Name: 만성 뇌 영상에 대한 Craniotomy 외과 절차 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-02-15T11:06:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: 배우세요 쥐에서 유리 덮개 두개골 창 이식을 통한 만성 뇌 영상 기법을. 이 방법은 신피질의 장기간 생체 내 관찰을 가능하게 하여 신경과학 연구에 필수적입니다.

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<ol><li> IACUC 승인 절차를 사용하여 isoflurane와 쥐 (유도 4 %, 수술을 1.5-2 %)을 마취. 꼬리 및 / 또는 발가락 핀치스이 동물이 완전히 진정되도록하기 위해 사용하는 것이 중요합니다. </li><li> 쥐 트리머를 사용하여, 최대 눈 목 뒤쪽에서 머리를 면도. </li><li> 수술 물을 다시 순환 담요 이상 stereotaxic 프레임에 마우스를 놓습니다. 단단히 귀에 바와 함께 머리를 확보. </li><li> 밖으로 건조에서 동물의 눈에을 방지하기 위해, 눈 연고를 적용합니다. </li><li> Dexamethasone (0.2 밀리그램 / 킬로그램)와 Carprofen가 (5 밀리그램 / 킬로그램) 각각의 뇌 및 / 또는 염증 반응의 붓기 방지하기 위해, subcutaneously, 관리할 수 있습니다. </li><li> 수술을 시작하기 전에 70 % 알코올 및 betadine 세 교대 swipes와 함께 피부를 닦는하여 운영 지역을 소독. </li><li> 모든 수술기구는 유리 비드 살균기를 사용하여 사전에 소독하고 있습니다. 에탄올로 소독되었습니다 가위를 사용하여 살다가 두 주동이의 방향으로 상처 거의 눈꺼풀에 도달, 두 경사 상처 뒤에있는 모든 머리의 기본을 따라 수평 절단, 시작, 두개골의 맨 위에 피부를 제거 그것은 정중선에서 수렴. </li><li> lidocaine + 에피네프린 솔루션의 한 방울이 과도한 출혈이나 통증을 피하기 위해 골막에이 시점에서 적용됩니다. 메스로 두개골의 가장자리에 골막을 철회. 또한, 가볍게 목 뒤쪽의 근육을 철회. </li><li> 부드럽게 마른 표면을 만들기 위해 메스로 두개골의 전체 노출 영역을 다쳤어요. 나중에 적용할 때 접착제가 잘 준수 수 있듯이 매우 중요합니다. </li><li> 이미징 사이트가 선택되면, 하나는 두개골 창을 만들 준비가되어 있습니다. 첫째, 부드럽게 공압 치과 드릴 직경 약 4 mm의 원형 &quot;을 그려.&quot; </li><li> 약간 드릴링 후, 두개골 표면에 다시 lidocaine + 에피네프린 솔루션을 적용할 수 있습니다. 뼈의 매우 얇은 층이 남아있는 책임이 중지합니다. 이 방법을 제공하는 방법 느낄 수 craniotomy의 중앙에 부드럽게 밀어 하나는 일반적으로이 단계에 도달 알고 있습니다. </li><li> 뼈 해면 구조 - - 뼈 trabeculae의 생리와 복용의 이점을 한 방울에 따라 매우 얇은 팁 포셉와 두개골에서 craniotomy 멀리 리프트. 그것은 두개골을 들어올려하고 두라의 출혈을 방지하므로 생리가 중요합니다. </li><li> 이전에 두개골이 제거되었을 때 가끔 발생하는 작은 출혈을 멈추게하는 두라 메이터에 호수에 배어있다 Gelfoam을 적용합니다. </li><li> 두라 메이터 표면을 건조되며 출혈이 없다는 것을 확인한 후, 부드럽게 두라 메이터 위에 멸균 5mm 유리 커버 슬립을 믿는다. (참고 : 다른 그룹도 두라 이상 낮은 용융 점 아가로 오스 (1.2 %)의 드롭을 배치하고 한천 위에 coverslip을 넣어.) </li><li> 두개골에 반대 반구에 cyanocrylate 기반 접착제 한 방울을 적용합니다. 조심하는 것이 유리 밑에 넣고되지 동안 바늘의 도움으로, 부드럽게 모든 창 주변의 접착제를 적용합니다. 접착제 이제 두개골의 전체 표면 위에 얇은 레이어에 적용할 수 있습니다. </li><li> 접착제가 건조되면, 그것을 보장하기 위해서, 또한 커버 슬립의 작은 림을 포함, 두개골 표면에 걸쳐 치과 아크릴을 혼합하고 그것을 적용해야합니다. </li><li> 커버 슬립을 확보 후, 치과 아크릴과 창문 주위에 작은 우물을합니다. 또한, 치과 아크릴에 티타늄 막대를 삽입할 수 있습니다. 이 막대는 나중에 영상을위한 현미경의 무대에 안전하게 마우스를 첨부하는 데 사용됩니다. 그것은 두개골 창은 병렬가되도록, 바가 수준 있는지 확인하는 것이 중요합니다. 막대 아래에 종이를 게재하면 아크릴은 견고하면서 막대가 수준 유지하도록 할 수 있습니다. </li><li> 치과 아크릴은 10 분 (강화) 치료 허용, 어떤 시점에 티타늄 막대 제자리에 고정합니다. 그것이 복구까지 따뜻한 새장에 동물을 배치합니다. </li><li> 마취에서 회복 후, 동물은 당일 몇 군데하실 수 있습니다. </li></ol>

