Name: 체외(In Vitro ) 소 연골 외식에서 치명적 연골 세포 손상을 일으키는 충격 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-27T13:25:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: 배우세요 소 연골 외식을 이용한 충격 모델로 연골 세포 손상 반응을 연구하는 방법입니다. 이 기술은 조절된 기계적 하중을 적용하여 치료 가능한 세포의 초기 손상 반응을 분석하고 관절염 진행을 예방하는 분자 경로를 밝히는 데 활용됩니다.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>#11 멸균 메스 칼날</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10-001-823</td><td>뼈에서 연골 제거</td></tr> <tr><td>#22 멸균 메스 칼날</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10-001-833</td><td>소 조직에서 피부를 제거하고 인대를 절단하여 관절을 엽니다</td></tr><tr><td>10-1000 ul 피펫 팁</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>02-707-411</td><td>측정 및 전달&nbsp; PBS, 배양 배지 및 기타 솔루션&nbsp;</td></tr><tr><td>200 프루프 에탄올</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>03-007-647</td><td>수술 도구를 소독하고 조직 준비 및 처리 중에 멸균 환경을 유지하기 위해 멸균제로 70% 에탄올을 준비하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>50 mL 원심분리기 튜브(멸균)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339652</td><td>배지 및 샘플 보관에 사용</td></tr> 5<tr><td>갤런 카보이</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>04-355-233</td><td>호스로 스위블 어댑터에 연결된 멸균 PBS 용기.</td></tr><tr><td>6-웰 플레이트(멸균)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>140685</td><td>수집, 충격 연구 전 배양 및 이미징 중에 미리 예열된 배지를 사용하여 멸균 환경에서 골연골 코어를 임시로 보관하는 데 사용됩니다</td></tr>. 가<tr><td>속도계</td><td>Kistler</td><td>8743A5</td><td>충격 동안 생성된 가속도를 측정하는 데 사용</td></tr> 세포<tr><td>사멸 염색 키트(CellEvent)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C10423</td><td>세포사멸 세포를 검출하고 시각화하는 데 사용 오</td></tr><tr><td>토클레이브 세척 병</td><td>Nalgene</td><td>2405-0500</td><td>멸균 PBS로 채워 조직 수확 중에 연골에 수분을 공급합니다.</td></tr><tr><td>부검 톱</td><td>Mopec</td><td>BD 810</td><td>관절을 열거나 골연골 코어를 추출한 후 과도한 뼈를 제거합니다</td></tr>. 부<tr><td>검 톱날&nbsp;</td><td>Mopec</td><td>BD 101</td><td>뼈를 절단하여 골연골 외식편을 분리하고 방출하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>베타딘</td><td>아브리오 헬스 LP</td><td>해당 사항 없음</td> 소 <td>샘플을 후드로 옮기기 전에 외부를 소독하는 데 사용되며 최종 골연골 샘플을 소독하기 위해 희석됩니다.</td></tr><tr><td>투명 4피트 호스</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>PBS가 포함된 5리터 카보이를 드릴 프레스의 스위블 어댑터에 연결하는 데 사용됩니다</td></tr>.<tr><td>코어링 드릴 비트&nbsp;</td><td>UKAM 산업용 초경질 공구</td><td>3EDCD7160</td><td>관절 연골 및 연골하 뼈에 구멍을 뚫어 뼈에서 골연골 외식편을 추출하는 데 사용됩니다.-&nbsp; 드릴 비트의 직경: 7/16"(전기 도금 다이아몬드 코어 드릴)</td></tr> <tr><td>초승달 렌치</td><td>McMaster Carr</td><td>5362A1</td><td>클램프(조인트를 제자리에 고정)를 조이고 코어링 드릴 비트를 조이는 데 사용됩니다&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>일회용 혈청학적 피펫</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-678-11</td><td>PBS 및 배양 배지 측정 및 이송</td></tr><tr><td>일회용 언더패드</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23-666-062</td><td>보다 편리하고 위생적인 작업을 위해 수확 중에 물과 액체를 흡수하기 위해 카운터 스페이스를 덮는 데 사용</td></tr> 일<tr><td>회용 진공 필터 장치</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>SCGP00525</td><td>필터 PBS 및 기타 솔루션</td></tr><tr><td>드릴 프레스&nbsp; &nbsp;</td><td>WEN</td><td>433TV 3.25인치</td><td>골연골 샘플 드릴에 힘 가하기- WEN 433TV 3.25인치 산업용 강도 벤치탑</td></tr><tr><td>드릴 프레스 틸팅 앵글 바이스</td><td>WEN</td><td>TV434</td><td>코어링 공정 중에 골연골 샘플을 원하는 각도로 고정된 위치에 고정합니다.