Lung Arterial Hypertension Associated with Pulmonary Fibrosis의 쥐 모델 수립 및 검증

본 연구는 폐섬유증과 관련된 경우의 분자 기전에 초점을 맞춰 3군 폐고혈압의 발병기전을 조사한다. 폐동맥 고혈압과 달리 폐고혈압과 관련된 간질성 폐 질환의 기전은 아직 잘 알려져 있지 않습니다. 이 분야의 최근 발전에는 혈관 리모델링을 역전시키는 효능이 포함됩니다. 암과 유사한 내피 표현형 및 대사 소견의 발견, 아미노산과 지질 조절 장애를 폐고혈압의 발병기전과 연결합니다. 벌크 및 단일 세포 I-A 시퀀싱 대사 및 성가신 사례 저항성 테스트와 같은 기능 분석은 폐고혈압, 이질성을 매핑하고 치료 표적을 식별하기 위한 중추적인 기술입니다.

[강사] 시작하려면 성문에서 튜브 끝까지의 거리인 3cm 깊이까지 삽입된 PE-50 튜브를 사용하여 쥐의 기관을 삽관합니다. 26게이지 바늘이 달린 1밀리리터 주사기를 사용하여 블레오마이신 0.2밀리리터를 채취하여 캐뉼라를 통해 기도에 단일 용량으로 주입합니다. 블레오마이신이 고르게 분포되도록 쥐를 바로 누운 자세로 눕힙니다. 쥐를 부드럽게 잡고 천천히 회전시키면서 측면을 30도에서 45도 각도로 번갈아 가며 회전시킵니다. 각 회전을 10-15초 동안 유지하고 3-4회 반복합니다. PFT 소프트웨어를 열고 디바이스가 인식되는지 확인합니다. 이제 주 제어 기기 스위치를 켜고 각 신호 증폭기 스위치가 꺼져 있는지 확인하십시오. 공기 흐름을 설정하려면 흡입 공기 흐름 조절 너트를 켜고 흡입을 5로 설정합니다. 그런 다음 호기 기류 조절 너트를 켜고 느린 호기를 마이너스 4로 설정합니다. 압력 값을 60으로 설정합니다. FRC 유량, 유량, 고유량 및 폐압 순서로 기기를 5% 미만의 오차로 교정합니다. 쥐를 마취한 후 목 중앙을 따라 피부를 자릅니다. 근육을 층별로 분리하여 경추 기관의 윗부분을 노출시킵니다. 기관 연골 링 사이에 수평 절개를 합니다. 금속 캐뉼라를 기관 절개 부위에 빠르게 삽입하여 올바른 위치를 확인하고 4개의 제로 실크 실 봉합사로 고정합니다. 쥐를 PFT 동물실에 넣고 기관 캐뉼라를 기기 외부의 기류 채널 인터페이스에 연결합니다. 시작 버튼을 클릭하고 강제 폐활량 또는 FVC 및 동적 폐 순응도를 검사합니다. 우심실 수축기 혈압 또는 RVSP를 감지하기 위해 마취된 쥐의 복부를 실험 벤치에 위쪽으로 고정합니다. 수술용 가위를 사용하여 목 오른쪽에 약 4cm 길이의 절개를 합니다. 미세 겸자로 외부 경정맥을 부드럽게 분리하여 약 1cm의 길이를 분리합니다. 분리된 정맥의 원위 및 근위 끝에 두 개의 수술 라인을 삽입합니다. 4개의 제로 실크 실을 사용하여 외부 경정맥의 원위 끝을 결찰합니다. 근위 수술 라인을 부드럽게 들어 올려 원위 정맥벽에 놓습니다. 작은 가위로 약 0.3mm의 작은 절개를 합니다. PE-50 튜브를 외경정맥에 삽입한 후 PE-50 튜브와 정맥을 4개의 제로 실크 실을 사용하여 함께 결찰하여 혈액 누출을 방지합니다. 레코더에서 정맥압 파형을 관찰하십시오. 카테터를 우심방으로 천천히 밀어 넣고 우심실로 전진시켜 우심실 압력 파형을 표시합니다. 압력이 안정되면 우심실압을 1분 동안 기록하고 분석을 위해 데이터를 저장합니다. 개흉술 후 핀셋을 사용하여 쥐의 온전한 심장을 제거합니다. 가위로 심장 근처의 신탁과 결합 조직을 잘라냅니다. 폐동맥을 따라 우심실의 자유벽을 절단합니다. 이 조직은 우심실이고 나머지 조직은 좌심실과 뇌실내 중격입니다. 분리 후 여과지를 사용하여 우심실과 좌심실 표면과 뇌실내 중격을 배액합니다. 중량 비율을 계산하기 전에 분석 저울로 우심실과 좌심실과 심실 중격의 무게를 별도로 측정합니다. 이 그림은 블레오마이신 유도 PF PH 쥐 모델에서 관찰된 혈역학적 변화, 폐혈관 리모델링 및 폐 기능 장애를 보여줍니다. 우심실 수축기 혈압과 우심실 대 좌심실 플러스 중격 비율은 대조군에 비해 모델군에서 유의하게 증가하였다. 조직학적 염색은 모델 그룹에서 폐동맥 주변에 더 많은 파란색 염색 영역을 드러냈으며, 이는 더 큰 콜라겐 축적을 나타냅니다. 강제 폐활량과 동적 폐 순응도는 대조군에 비해 모델군에서 유의하게 감소했습니다. 박출 시간에 대한 폐동맥 가속 시간, 삼첨판 고리면 수축기 편위, 우심실 분율 면적 변화 및 심박출량의 비율은 모델군에서 유의하게 감소했습니다. 하이드록시프롤린 농도는 모델군에서 유의하게 높았으며, 이는 폐 조직의 콜라겐 함량이 증가했음을 나타냅니다. 간과 신장 무게는 대조군과 모델군 사이에 유의한 차이가 없었습니다.