Name: Live FRET 현미경 검사 및 면역형광을 통해 초기 제브라피시 누난 증후군 모델에서 ERK 활동 조절을 평가하기 위한 효율적인 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T13:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 58 s
Description: 배우세요 제브라피시에서 라이브 FRET 현미경 검사를 활용한 ERK 활동 조절 평가 방법입니다. RAS-MAPK 신호 경로의 병원성 변화를 실시간으로 감지하여 변이 해석과 약물 효능 테스트를 지원합니다.

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<ol><li>Iroegbu, J. D., Ijomone, O. K., Femi-Akinlosotu, O. M., Ijomone, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERK%2FMAPK+signalling+in+the+developing+brain%3A+Perturbations+and+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Biobehav+Rev%22%5BJournal%5D)">ERK/MAPK signalling in the developing brain: Perturbations and consequences.</a> Neurosci Biobehav Rev. 131, 792-805 (2021).</li>
<li>Tartaglia, M., Aoki, Y., Gelb, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+genetics+of+RASopathies%3A+An+update+on+novel+disease+genes+and+new+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med+Genet+C+Semin+Med+Genet%22%5BJournal%5D)">The molecular genetics of RASopathies: An update on novel disease genes and new disorders.</a> Am J Med Genet C Semin Med Genet. 190 (4), 425-439 (2022).</li>
<li>Tate, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((COSMIC%3A+the+catalogue+of+somatic+mutations+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">COSMIC: the catalogue of somatic mutations in cancer.</a> Nucleic Acids Res. 47 (D1), D941-D947 (2019).</li>
<li>Tartaglia, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+PTPN11%2C+encoding+the+protein+tyrosine+phosphatase+SHP-2%2C+cause+Noonan+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations in PTPN11, encoding the protein tyrosine phosphatase SHP-2, cause Noonan syndrome.</a> Nat Genet. 29 (4), 465-468 (2001).</li>
<li>Jopling, C., van Geemen, D., den Hertog, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shp2+knockdown+and+Noonan%2FLEOPARD+mutant+Shp2-induced+gastrulation+defects%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Shp2 knockdown and Noonan/LEOPARD mutant Shp2-induced gastrulation defects.</a> PLoS Genet. 3 (12), e225(2007).</li>
<li>Wong, K. -L., Akiyama, R., Bessho, Y., Matsui, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERK+activity+dynamics+during+zebrafish+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">ERK activity dynamics during zebrafish embryonic development.</a> Int J Mol Sci. 20 (1), 109(2019).</li>
<li>Fasano, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+FRET-based+Teen+sensor+to+monitor+ERK+activation+changes+preceding+morphological+defects+in+a+RASopathy+zebrafish+model+and+phenotypic+rescue+by+MEK+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Assessment of the FRET-based Teen sensor to monitor ERK activation changes preceding morphological defects in a RASopathy zebrafish model and phenotypic rescue by MEK inhibitor.</a> Mol Med. 30 (1), 47(2024).</li>
<li>Zimmermann, T., Rietdorf, J., Girod, A., Georget, V., Pepperkok, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral+imaging+and+linear+un-mixing+enables+improved+FRET+efficiency+with+a+novel+GFP2-YFP+FRET+pair%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Spectral imaging and linear un-mixing enables improved FRET efficiency with a novel GFP2-YFP FRET pair.</a> FEBS Lett. 531 (2), 245-249 (2002).</li>
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<li>Abdelrahman, D., Hasan, W., Da'as, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinjection+quality+control+in+zebrafish+model+for+genetic+manipulations%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">Microinjection quality control in zebrafish model for genetic manipulations.</a> MethodsX. 8, 101418(2021).</li>