</td></tr><tr><td>드롭 타워</td><td>맞춤형</td><td>n/a</td><td>샘플에 영향을 미치는 데 사용</td></tr><tr><td>FIJI(ImageJ Extension)</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>세포 생존력 및 세포사멸 정량화를 포함한 현미경 이미지 처리 및 분석에 사용되는 소프트웨어</td></tr> 겸<tr><td>자</td><td>Fisherbrand</td><td>12-000-163</td><td>후드에서 조직을 절단하고 관절을 열고 샘플을 옮기는 데 사용</td></tr> 거<tr><td>즈(멸균)Dukal</td><td></td><td>6412</td><td>관절 캡슐을 개봉한 후 관절 연골에 수분을 공급하는 데 사용</td></tr> 유리 <tr><td>1리터 미디어 병</td><td>시그마 알드리치</td><td>CLS13951LHTC</td><td>멸균 PBS&nbsp를 보관하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>장갑</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>19-130-1597D</td><td>수집 팀 보호에 사용 인</td></tr><tr><td>슐린-트랜스페린-셀레늄 (ITS)</td><td>Gibco</td><td>41400-045</td><td>미디어 보충</td></tr><tr><td>LabVIEW 데이터 수집 소프트웨어</td><td>National Instruments</td><td>n/a</td><td>후속 분석을 위해 충격 테스트 중에 로드 셀 및 가속도계에서 데이터를 캡처합니다.</td></tr><tr><td>L-아스코르브산</td><td>Merck</td><td>A4403</td><td>미디어 보충제</td></tr><tr><td>레이저 공초점 주사 현미경</td><td>Olympus</td><td>FV1000D</td><td>염색된 조직 샘플의 고해상도 3차원 이미지를 캡처하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>살아있는 세포와 죽은 세포 염색 키트</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>L3224</td><td>세포 생존력을 평가하기 위해 조직 샘플에서 살아있는 세포와 죽은 세포를 구별하는 데 사용됩니다</td></tr> 로드 <tr><td>셀</td><td>Kistler</td><td>9712B5000</td><td>충격 중에 가해지는 힘을 측정하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>매틀랩&nbsp;</td>매<td>스웍스 주식회사</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>육류 밴드 톱</td><td>Skymsen</td><td>MSKLE</td><td>소 샘플에서 수근발굽 제거</td></tr><tr><td>마이크로피펫 10-100 uL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>FBE00100</td><td>측정 및 이송&nbsp; PBS 및 배양 배지</td></tr><tr><td>최소 필수 배지 (MEM) 비필수 아미노산 용액</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td>배지 보충</td></tr>제 <tr><td>Modified Eagle' s 배지 (DMEM)</td> <td>Gibco</td><td>10566-016</td><td>골연골 외식편 배양.</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15-140-148</td><td>배지 보충제</td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>BP399-20</td><td>생리적 상태를 유지하고 탈수를 방지하며 염색 용액을 준비하기 위해 조직을 헹구고, 수분을 공급하고, 냉각하는 데 사용됩니다</td></tr><tr><td>드롭 타워의 샘플 홀더</td><td>맞춤형</td><td>n/a</td><td>충격 중에 골연골 코어를 고정합니다.</td></tr><tr><td>메스 손잡이&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>16-100-107</td><td>정밀한 절단, 조직 해부 및 관절 개방에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>나사 (CAD에 추가)</td><td></td><td></td> <td>6-32 스레드 크기-18-8 스테인레스 스틸 소켓 헤드 나사</td></tr><tr><td>피루브산 나트륨</td><td>Gibco</td><td>11360-070</td><td>미디어 보충</td></tr> 구<tr><td>형 임팩터 헤드</td><td>McMaster Carr</td><td>9292K52</td><td>충격 절차 전 오토클레이브</td></tr> 수술<tr><td>용 마스크</td><td>필터 마스크</td><td>375101</td><td>수집 팀을 보호하는 데 사용</td></tr> 워터 <tr><td>스위블 어댑터&nbsp;</td><td>UKAM 산업용 초경질 공구</td><td>7035812</td><td>코어링 드릴 비트에 연결하여 드릴링 공정 중에 냉각&nbsp; 냉각을 위한 PBS의 지속적인 흐름을 제공합니다.</td></tr></tbody></table>

