Name: Optimizing Isolation and Purification of Murine Glomerular Mesangial Cells (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 46 s
Description: 배우세요 생쥐 사구체 중간엽세포(MCs) 분리 및 배양 최적화 방법을. 콜라게나제 소화와 기계적 분리를 활용하여 신장 질환 모델 및 신호전달 연구에 활용할 수 있는 견고한 실험 도구를 제공합니다.

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<ol><li>Pollak, M. R., Quaggin, S. E., Hoenig, M. P., Dworkin, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glomerulus%3A+The+sphere+of+influence%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The glomerulus: The sphere of influence.</a> Clin J Am Soc Nephrol. 9 (8), 1461-1469 (2014).</li>
<li>Mené, P., Simonson, M. S., Dunn, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+the+mesangial+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of the mesangial cell.</a> Physiol Rev. 69 (4), 1347-1424 (1989).</li>
<li>Avraham, S., Korin, B., Chung, J. J., Oxburgh, L., Shaw, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mesangial+cell+-+the+glomerular+stromal+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The mesangial cell - the glomerular stromal cell.</a> Nat Rev Nephrol. 17 (12), 855-864 (2021).</li>
<li>Chadban, S. J., Atkins, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerulonephritis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Glomerulonephritis.</a> Lancet. 365 (9473), 1797-1806 (2005).</li>
<li>Qian, Y., Feldman, E., Pennathur, S., Kretzler, M., Brosius, F. C. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+fibrosis+to+sclerosis%3A+Mechanisms+of+glomerulosclerosis+in+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">From fibrosis to sclerosis: Mechanisms of glomerulosclerosis in diabetic nephropathy.</a> Diabetes. 57 (6), 1439-1445 (2008).</li>
<li>Zhu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iga+Gut+microbiome+regulates+the+production+of+hypoglycosilated+iga1+via+the+tlr4+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Iga Gut microbiome regulates the production of hypoglycosilated iga1 via the tlr4 signaling pathway.</a> Nephrol Dial Transplant. 39 (10), 1624-1641 (2024).</li>
<li>Kong, L. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+murine+models+of+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Diabetes+Res%22%5BJournal%5D)">Advances in murine models of diabetic nephropathy.</a> J Diabetes Res. 2013, 797548(2013).</li>
<li>Schiffer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+smads+and+tgf-beta+signaling+in+glomerular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Inhibitory smads and tgf-beta signaling in glomerular cells.</a> J Am Soc Nephrol. 13 (11), 2657-2666 (2002).</li>
<li>Gyarmati, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sparsentan+improves+glomerular+hemodynamics%2C+cell+functions%2C+and+tissue+repair+in+a+mouse+model+of+FSGS%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Sparsentan improves glomerular hemodynamics, cell functions, and tissue repair in a mouse model of FSGS.</a> JCI Insight. 9 (19), e177775(2024).</li>
<li>Chafin, C. B., Regna, N. L., Hammond, S. E., Reilly, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+urinary+microRNA+alterations+in+NZB%2FW+mice+with+hydroxychloroquine+or+prednisone+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">Cellular and urinary microRNA alterations in NZB/W mice with hydroxychloroquine or prednisone treatment.</a> Int Immunopharmacol. 17 (3), 894-906 (2013).</li>
<li>Lucero, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tnf-%CE%B1+plus+il-1%CE%B2+induces+opposite+regulation+of+cx43+hemichannels+and+gap+junctions+in+mesangial+cells+through+a+rhoa%2Frock-dependent+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Tnf-α plus il-1β induces opposite regulation of cx43 hemichannels and gap junctions in mesangial cells through a rhoa/rock-dependent pathway.</a> Int J Mol Sci. 23 (17), (2022).</li>
<li>Schnaper, H. W., Hayashida, T., Hubchak, S. C., Poncelet, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tgf-beta+signal+transduction+and+mesangial+cell+fibrogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tgf-beta signal transduction and mesangial cell fibrogenesis.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 284 (2), F243-F252 (2003).</li>
<li>Mackay, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial%2C+mesangial%2C+and+endothelial+cell+lines+from+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial, mesangial, and endothelial cell lines from transgenic mice.</a> Kidney Int. 33 (3), 677-684 (1988).</li>
<li>Wilson, H. M., Stewart, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial+and+mesangial+cell+culture+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial and mesangial cell culture and characterization.</a> Methods Mol Med. 107, 269-282 (2005).</li>