<li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinjection+of+mRNA+and+morpholino+antisense+oligonucleotides+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Microinjection of mRNA and morpholino antisense oligonucleotides in zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. (27), e1113(2009).</li>
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<li>Leavesley, S. J., Rich, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+lmitations+of+FRET+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Overcoming lmitations of FRET measurements.</a> Cytometry A. 89 (4), 325-327 (2016).</li>
<li>Mascha, E., Vetter, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance%2C+errors%2C+power%2C+and+sample+size%3A+Theblocking+and+tackling+of+statistics%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Significance, errors, power, and sample size: Theblocking and tackling of statistics.</a> Anesth Analg. 126 (2), 691-698 (2018).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td><스트롱>플라스틱웨어</스트롱></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.7L 브리더딩 탱크 - 비치 스타일 디자인</td><td>테크니플라스트</td><td>1.7L 경사형</td><td>번식 탱크</td></tr><tr><td>모세혈관 GC100F-10</td><td>하버드 장비</td><td>30-0019</td><td>1세포 단계 배아 미세주사</td></tr><tr><td>세포 및 조직 배양 플레이트 - 12 웰</td><td>바이오필</td><td>TCP011012</td><td>배아 채취 및 치료</td></tr><tr><td>세포 및 조직 배양 플레이트 - 6 웰</td><td>바이오필</td><td>TCP011006</td><td>배아 채취 및 치료</td></tr><tr><td>세포 배양 접시</td><td>SPL 생명과학</td><td>20100</td><td>배아 채취 및 nbsp;</td></tr><tr><td>넌크 유리 접시 12mm</td><td>써모피셔</td><td>150680</td><td>배아 FRET 스펙트럼 영상</td></tr><tr><td>피펫 파스퇴르</td><td>코닝</td><td>357524</td><td>배아 이식</td></tr><tr><td>단백질 로바인 튜브 2ml</td><td>에펜도르프</td><td>30108450</td><td>IHC 분석법</td></tr><tr><td><스트롱>시약 및 기타</스트롱></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>캐비어 500-800 및 마이크로; m</td><td>Rettenmaier Italia</td><td>BE2269 (500-800)</td><td>건어먹이</td></tr><tr><td>그레이트 솔트레이크 블루 아르테미아 낭종</td><td>샌더스</td><td>00004727</td><td>생선 먹이</td></tr><tr><td>즉석 해양 소금</td><td>테크니플라스트</td><td>XPSIO25R</td><td>살아있는 음식 준비를 위한 탈수 해소금</td></tr><tr><td>Tg(EF1a:ERK Biosensor-nes) (10대)</td><td>주문 연락처*: 국가 생명자원 프로젝트 제브라피시, 동물자원 개발 지원 부서, RRD, 일본 리켄 뇌과학센터. https://shigen.nig.ac.jp/zebra/index_en.html *MTA 서명 후.&nbsp; </td><td>-</td><td>ERK 리포터 제브라피시 라인 공급업체. 어류 배아는 일본 제브라피시 국가생물자원프로젝트(RIKEN, 일본)의 MTA 서명 후 획득할 수 있습니다. 제브라피시 계통은 나라과학기술연구소(마츠이 다카아키)와 국립유전학연구소(NIG/ROIS)(가와카미 코이치, Tol2 시스템 특허)에 의해 퇴적되었다(Wong 등, 2018, Urasaki 등, 2006, Okamoto와 Ishioka, 2010).</td></tr><tr><td>6배 로딩 다이</td><td>세포 신호 전달</td><td>B7024S</td><td>젤 전기전동</td></tr><tr><td>100 bp DNA 사다리</td><td>NEB</td><td>N3231S</td><td>젤 전기전동</td></tr><tr><td>아가로스</td><td>시그마-올드리치</td><td>1,01,236</td><td>젤 전기전동</td></tr><tr><td>아가로스, 낮은 겔링 온도입니다</td><td>시그마-올드리치</td><td>A9414-10G</td><td>FRET 스펙트럼 영상 및 IHC 분석용 배아 마운팅</td></tr><tr><td>소 혈청 알부민 (BSA)</td><td>시그마-올드리치</td><td>A8022</td><td>IHC 분석법</td></tr><tr><td>염화칼슘</td><td>시그마-올드리치</td><td>223506</td><td>E3 매질 성분</td></tr><tr><td>질산칼슘</td><td>시그마-올드리치</td><td>237124</td><td>다니오 스톡 솔루션 구성 요소</td></tr><tr><td>디메틸 설폭사이드 (DMSO)</td><td>시그마-올드리치</td><td>D8418-100ML</td><td>IHC 분석법</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>시그마-올드리치</td><td>E9884</td><td>겔 준비를 위한 TBE 완충 성분</td></tr><tr><td>에탄올 99%+</td><td>피셔 사이언티브</td><td>10048291</td><td>시험관 내 RNA 정제</td></tr><tr><td>포르말데이드 16%</td><td>써모피셔</td><td>28908</td><td>배아 고정</td></tr><tr><td>포르마마이드&nbsp;</td><td>시그마-올드리치</td><td>F9037</td><td>젤 전기전동</td></tr><tr><td>젤 로딩 버퍼 II (디네이처링 페이지)</td><td>써모피셔</td><td>AM8546G</td><td>시험관 내 RNA 전사</td></tr><tr><td>빙하 아세트산</td><td>시그마-올드리치</td><td>695092</td><td>겔 준비를 위한 TBE 완충 성분</td></tr><tr><td>글리세롤 &nbsp;</td><td>시그마-올드리치</td><td>G6279-1L</td><td>IHC 분석법</td></tr><tr><td>염소 안티마우스 알렉사 플루어 488</td><td>써모피셔</td><td>A11001</td><td>IHC 