체외(in vitro ) 소 연골 외식에서 치명적 연골 세포 손상을 일으키는 충격 모델

In Vitro Impact Model to Generate Sublethal Chondrocyte Injury in Bovine Cartilage Explants

골연골 외식에 대한 기계적 충격 하중은 캐리지 높이가 조직 위로 4.0cm, 4.5cm 및 5.0cm(n = 3 또는 4)인 드롭 타워를 사용하여 적용되었습니다. 캐리지가 해제되기 전에 캐리지의 높이를 높이면 충격력, 평균 피크 응력, 적재 속도 및 충격 에너지가 높아집니다(표 1).
우리는 충돌 후 24시간 동안 치명적이지 않은 체외 연골 손상 모델을 개발하고자 했습니다. 낙하 타워 캐리지의 다양한 높이로 충돌 후 24시간 후 Live/Dead stain의 특성화는 수확 절차가 샘플 중앙에서 98.4% ± 0.05의 높은 세포 생존율을 가진 연골 외식재를 생성했음을 나타냅니다. 4.0cm 및 4.5cm 충격 그룹의 세포 생존율은 충돌 후 24시간 동안 충격을 받지 않은 샘플과 크게 다르지 않았지만 5.0cm 높이에서 상당한 감소가 관찰되었습니다(그림 3A). 또한, 세포사멸 신호...

체외(In Vitro ) 소 연골 외식에서 치명적 연골 세포 손상을 일으키는 충격 모델

Post-Traumatic Osteoarthritis (PTOA) is a prevalent, degenerative, and painful progressive joint disease that typically arises after significant joint ...

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Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

토끼의 무릎 관절 chondral 결함의 치료를위한 실험 기법을 설명합니다. 매트릭스 시드자가 연골 세포의 이식은 만족 장기적인 결과를 제공 관절 연골 병변의 개조 및 수리를위한 잘 받아 들여진 방법입니다. 매트릭스를 이용한자가 연골 세포 이식 (MACT)는 표준화 된 임상 설립 주입 방법을 제공합니다.

토끼 모델에서 Chondral 결함의 리모델링 및 수리를위한 매트릭스를 이용한자가 연골 세포 이식

우리는 응용 프로그램 제어 기계 부하 또는 영향의 후 그대로 murine 관절의 관절 표면에 세포 상해/죽음의 공간 범위를 평가 하는 방법을 제시. 관절염, 유전 요인 및 다른 로드 regimens 영향 chondrocytes 제자리에서 의 취약점을 조사 하기 위해이 메서드를 사용할 수 있습니다.

실시간 시각화 및 Chondrocyte 부상 때문에 완전히 그대로 Murine 연골 Explants 기계적 부하의 분석

여기에서, 우리는 소 무릎에서 연골 이식의 격리 및 배양을 설명하는 프로토콜을 제시한다. 이 방법은 관절을 표적으로 하는 생물학적 자극 또는 새로운 치료법에 반응하여 조직 변화를 설명하기 위한 쉽고 접근가능한 도구를 제공한다.

