Name: 마우스 망막의 동결 절편 및 면역 염색 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: 학습하세요 마우스 망막 동결 절편 제작 및 면역 염색 프로토콜로 광수용체 형태를 보존하여 고품질 형광 이미징을 수행하는 방법입니다. 이 기법은 망막 질환의 분자 메커니즘 연구에 필수적입니다.

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<ol><li>Tokuyasu, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunochemistry+on+ultrathin+frozen+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+J%22%5BJournal%5D)">Immunochemistry on ultrathin frozen sections.</a> Histochem J. 12 (4), 381-403 (1980).</li>
<li>Ramos-Vara, J. A., Miller, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((When+tissue+antigens+and+antibodies+get+along%3A+Revisiting+the+technical+aspects+of+immunohistochemistry--the+red%2C+brown%2C+and+blue+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">When tissue antigens and antibodies get along: Revisiting the technical aspects of immunohistochemistry--the red, brown, and blue technique.</a> Vet Pathol. 51 (1), 42-87 (2014).</li>
<li>Usukura, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cryosectioning+technique+for+the+observation+of+intracellular+structures+and+immunocytochemistry+of+tissues+in+atomic+force+microscopy+%28AFM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A cryosectioning technique for the observation of intracellular structures and immunocytochemistry of tissues in atomic force microscopy (AFM).</a> Sci Rep. 7 (1), 6462(2017).</li>
<li>Park, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supramolecular+organization+of+rhodopsin+in+rod+photoreceptor+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">Supramolecular organization of rhodopsin in rod photoreceptor cell membranes.</a> Pflugers Arch. 473 (9), 1361-1376 (2021).</li>
<li>Boonstra, H., Oosterhuis, J. W., Oosterhuis, A. M., Fleuren, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cervical+tissue+shrinkage+by+formaldehyde+fixation%2C+paraffin+wax+embedding%2C+section+cutting+and+mounting%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Arch+A+Pathol+Anat+Histopathol%22%5BJournal%5D)">Cervical tissue shrinkage by formaldehyde fixation, paraffin wax embedding, section cutting and mounting.</a> Virchows Arch A Pathol Anat Histopathol. 402 (2), 195-201 (1983).</li>
<li>Stradleigh, T. W., Ishida, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fixation+strategies+for+retinal+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Fixation strategies for retinal immunohistochemistry.</a> Prog Retin Eye Res. 48, 181-202 (2015).</li>
<li>Thavarajah, R., Mudimbaimannar, V. K., Elizabeth, J., Rao, U. K., Ranganathan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+physical+basics+of+routine+formaldehyde+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oral+Maxillofac+Pathol%22%5BJournal%5D)">Chemical and physical basics of routine formaldehyde fixation.</a> J Oral Maxillofac Pathol. 16 (3), 400-405 (2012).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+preparation+of+mouse+retinal+cryosections%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Histochem%22%5BJournal%5D)">An improved method for preparation of mouse retinal cryosections.</a> Eur J Histochem. 64 (3), 3154(2020).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quick+protocol+for+the+preparation+of+mouse+retinal+cryosections+for+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Biol%22%5BJournal%5D)">A quick protocol for the preparation of mouse retinal cryosections for immunohistochemistry.</a> Open Biol. 11 (7), 210076(2021).</li>
<li>Szel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+topographic+separation+of+two+spectral+classes+of+cones+in+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Unique topographic separation of two spectral classes of cones in the mouse retina.</a> J Comp Neurol. 325 (3), 327-342 (1992).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>-80 > C freezer</td><td>Haier</td><td>DW-86L626</td><td></td></tr><tr><td>접착 현미경 슬라이드</td><td>CITOTEST</td><td>80312-3161</td><td></td></tr><tr><td>Alexa488-Goat anti-Rabbit</td><td>Proteintech</td><td>SA00006-2</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J 마우스</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>cryyosection microtome</td><td>Leica</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>LEICA</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>세포 신호 전달 기술</td><td>4083S</td><td></td></tr><tr><td>해부 현미경</td><td>ZEISS</td><td>3943030830</td><td></td></tr><tr><td>당나귀 혈청</td><td>Solarbio</td><td>S9100</td><td></td></tr><tr><td>임베딩 몰드</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1841</td><td></td></tr><tr><td>미세 해부 가위</td><td>RWD</td><td>S13001-10</td><td></td></tr><tr><td>미세 집게</td><td>RWD</td><td>F11020-11</td><td></td></tr><tr><td>플루오로마운트 수성 장착 매체</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4680</td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td>Shanghai Yuejin</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1049330500</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1048771000</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>FIS-06666</td><td></td></tr><tr><td>레이저 컨포칼 현미경</td><td>ZEISS</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>현미경 커버 유리</td><td>CITOTEST</td><td>80340-3610</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1065860500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1091371003</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T 화합물</td><td>사쿠라</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>아빠 펜</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>Z672548</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>441244</td><td></td></tr><tr><td>토끼 안티 PDE6B</td><td>Proteintech</td><td>22063-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>셰이커</td><td>SCILOGEX</td><td>8042210200</td><td></td></tr><tr><td>스프링 가위</td><td>RWD</td><td>S11036-08</td><td></td></tr><tr><td>설탕</td><td>BioFroxx</td><td>1245GR500</td><td></td></tr><tr><td>슈퍼 글루</td><td>델리</td><td>7147S</td><td></td></tr><tr><td>테니스 스트링 (1.24mm)</td><td>Gosen</td><td>TS761</td><td></td></tr><tr><td>트리브로모에탄올</td><td>맥클린</td><td>T831042</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>Solarbio</td><td>IT9100</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스 망막의 동결 절편 및 면역 염색