<ol><li>Svoboda, K., Denk, W., Kleinfeld, D., Tank, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((+In+vivo+dendritic+calcium+dynamics+in+neocortical+pyramidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)"> In vivo dendritic calcium dynamics in neocortical pyramidal neurons.</a> Nature. 85, 161-165 (1997).</li>
<li>Lendvai, B., Stern, E. A., Chen, B., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience-dependent+plasticity+of+dendritic+spines+in+the+developing+rat+barrel+cortex+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Experience-dependent plasticity of dendritic spines in the developing rat barrel cortex in vivo.</a> Nature. 404, 876-881 (2000).</li>
<li>Trachtenberg, J. T., Chen, B., Knott, G. W., Feng, G., Sanes, J. R., Welker, E., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+in+vivo+imaging+of+experience-dependent+synaptic+plasticity+in+adult+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Long-term in vivo imaging of experience-dependent synaptic plasticity in adult cortex.</a> Nature. 420, 788-794 (2002).</li>
<li>Portera-Cailliau, C., Weimer, R. M., DePaola, V., Caroni, P., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+modes+of+axon+elaboration+in+the+developing+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Diverse modes of axon elaboration in the developing neocortex.</a> PLoS Biol. 3, (2005).</li>
<li>Holtmaat, A., Wilbrecht, L., Knott, G. W., Welker, E., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience-dependent+and+cell-type-specific+spine+growth+in+the+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Experience-dependent and cell-type-specific spine growth in the neocortex.</a> Nature. 441, 979-983 (2006).</li>
</ol>

우리가 비디오에서 두 광자 현미경의 사용과 결합하여 보조 수치, 두개골 윈도우 준비에 나타난 것처럼, 생체내 네크로 텍스의 구조와 기능에서 공부하는 매우 강력한 도구입니다. 기술 관련 해부학 및 미세 수술 절차 및이 준비가 필요 기술에 익숙해지로 엄격한 훈련이 필요합니다. 단지 깨끗한 수술은 만성 이미징 사용할 수 있습니다. 두라이 과도하거나 구멍을 조작하면, 준비는 이미지에 사용해서는 안됩니다.