소 무릎 이식에서 연골 리모델링의 전 생체 외 조직 문화 모델

여기에서는 20N 이상의 60 순환 압박에 의해 생성 된 쥐 무릎의 순환 로딩 유도 관절 내 연골 병변 모델을 제시하여 쥐의 대퇴 과두 연골에 손상을 입 힙니다.

래트 무릎의 순환 로딩 유도 관절내 연골 병변 모델을 생성하기 위한 비침습적 방법

토끼의 개방성 내측 대퇴골 과두 충격 모델은 외상 후 골관절염(PTOA)과 PTOA 진행을 완화하기 위한 새로운 치료 전략을 연구하는 데 신뢰할 수 있습니다. 이 프로토콜은 임팩터 헤드가 있는 캐리지 기반 드롭 타워를 사용하여 토끼의 후방 내측 대퇴골 과두의 고립된 연골 결손을 생성합니다.

토끼에서 외상 후 골관절염을 생성하기 위한 재현 가능한 연골 충격 모델

이 프로토콜은 쥐의 대퇴골 활차 홈에 구멍을 뚫고 후속 통증 행동 및 조직병리학적 변화를 측정하여 전층 연골 결손(FTCD) 모델을 설정합니다.

전층 연골 결손의 쥐 모델 개발 및 평가

제안된 프로토콜은 다중 모드 분석을 사용하여 뼈 재생의 맥락에서 뼈 형성을 평가하기 위한 글로벌 접근 방식을 수반합니다. 새로운 뼈 형성에 대한 정성적 및 정량적 정보를 제공하여 기초 및 전임상 조사의 엄격성과 타당성을 향상시키는 것을 목표로 합니다.

Ex vivo 모델에서 조직 광물화의 포괄적인 특성 분석

여기서는 양 무릎에서 통제된 골연골 병변을 생성하는 통합 프로토콜을 제시하여 뼈 및 연골 조직 재생 연구에 적합한 실험 모델을 구축합니다. 프로토콜은 동물 복지에 미치는 영향과 결과 변동을 최소화하는 기법을 사용하여 대퇴골 과과에 전층 골연골 결손을 유도하는 방법을 제시합니다.

전층 골연골 결함의 양 모델 구축 및 평가

글로벌 이완기 기능의 정확한 인과 관계 기반 정량화 매개 변수화 이완기 통해 transmitral 흐름 작성 (PDF) 형식주의의기구 학적 모델링 기반의 분석에 의해 달성되었다. PDF 고유 강성 이완 및로드 파라미터를 생성하고, 장애의 감지 및 특정 인덱스를 제공하는 동시에 '새로운'생리 해명.

매개 변수화 이완기 충전 형식주의를 통해 Transmitral 흐름의 운동 학적 모델링 기반의 분석에 의하여 세계적인 이완기 기능의 정량화

우리는 세 가지 차원 재구성 된 인간의 각막과 같은 상피 (RHCE) 조직 모델을 활용하여 눈 자극 테스트를 개발했습니다. 시험은 안구 자극과 부식성 물질 (GHS 분류 1과 결합 2) 및 표시 (GHS 없음 카테고리)를 필요로하지 않는 사람들을 구별 할 수있다.

복원 된 인간의 각막 모양의 상피 (RHCE) 조직 모델을 사용하여 눈에 자극성 화학 물질의 위험 식별을위한 눈 자극 시험 (EIT)

배우세요 소 연골 외식을 이용한 충격 모델로 연골 세포 손상 반응을 연구하는 방법입니다. 이 기술은 조절된 기계적 하중을 적용하여 치료 가능한 세포의 초기 손상 반응을 분석하고 관절염 진행을 예방하는 분자 경로를 밝히는 데 활용됩니다.

체외(In Vitro ) 소 연골 외식에서 치명적 연골 세포 손상을 일으키는 충격 모델

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