Cryosectioning and Immunostaining of Mouse Retina

위에서 설명한 프로토콜에 따라, 생후 1개월 된 야생형 C57Bl/6J 마우스의 눈을 4% PFA로 고정했습니다. 그런 다음 고정된 샘플을 OCT에 삽입하고 동결 절편했습니다. 절편을 항-PDE6B 항체로 면역염색하고 DAPI로 대조염색하여 핵을 라벨링했습니다. PDE6B는 간상 광수용체 세포(rod photoreceptor cells)에서 특이적으로 발현되는 광변환 단백질(phototransduction protein)이다4. 기존 프로토콜과 비교했을 때, 이 프로토콜은 마우스 망막의 형태와 면역형광 이미지의 품질을 모두 크게 개선하여 뛰어난 일관성을 제공합니다. 대표적인 결과는 anti-PDE6B를 사용한 망막 동결절편의 성공적인 면역 염색을 보여줍니다(그림 2). 광수용체 외부 세그먼트는 anti-PDE6B로 명확하게 라벨링되었습니다. 모든 광수용체 바깥쪽 분절은 형태학적으로 온전한 것처럼 보였고, 개별 분절은 식별할 수 있었다...

Tissue sectioning and immunohistochemistry are essential techniques in histological and pathological studies of retinal diseases using animal models. ...

cryosectioning-and-immunostaining-of-mouse-retina

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

신생아 쥐 망막에서 혈관 신생을 조절 다른 유전자 또는 약물의 역할의 조사를 허용하는 혈관의 잘 특성화 생리 학적 모델을...

혈관을 조사하기 위해 신생아 마우스 망막의 전체 마운트 면역 형광 염색<em&gt; 생체 내</em

postembedding immunogold 방법은 특정 분자의 세포 내 국소화에 대한 고해상도 분석을 제공하는 가장 효과적인 방법 중 하나입니다. 여기에서는 망막 리본 시냅스에서 글루타메이트 수용체를 정량적으로 분석하는 프로토콜에 대해 설명합니다.

망막 리본 시냅스에서 막 수용체의 고해상도 양이 Immunogold 분석

쥐 망막 microvascular pericytes, 즉, cryo 섹션, 전체 마운트 및 혈관 네트워크의 침투성 절연의 immunohistochemical 시각화를 위한 3 개의 다른 조직 준비 기술을 설명합니다.