분석법</td></tr><tr><td>염소 안티-래빗 알렉사 플루어 633</td><td>써모피셔</td><td>A21070</td><td>IHC 분석법</td></tr><tr><td>젠장</td><td>시그마-올드리치</td><td>H3375</td><td>다니오 스톡 솔루션 구성 요소</td></tr><tr><td>KpnI - HF (효소 + rCutSmart 버퍼)</td><td>NEB</td><td>R3142</td><td>플라스미드 선형성 및 nbsp;</td></tr><tr><td>황산마그네슘</td><td>시그마-올드리치</td><td>230391</td><td>E3 매체 성분/다니오 정액 성분</td></tr><tr><td>밀레니엄 RNA 마커</td><td>써모피셔</td><td>AM7150</td><td>젤 전기전동</td></tr><tr><td>모나크 유전체 DNA 정제 키트</td><td>NEB</td><td>T3010L</td><td>플라스미드 선형성 및 nbsp;</td></tr><tr><td>마우스 단클론 p44/42 MAPK</td><td>세포 신호 전달</td><td>4696S</td><td>IHC 분석법</td></tr><tr><td>mMACHINE SP6 전사 키트 &nbsp;</td><td>써모피셔</td><td>AM1340</td><td>시험관 내 RNA 전사</td></tr><tr><td>일반 염소 혈청(NGS)</td><td>시그마-올드리치</td><td>G9023</td><td>IHC 분석법</td></tr><tr><td>뉴클레아제 없는 물 암비온</td><td>써모피셔</td><td>AM9937</td><td>시험관 내 RNA 전사</td></tr><tr><td>PD0325901</td><td>시그마-올드리치</td><td>PZ0162</td><td>MEK 억제제</td></tr><tr><td>페놀 레드 용액</td><td>시그마-올드리치</td><td>P0290</td><td>미세인젝션 혼합 성분 & nbsp;</td></tr><tr><td>폴리 A 테일링 키트</td><td>써모피셔</td><td>AM1350</td><td>시험관 내 RNA 전사</td></tr><tr><td>염화칼륨 바이오엑스트라&nbsp;</td><td>시그마-올드리치</td><td>P9333</td><td>E3 매체 성분/다니오 스톡 용액 성분/PBS 스톡 용액 성분</td></tr><tr><td>인산칼륨 이수소</td><td>시그마-올드리치</td><td>P0662</td><td>PBS 스톡 솔루션 구성 요소</td></tr><tr><td>프로테인나제 K</td><td>시그마-올드리치</td><td>P2308</td><td>IHC 분석법</td></tr><tr><td>토끼 다클론 인산-p44/42 MAPK&nbsp;</td><td>세포 신호 전달</td><td>4695S</td><td>IHC 분석법</td></tr><tr><td>SYBR 안전 DNA 젤 염색</td><td>써모피셔</td><td>S33102</td><td>젤 전기전동</td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>시그마-올드리치</td><td>31434-M</td><td>E3 매체 성분/다니오 스톡 용액 성분/PBS 스톡 용액 성분</td></tr><tr><td>인산나트륨 이염기성</td><td>시그마-올드리치</td><td>71643</td><td>PBS 스톡 솔루션 구성 요소</td></tr><tr><td>트리즈마 기지</td><td>시그마-올드리치</td><td>T1503</td><td>겔 준비를 위한 TBE 완충 성분</td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>시그마-올드리치</td><td>T8787</td><td>PBSTr 버퍼 컴포넌트</td></tr><tr><td><스트롱>장비</스트롱></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>얼라이언스 미니 HD9&nbsp;</td><td>유비텍</td><td>-</td><td>영상 시스템</td></tr><tr><td>원심분리기 5430 R</td><td>에펜도르프</td><td>5428000205</td><td>마이크로 원심분리기</td></tr><tr><td>에펜도르프 서모믹서 C</td><td>에펜도르프</td><td>-</td><td>배아 장착 &nbsp;</td></tr><tr><td>펨토젯 4x</td><td>에펜도르프</td><td>-</td><td>마이크로 인젝션 시스템</td></tr><tr><td>인피니트 M 플렉스&nbsp;</td><td>테칸</td><td>-</td><td>멀티모드 플레이트 리더</td></tr><tr><td>라이카 M205FA</td><td>라이카 마이크로시스템즈</td><td>-</td><td>형광 입체 현미경</td></tr><tr><td>인큐베이터 장착 라이카 TCS-SP8X (OkoLab)</td><td>라이카 마이크로시스템즈</td><td>-</td><td>공초점 현미경</td></tr><tr><td>미니 서브 셀 GT 정식 전기영동 시스템&nbsp;</td><td>바이오-래드</td><td>1704406</td><td>젤 전기전동</td></tr><tr><td>PC-100 수직 풀러</td><td>나리시게</td><td>-</td><td>바늘 풀러</td></tr><tr><td>파워팩 범용 전원 공급 장치</td><td>바이오-래드</td><td>1645070</td><td>젤 전기전동</td></tr><tr><td>스텔라리스 5&nbsp;</td><td>라이카 마이크로시스템즈</td><td>-</td><td>공초점 현미경</td></tr><tr><td>보텍스 미니스타 실버라인</td><td>VWR</td><td>-</td><td>플라스미드 준비</td></tr><tr><td>Softwares</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>바이오렌더</td><td>바이오렌더</td><td>CC-BY 4.0 라이선스</td><td>만화 캐릭터 구성</td></tr><tr><td>엑셀</td><td>마이크로소프트 오피스 프로페셔널 플러스 2019</td><td>-</td><td>데이터 분석</td></tr><tr><td>피지 소프트웨어</td><td>이미지J</td><td>15.3t</td><td>영상 렌더링 및 정량적 분석(FRET 신호 측정, IHC 분석에서의 ERK 형광 강도, 배아 축 길이)</td></tr><tr><td>그래프패드 프리즈앤 nbsp;</td><td>그래프패드 소프트웨어 LLC</td><td>9절</td><td>통계 데이터 분석</td></tr><tr><td>iControl 분광광도계 소프트웨어</td><td>테칸</td><td>2.0 버전</td><td>RNA 정량</td></tr><tr><td>일러스트레이터</td><td>어도비</td><td>26.0.3 (64비트)</td><td>피규어 조립</td></tr><tr><td>LASX 소프트웨어</td><td>라이카 마이크로시스템즈</td><td>버전 4.5 (스텔라리스 5), 버전 3.0 (M205FA), 버전 3.5 (TCS-SP8X)</td><td>스펙트럼 FRET 실험을 위한 영상 획득과 축 길이 측정을 위한 배아 영상 획득</td></tr><tr><td>Q9 미니 18.02-SN 소프트웨어</td><td>유비텍</td><td>-</td><td>젤 이미지 획득</td></tr></tbody></table>

