표면 플라즈몬 공명 기술을 사용한 PD-1/PD-L1 억제제 식별

저는 PD-1, PD-L1과 같은 새로운 암 면역 체크포인트 억제제를 찾는 신약 개발 분야에서 일하고 있습니다. 제 핵심 질문은 이를 가속화하기 위해 처리량이 많은 스크린 플랫폼을 어떻게 설계할 수 있느냐는 것입니다. 최근 몇 년 동안 PD-1, PD-L1을 표적으로 하는 생물학적 약물이 상당한 발전을 이루었습니다. 저분자 의약품은 아직 개발 초기 단계에 있지만, PD-1, PD-L1을 표적으로 하는 저분자 의약품 개발을 목표로 하고 있습니다.

균질 시간 분해 형광, HTIF 및 af-ah-ly-zer는 PD-1, PD-L1 억제제 스크리닝에 적용되는 두 가지 기술입니다. 소분자의 용해도와 완충액 불일치는 현재 실험의 주요 과제입니다.

우리는 SPR이 결합 친화도 측정뿐만 아니라 PD-1, PD-L1 억제제에 대한 스크리닝 플랫폼으로도 개발될 수 있음을 발견했습니다.

[강사] 시작하려면 표면 플라스민 공명 또는 SPR 기기를 켭니다. 열기 또는 새 마법사 템플릿을 클릭하고 고정을 선택하여 고정 방법을 설정합니다. 칩 유형을 CM-5로 설정합니다. Amin 방법과 사이클당 플로우 셀을 1로 설정합니다. 그런 다음 고정 플로우 셀 1과 플로우 셀 2를 밀리리터당 SA-40마이크로그램으로 확인합니다. 고정화 방법으로 SA 비오틴 포획을 선택합니다. 블랭크 고정을 위해 플로우 셀 1을 설정합니다. 플로우 셀 2의 경우 밀리리터당 10마이크로그램, PD-1을 리간드로 사용하고 4,000 반응 단위를 목표로 고정화 수준을 목표로 합니다. 그런 다음 실행하기 전에 프라임을 확인하십시오. 완충액 입구가 포함된 두 개의 베이를 HBSEP 양성 실행 완충액에 넣습니다. 유지 보수 센서 칩을 꺼내고 CM-5 칩을 삽입합니다. 고정 방법을 다시 엽니다. 그런 다음 시약 선반 2를 삽입하고 시약 위치를 확인합니다. 예상 기간 동안 메서드를 실행합니다. 두 개의 베이를 HBSEP 양성 실행 완충 용액에 넣습니다. 유지 보수 센서 칩을 꺼내고 SA 칩을 삽입합니다. 고정 방법을 다시 연 후 시약 선반 2개를 삽입하고 시약 위치를 확인합니다. 예상 기간 동안 메서드를 실행합니다. PD-1, PD-L1 상호 작용의 검증을 위해 일반 설정에서 데이터 수집 속도를 10헤르츠로 설정합니다. 감지는 다중입니다. 샘플 구획 온도는 섭씨 25도까지, 농도 단위는 마이크로몰입니다. 분석 단계에서 컨디셔닝 반복을 10회로 설정합니다. 10회 반복으로 동역학을 시작합니다. 한 번의 반복과 섭씨 25도의 온도로 동역학에 대한 샘플링. 그런 다음 접촉 시간을 60초, 해리 시간을 60초, 유속을 분당 30마이크로리터로 설정합니다. 메서드 변수에서 속성을 변수로 설정하고 샘플 솔루션을 선택합니다. 평가 변수에서 평가 목적을 동역학 친화도로 선택하고 미리 정의된 변수를 농도 및 MW로 선택합니다. 실행 및 흐름 경로 2 대 1 및 4 대 3을 설정합니다. 분자량이 51,300달톤인 0마이크로몰, 0.037마이크로몰, 0.111마이크로몰 및 0.333마이크로몰의 PD-L1 농도를 입력합니다. HBSEP 양성 러닝 완충액 200밀리리터를 준비하고 러닝 완충액에 PD-L1 희석액을 희석합니다. 모든 시약을 레이아웃의 각 위치에 놓고 예상 기간 동안 실행합니다. 소분자 억제제를 사용하는 봉쇄 분석의 경우 검증 테스트와 동일한 설정 및 유속을 사용합니다. 실행을 설정하고 흐름 경로를 선택한 후 샘플 PD-L1 용액과 희석된 BMS 1166 용액을 입력합니다. 주어진 대로 시약 선반 2 레이아웃에 웰 위치를 할당합니다. 그런 다음 5mg의 BMS 1166을 77.99마이크로리터의 DMSO에 녹여 100밀리몰 원액을 준비합니다. 주어진 대로 모든 시약을 배열하십시오. 2000 반응 단위의 목표 반응 단위는 플로우 셀 1 및 플로우 셀 2의 스트렙타비딘 단백질 고정에 대해 거의 달성되었습니다. 플로우 셀 1은 1902.3 반응 단위의 최종 반응을 보였고, 플로우 셀 2는 1900.7 반응 단위를 보였습니다. 플로우 셀 1의 빈 셀은 마이너스 161의 낮은 반응 단위를 가졌고, 플로우 셀 2는 최종 반응 3698.5로 4,000 반응 단위의 목표를 달성했습니다. 테스트된 글리신 pH 조건 중에서 글리신 pH 2.0은 안정적인 기준선 반응으로 재생에 가장 최적의 것으로 확인되었으며, 이는 PD-1 단백질 손실이 최소화되고 PD-L1이 성공적으로 제거되었음을 나타냅니다. 다양한 농도의 PD-L1과 PD-1의 결합 상호작용을 정량화하여 측정 가능한 반응을 산출했습니다. PD-1, PD-L1 결합 상호작용의 차단 효과는 0에서 3.125마이크로몰 사이의 BMS 1166 희석으로 관찰되었습니다. 결합 반응 단위는 BMS 1166의 농도가 증가함에 따라 비례하여 감소하였다.