티타늄 막대 사용자 정의 - 만든

만성 뇌 영상에 대한 craniotomy 외과 절차

A Craniotomy Surgery Procedure for Chronic Brain Imaging

이미징 기술이 연구의 뇌 기능에 점차 중요 해지고 있습니다. 그것이 사는 그대로 두뇌의 연구를 수 있기 때문에 그 중에서도 두 광자 레이저 스캐닝 현미경은 매우 유용한 방법으로 떠오르고있다. 적절한 준비와 함께,이 기술은 몇 분 거리 개월, 만성 같은 피질 영역의 관찰하실 수 있습니다. 이 비디오에서는, 우리는 두 광자 현미경을 사용하여 두뇌의 생체내 이미징에서 만성위한 준비를 보여줍니다. 이 기술은 처음에는 지금 Janelia 팜에서 하워드 휴즈 의학 연구소의 탐정이다 박사 카렐 스보로 개척되었다. 여기에 표시된 것과 같은 준비가 이미지 대뇌 피질의 혈류 역학에, 칼슘에 민감한 염료를 사용하여, 또는 내장 광학 이미징 연구의 연결 활동을 기록하는 neocortical 구조 (예, 돌기 및 axonal 역학)의 영상에 사용될 수 있습니다. 네크로 텍스의 깊은 영상은 최적의 두개골 창 수술 가능합니다. 수술하는 동안 두라 메이터을 손상하지에 극단주의를 사용하여 함께, 감염을 피하기 위해 가능한 한 가장 멸균 조건 하에서 운영, 성공적이고 지속적인 유리 덮인 두개골 Windows에서 발생합니다.

이 비디오 및 프로토콜은 설치류에 유리 커버 두개골 창을 이식하는 방법을 보여줍니다. 이러한 준비는 생체내 개월 시간 단위 동안 네크로 텍스의 2 광자 이미징에서 만성 사용할 수 있습니다. 그것은 광학 내장 신호 이미징을 포함한 이미징의 다른 유형에도 사용할 수 있습니다.

만성 뇌 영상에 대한 Craniotomy 외과 절차

영상 기술은 뇌 기능 연구에서 점점 더 중요한 비중을 차지하고 있습니다. 그중에서도 이광자 레이저 주사 현미경(two-photon laser scanning microscopy)은 ...

영상 기술은 뇌 기능 연구에서 점점 더 중요해지고 있습니다. 그중에서도 이광자 레이저 현미경술은 적절한 준비 과정을 통해 살아있는 뇌를 연구할 수 있게 해주어 매우 유용한 방법으로 부상했습니다. 이 기술을 이용하면 동일한 피질 영역을 수 분에서 수개월까지 만성적으로 관찰할 수 있습니다.이 영상에서는 이광자 현미경을 이용한 뇌의 만성 생체 내(in vivo) 이미징 준비 과정을 보여드립니다. 오늘 시연할 두개골 창(cranial window) 준비법은 Janelia Farm의 Howard Hughes Medical Institute 연구원인 Carl Voda 박사가 처음 개척하였습니다. 저는 University of California Los Angeles 신경과 Carlos Porter Cayo 연구실의 Ricardo Must입니다.오늘은 만성 in vivo 이미징을 위한 두개창(cranial window) 제작 절차를 보여드리겠습니다. 이 준비 과정은 이광자 레이저 현미경을 사용하여 뇌 깊은 곳을 이미징할 수 있게 해주므로 매우 유용합니다. 그럼 시작하겠습니다.수술을 시작하기 전, 마우스는 이소플루레인(isoflurane)으로 마취합니다. 유도 시에는 4%, 수술 중에는 1.5~2%를 사용하며, I-A-C-U-C 승인 절차를 따릅니다. 동물이 완전히 진정되었는지 확인하기 위해 꼬리 또는 발가락 집기(pinch test)를 수행하는 것이 중요합니다. 설치류용 트리머를 사용하여 목 뒤부터 눈까지의 털을 깎아냅니다.제모 후, 마우스를 37°C로 설정된 온수 순환 담요 위에 놓인 정위 고정기(stereotaxic frame)에 배치하고, 이어바(ear bars)를 사용하여 머리를 단단히 고정합니다. 그런 다음 동물의 눈이 건조해지는 것을 방지하기 위해 안연고를 도포합니다. 이어서 dexamethasone 0.2 mg/kg과 carprofen 5 mg/kg을 피하 투여합니다.뇌 부종 및 염증 반응을 각각 방지하기 위함입니다. 수술을 시작하기 전, 70% alcohol과 Betadine을 적신 면봉으로 피부를 세 번 교대로 닦아 수술 부위를 반드시 멸균하십시오. 모든 수술 도구는 에탄올을 분사한 가위와 함께 유리 구슬 멸균기를 사용하여 미리 멸균되었습니다.머리 기저부를 따라 수평으로 절개한 후, 눈꺼풀에 거의 닿을 때까지 주둥이 방향으로 두 차례 절개하여 두개골 상단의 피부를 제거합니다. 그다음 중앙선에서 만나는 두 개