live fret 현미경 검사 및 면역형광을 통해 초기 제브라피시 누난 증후군 모델에서 erk 활동 조절을 평가하기 위한 효율적인 프로토콜

An Efficient Protocol to Assess ERK Activity Modulation in Early Zebrafish Noonan Syndrome Models via Live FRET Microscopy and Immunofluorescence

Live FRET 현미경 검사 및 면역형광을 통해 초기 제브라피시 누난 증후군 모델에서 ERK 활동 조절을 평가하기 위한 효율적인 프로토콜

RASopathies are genetic syndromes caused by ERK hyperactivation and resulting in multisystemic diseases that can also lead to cancer predisposition. ...

an-efficient-protocol-to-assess-erk-activity-modulation-early

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

이 비디오는 제브라피시 배아에서 운동 뉴런의 전기생리학을 연구하기 위한 비침습적 분석을 보여줍니다. 척수 운동 뉴런의 자발적인 탈분극의 결과로 배아에서 꼬리 코일링을 측정하면 코일링 빈도를 줄이기 위해 나트륨 채널 차단제가 적용됩니다. 다음으로, 배아를 아가로스에 고정시키고 형광 현미경 아래에 놓습니다. 유전자 조작 운동 뉴런은 공여체와 수용체 형광단이 있는 전압 감지 바이오센서를 발현합니다. 수용체 형광단 방출의 감소는 나트륨 채널 차단제로 인한 운동 뉴런의 자발적 탈분극(droppolarization)이 감소했음을 나타냅니다.

제브라피시 배아에서 운동 뉴런의 전기생리학을 연구하기 위한 비침습적 접근 방식

제브라피시는 이제 근이영양증, 선천성 근병증 및 관련 신경근 질환을 모델링하기 위한 확립되고 강력한 도구입니다. 복굴절(Birefringence)과 촉각(touch-hoked) 탈출 행동은 초기 발달 과정에서 제브라피시 배아의 근육 무질서 및 기관차 손상 정도를 결정하는 데 사용되는 두 가지 일반적인 비침습적 분석법입니다.

