며, 이는 섬유아세포 오염의 많은 비율을 보여주었습니다. 노란색 화살촉은 GFAP를 나타내고 흰색 화살촉은 평활근 작용을 나타냅니다. 눈금 막대 = 400mm. 약어: GFAP = 신경교 섬유소 산성 단백질. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67244/67244fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67244/67244fig04.jpg"> 그림 4: 염증성 사이토카인 및 염증성 신경교세포(inflammatory glial products) 노출에 따른 말 상피 단층 TEER. (A) 24시간 동안 10ng 및 25ng의 IL-1β에 노출된 말 점막하장 신경교세포의 배지에 대한 기저측 노출은 투과성을 유의하게 증가시켰습니다(*p = 0.05 및 0.04, 각각 n = 3-4). (B) IL-1β의 기저외측 25ng 및 말 IL-6의 10-25ng에 대한 말 장세포 단층 급성 노출은 말 상피 단층 투과성을 유의하게 증가시키지 않았습니다(n = 2-4). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67244/67244fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
표 1: 분리 및 배양용 시약. 다음 시약을 사용하여 말 장 신경교 분리, 장 신경 교양 및 말 장 상피 줄기 세포 배양을 위한 배지를 제형화했습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67244/67244_Table%201_rev.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Inflammatory postoperative conditions of equine colic (acute abdomen) contribute not only to increased client cost, patient discomfort, and ...

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연구

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Medicine

의학

우리는 적어도 24 시간 동안 자극의 다양한 종류에 대한 응답의 문화와 모니터링 인간의 장 점막의 유지 관리를위한 새로운 방법을 소개합니다. 우리의 방법으로, 조직의 극성이 혀끝의 경로를 통해 생리적 자극 수 있도록 유지됩니다.

인간의 장내 점막의 Explants의 문화와 편광 자극을위한 새로운 방법

이 비디오는 쥐 장의 점막하 및 판막에서 장 신경교세포를 분리하는 방법을 보여줍니다. 점막하 및 얇은 판 propria 조직을 추출하고, 장 신경교세포를 분리하고, 코팅된 웰 플레이트에서 세포를 배양하여 장 신경교세포 배양을 확립하는 단계를 간략하게 설명합니다.

쥐의 점막하부(submucosa and lamina propria)에서 장 신경교세포(enteric glial cells)를 분리(isorating enteric glial cells from the submucosa and lamina propria of a mouse)

우리는 장용 신경계의 신경 세포 및 교세포 구성 요소의 직접적인 연구를위한 세포 배양 프로토콜을 보여줍니다. coverslips는에 신경 / glia의 혼합 문화, 면역 전기 생리학, 개별 신경 세포와 아교 세포 기능을 검사 할 수있는 기능을 제공하는 성인 마우스 myenteric 신경 얼기에서 준비가되어...

<em&gt; 체외</em성인 마우스 Myenteric 신경총에서 분리 된 장내 뉴런과 교세포의&gt; 준비

신경 가소성은 위장 (GI) 요로의 점점 인식하지만, 충분히 이해 기능입니다. 여기, 인간의 췌장 질환의 예에서, 우리는 형태 학적 및 기능적 수준에서 위장관의 신경 가소성 연구를위한 생체 외 신경 가소성의 분석을 제시한다.

췌장 신경 가소성 시뮬레이션 :<em&gt; 체외</em&gt; 이중 신경 가소성 분석

구형세포는 현재 효과적인 장기 치료법이 없는 백혈구이영양증인 크라베병의 특징적인 병리학적 특징입니다. 우리는 활성화된 미세아교세포의 선천적 생물학 및 병원성 잠재력과 구형세포로의 변형을 연구하기 위해 세포 배양 모델을 개발했습니다.

체외 Globoid 셀 Leukodystrophy에서 휴대 병태 생리의 연구에 대한 모델

장 신경계(ENS)는 장 반사를 제어하는 장 벽에 위치한 뉴런과 신경교세포의 네트워크입니다. 이 프로토콜은 Ca2+ 이미징을 사용하여 ENS의 실시간 제제에서 장 뉴런 및 신경교세포의 활동을 기록하는 방법을 설명합니다.

장용 신경계의 제자리 칼슘 이미징에서

장 신경계는 장에서 증식하고 이동하고 군체화하는 신경능선세포에 의해 형성됩니다. 신경능선세포(neural crest cell)는 신경전달물질 표현형에 특이적인 마커를 가진 뉴런으로 분화합니다. 이 프로토콜은 장 신경계 신경전달물질 발현을 시각화하기 위해 쥐 배아 위장관을 해부, 고정 및 면역 염색하는 기술을 설명합니다.

쥐 장내 신경 시스템 개발을 시각화하는 면역 염색

이 기사에서는 성체 마우스에서 결장 운동성의 신경 조절 변화를 식별하기 위한 비디오 이미징 기술과 고해상도 시공간 매핑에 대해 설명합니다. 위장관(GI) 기능에 대한 미묘한 영향은 위장관 질환에 대한 이해를 증진하기 위해 분리된 조직 제제에서 이 접근법을 사용하여 감지할 수 있습니다.

비디오 이미징 및 시공간지도는 마우스에서 위장관 운동성을 분석하는

비정상적인 감각 기능 내장 고통 및 다른 증상 기능 및 염증 성 대 장 질환의 기초. 프로토콜에는 비보 전 쥐 colorectum 저 승 구심 성 신경의 electrophysiological 녹음에 대 한 여기에 제공 됩니다.

생체 외에서 쥐에 있는 저 승 구심 성 섬유의 Electrophysiological 속성의 특성

여기, 우리 장 submucosa 순차적 EDTA 외피를 사용 하 여 divalent 양이온 그리고 외피 비 효소 세포 복구 솔루션에 킬레이트 하에서 장 glial 세포의 설명. 폴 리-D-리 신과 laminin에 결과 세포 현 탁 액을 도금 기능 분석을 위한 submucosal glial 세포의 매우 풍부한 문화에 발생 합니다.

Submucosa 및 성인 마우스의 Lamina Propria 장의 Glial 세포의 고립

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