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오 및 보충 자료에서 우리는 만성에 대한 프로토콜을...

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침략적인 외과 생검에 응하여 뇌종양 세포 행동의 경도 내 활력 화상 진찰

이 프로토콜은 신경 질리오 혈관 구조, 상호 작용 및 건강하고 병들인 조건 둘 다에 있는 기능의 세로 화상 진찰에 사용될 수 있는 만성 두개골 창 이식 기술을 기술합니다. 그것은 종종 선호하는 동안, 몇몇 중요한 한계를 가지고 있는 경두개 화상 진찰 접근에 대한 보완적인 대안으로 봉사합니다.

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우리는 두개골 기본 종양에 대한 내시경 적 박상 수술에 환자 작업 업에서 확산 MRI 학법을 통합하는 프로토콜을 제시한다. 수술 전 및 수술 내 단계에서 이러한 신경 이미징 연구를 채택하는 방법이 설명되어 있습니다.

내시경 성 상반신 두개골 기본 수술에서 확산 MRI 기관도법의 역할

이 문서는 주입 캐뉼라와 마우스의 해마의 CA1 영역에 이식으로 보충 된 맞춤형 이미징 창의 준비를 보여줍니다.

마우스를 면도하는 해마에서 신경 활동을 시각화하기위한 두개골 절제술 절차

여기에 제시된 것은 깨어 있고 머리가 억제 된 마우스에서 뇌 세포의 종방향 이미징을위한 만성 두개골 창을 이식하기위한 프로토콜입니다.

깨어있는 마우스 에서 반복되는 생체 내 이미징을위한 두개골 창 이식

헤드 플레이트 및 단일 광자 및 이광자 현미경과 호환되는 광학 설계와 통합될 경우, 마이크로프리즘 렌즈는 머리가 고정된 상태에서의 잘 제어된 실험이나 자유롭게 움직이는 동물의 자연스러운 행동 작업을 포함하여 다양한 조건에서 수직 컬럼의 신경 반응을 측정하는 데 상당한 이점을 제공합니다.

자유롭게 움직이고 머리가 고정된 동물에서 마이크로프리즘을 사용하여 식별된 신경 집단의 장기 이미징

이 프로토콜은 3개월 된 덴마크 재래종 돼지에게 고속 공압 드릴을 사용하여 두개골 절제술을 수행하는 것을 설명합니다. 접근은 전두골을 통해 이루어지며 복부 경막과 기저 대뇌 반구를 드러냅니다. 이 절차를 통해 돼지 뇌의 많은 부분에 접근할 수 있습니다.

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배우세요 쥐에서 유리 덮개 두개골 창 이식을 통한 만성 뇌 영상 기법을. 이 방법은 신피질의 장기간 생체 내 관찰을 가능하게 하여 신경과학 연구에 필수적입니다.

만성 뇌 영상에 대한 Craniotomy 외과 절차

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