복굴절(Birefringence) 및 촉각-유발 탈출 반응 분석(Touch-evoke Escape Response Assay)에 의한 유충 제브라피시의 골격근 결손 분석

제브라 피쉬 배아 조직 특정 형광의 반 자동화 이미징을위한 프로토콜은 여기에 설명한다.

Zebrafish의 태아의 조직 특이 형광의 반 자동화 이미징

우리는 미세 조작 및 전기 망막검사 기술을 사용하여 제브라피시 유충의 전기망막검사(ERG) 분석 방법을 제시합니다. 이것은 생체 내에서 제브라피시 유충의 시각 기능을 분석하는 간단하고 간단한 방법입니다.

Zebrafish의 애벌레에서 비주얼 응답의 전위도 분석

여기에 설명된 프로토콜은 관심 세포 유형에서 선택적으로 발현되는 형광 공명 에너지 전달(FRET) 기반 유전자 인코딩 전압 지시기(GEVI)와 함께 생체 내 시스템에서 제브라피시 배아를 사용하여 가장 비침습적인 생리학적 조건에서 흥분성 세포의 전기적 특성을 연구할 수 있도록 합니다.

살아있는 Zebrafish 배아에서의 바이오 센스 모터 뉴런 멤브레인 잠재력

여기서, 우리는 DEPDC5 유전자의 일시적인 억제로 인한 간질의 제브라피시 모델의 개발 및 특성화를 위한 프로토콜을 제시한다.

간질의 제브라피시 모델의 행동 및 생리학적 분석

이 원고는 성인 제 브라 피시에서 행동 하는 스트레스를 측정 하는 간단한 방법을 설명 합니다. 이 접근법은 zebrafish가 스트레스가 많은 상태일 때 탱크의 아래쪽 절반을 선호 하는 타고 난 경향을 활용 합니다. 우리는 또한 약리학으로 분석을 결합 하는 방법을 설명 합니다.

제 브라 피시에서 선천적인 스트레스를 연구 하는 행동 접근법

광학 선명도는 제브라 피쉬의 세포 생물학적 및 생리 학적 작업에 대한 주요 이점입니다. 골격근 및 이웃 조직의 성장이 전신 성장과 어떻게 통합되는지에 대한 새로운 통찰력을 허용하는 개별 동물의 세포 성장 측정을위한 강력한 방법이 설명됩니다.

변경된 전기적 활동을 받은 개별 살아있는 제브라피쉬의 골격근 성장에 대한 실시간 및 반복 측정

반응성 친전자필 및 산화제(Z-REX)를 표적으로 하는 제브라피쉬는 반응성 소분자 신호 조사를 위한 화학 생물학 기반 방법입니다. 이 기술은 다양한 발달 단계의 활어에 적용 할 수 있습니다. 여기에서는 신호 전달 경로 분석을 위해 제브라피쉬의 표준 분석과 Z-REX를 결합합니다.

유충 제브라피쉬의 표적 신호 반응 모니터링 - Z-REX는 친전자성 약물 및 대사 산물의 정확한 메커니즘을 밝힙니다.

신호 전달 경로의 광유전학적 조작은 발달, 재생, 항상성 및 질병에서 신호전달이 어떻게 해독되는지 조사하는 강력한 전략이 될 수 있습니다. 이 프로토콜은 초기 제브라피시 배아에서 광-산소-전압 감지 도메인 기반 결절 및 뼈 형태 형성 단백질(BMP) 신호 활성제를 사용하기 위한 실용적인 지침을 제공합니다.

제브라피시 배아의 광유전학적 신호전달 활성화

여기에서는 컨포칼 현미경을 사용하여 GCaMP 칼슘 지표를 발현하는 형질전환 제브라피쉬의 뇌 영역에서 신경 활동을 조사하기 위한 자세한 프로토콜을 제시합니다.

생체 내 부분적으로 구속된 유충 제브라피시에서 감각 자극에 의해 유도된 신경 활동의 공초점 형광 이미징

배우세요 제브라피시에서 라이브 FRET 현미경 검사를 활용한 ERK 활동 조절 평가 방법입니다. RAS-MAPK 신호 경로의 병원성 변화를 실시간으로 감지하여 변이 해석과 약물 효능 테스트를 지원합니다.

Live FRET 현미경 검사 및 면역형광을 통해 초기 제브라피시 누난 증후군 모델에서 ERK 활동 조절을 평가하기 위한 효율적인 프로토콜

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