망막 Cryo-섹션, Microvascular Pericytes의 Immunohistochemical 시각화에 대 한 전체-마운트 및 소형 고립 된 맥 관 구조

이 보고는 면역성 화학을 위한 동결된 마우스 망막 단면도를 준비하기 위한 포괄적인 방법을 기술합니다 (IHC).  설명된 방법은 안구 후방 컵의 해부, 파라포름알데히드 고정, 최적 절삭 온도(OCT) 매체 및 조직 배향에 포함, 단면화 및 면역 염색을 포함한다.

면역 조직 화학을 위한 마우스 망막 극저온 단면도 단면도의 준비

여기서 우리는 표준 면역 조직 화학 염색 및 망막 뉴런및 그 하위 세포 구조의 고해상도 화상 진찰의 질을 향상시키기 위하여 전산 망막에 대한 뇌 조직의 CLARITY 방법을 적응하는 프로토콜을 제시합니다.

선명도 조직 클리어링 방법으로 전산 망막의 면역 염색

이 프로토콜은 단백질 분석을 위해 뮤린 막대 광수용체의 세포 하부 구획을 분리하는 두 가지 기술을 제시합니다. 첫 번째 방법은 살아있는 망막과 셀룰로오스 여과지를 사용하여 막대 외부 세그먼트를 분리하는 반면, 두 번째 방법은 동결 건조 된 망막과 접착 테이프를 사용하여 막대 내부 및 외부 세그먼트 층을 제거합니다.

단백질 분석을 위한 마우스 망막에서 광수용체 세포 구획의 단리를 위한 두 가지 박리 방법

여기에 제시된 것은 복잡한 조직에서 기능적으로 관련된 카스파제를 식별, 검증 및 표적으로 삼기 위한 상세한 면역조직화학 프로토콜입니다.

망막 조직에서 면역염색 카스파제-9의 정량화

이 프로토콜은 전체 마운트 마우스 망막을 분리하고 모든 망막 신경절 세포(RGC)를 표지하기 위해 면역염색을 수행하는 절차를 설명합니다. 그 다음에는 AI 기반 소프트웨어를 사용하여 망막 신경절 세포를 이미징하고 자동으로 계수하여 전체 마우스 망막에서 망막 신경절 세포를 정량화하는 간단하고 빠르며 정확한 방법을 제공합니다.

Whole-Mount Immunostaining and Automatic Counting of Mouse Retinal Ganglion Cells(전체 마운트 면역염색 및 마우스 망막 신경절 세포의 자동 계수)

망막 혈관 구조의 주위 세포는 형광 토마토 렉틴의 역궤도 주사 후 혈소판 유래 성장 인자 수용체 β로 면역 형광 염색으로 검사했습니다. 표지된 망막은 조직 제거 방법으로 추가로 처리되었으며 컨포칼 현미경으로 망막 혈관 구조를 둘러싼 주위 세포의 3차원 보기를 시각화하기 위해 전체적으로 장착되었습니다.

Immunostaining을 통한 마우스의 망막 혈관 주위 세포의 3D 시각화 

망막은 층류 구조 전반에 걸쳐 복잡한 공간 조직을 나타냅니다. 현대의 공간 전사체학 및 염기서열분석 기술에는 20μm 두께&lt; 조직 절편이 필요하기 때문에 망막 연구 적용이 제한됩니다. 이 신선 냉동 냉동 절편 방법은 평면 공간 관계를 유지하면서 마우스 망막의 얇은 표면 부분을 생성하여 층판 전반에 걸쳐 포괄적인 분자 매핑을 가능하게 합니다.

En 얼굴 High-dimensional Spatial Molecular Analysis (고차원 공간 분자 분석을 위한 마우스 망막의 동결 절편)

학습하세요 마우스 망막 동결 절편 제작 및 면역 염색 프로토콜로 광수용체 형태를 보존하여 고품질 형광 이미징을 수행하는 방법입니다. 이 기법은 망막 질환의 분자 메커니즘 연구에 필수적입니다.

마우스 망막의 동결 절편 및 면역 염색

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