<li>Menè, P., Stoppacciaro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+propagation+of+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and propagation of glomerular mesangial cells.</a> Methods Mol Biol. 466, 3-17 (2009).</li>
<li>Gilbert, S. F., Migeon, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D-valine+as+a+selective+agent+for+normal+human+and+rodent+epithelial+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">D-valine as a selective agent for normal human and rodent epithelial cells in culture.</a> Cell. 5 (1), 11-17 (1975).</li>
<li>Kreisberg, J. I., Venkatachalam, M., Troyer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+properties+of+cultured+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Contractile properties of cultured glomerular mesangial cells.</a> Am J Physiol. 249 (4 Pt 2), F457-F463 (1985).</li>
<li>Adam, M., Potter, A. S., Potter, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychrophilic+proteases+dramatically+reduce+single-cell+rna-seq+artifacts%3A+A+molecular+atlas+of+kidney+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Psychrophilic proteases dramatically reduce single-cell rna-seq artifacts: A molecular atlas of kidney development.</a> Development. 144 (19), 3625-3632 (2017).</li>
<li>Sadovnic, M. J., Brand-Elnaggar, J., Bolton, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+chicken+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of chicken mesangial cells.</a> Nephron. 58 (1), 75-84 (1991).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100 &마이크로; m 세포 여과기</td><td>Biosharp</td><td>BS-100-CS</td><td></td></tr><tr><td>100mm 페트리 접시</td><td>Sorfa</td><td>230301</td><td></td></tr><tr><td>15mL 원심분리기 튜브</td><td>Sorfa</td><td>411000</td><td></td></tr><tr><td>15mm 유리 바닥 세포 배양 접시</td><td>Sorfa</td><td>201200</td><td></td></tr><tr><td>180kDa Plus Prestained Protein Marker</td><td>Vazyme</td><td>MP201-01</td><td></td></tr><tr><td>2mM L-glutamine</td><td>BasalMedia</td><td>S210JV</td><td></td></tr><tr><td>4% 파라포름알데히드</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td></td></tr><tr><td>40 &마이크로; m 세포 여과기</td><td>Biosharp</td><td>BS-40-XBS</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 원심분리기 튜브</td><td>Sorfa</td><td>41000</td><td></td></tr><tr><td>60 mm 페트리 디쉬</td><td>소르파</td><td>230201</td><td></td></tr><tr><td>75% 알코올</td><td>Knowles</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>96 웰 세포 배양 플레이트, TC 처리</td><td>Servicebio</td><td>CCP-96H</td><td></td></tr><tr><td>항생제 (10 &mu; g/mL 세프트리악손 플러스 100 &mu; g/mL 겐타마이신)</td><td>NCM</td><td>C100C5</td><td></td></tr><tr><td>BCA (Bicinchoninic acid) 단백질 분석 키트</td>, <td>CWBIO</td><td>CW0014S</td><td></td></tr><tr><td>세포 계수 키트-8</td><td>Oriscience</td><td>CB101</td><td></td></tr><tr><td>컨포칼 현미경</td><td>FV-3000</td>, <td>Olympus</td><td></td></tr><tr><td>DMSO Sigma</td><td></td><td>D2650</td><td></td></tr>, <tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Earle's 균형 잡힌 소금 용액 (1x EBSS)&nbsp;</td><td>비요타임</td><td>&nbsp; C0213</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Excell</td><td>FSP500</td><td></td></tr><tr><td>형광 세포 분석기</td><td>Mira FL&nbsp;</td><td>Countstar</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount media</td><td>Southern Biotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>인슐린, 트랜스페린, 셀레늄 용액 100x (ITS -G)</td><td>Gibco</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>도립 형광 현미경</td><td>Olympus</td><td>IX83</td><td></td></tr><tr><td>용해 버퍼</td><td>Adilab</td><td>PP1101</td><td></td></tr><tr><td>원스텝 PAGE 준비 키트(10%)</td><td>Oriscience</td><td>PB102</td><td></td></tr><tr><td>원스텝 PAGE 준비 키트 (7.5%)</td><td>Oriscience</td><td>PB101</td><td></td></tr><tr><td>PE 안티-마우스 CD140b 항체</td><td>Biolegend</td><td>323605</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Servicebio</td><td>G4202</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 셀 페슬</td><td>Biofil</td><td>&nbsp; CC-4090</td><td></td></tr><tr><td>단백질 분해 효소 억제제 칵테일</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>PVDF 멤브레인</td><td>Vazyme</td><td>E802-01</td><td></td></tr><tr><td>재조합 인간 인슐린</td><td>Solarbio</td><td>11061-68-0</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium</td><td>Corning</td><td>10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE 샘플 로딩 버퍼 (5x)</td> <td>Servicebio</td><td>G2013</td><td></td></tr><tr><td>특별히 맞춤화된 Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium (L-valine 대신 D-valine)</td><td>Procell</td><td>WH3923U222</td><td></td></tr><tr><td>TBS (Tris Buffered Saline)&nbsp;</td><td>Servicebio</td><td>G0001-2L</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Biosharp</td><td>BS084</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%)</td><td>Gibco</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Biosharp</td><td>BS100</td><td></td></tr><tr><td>Type I 콜라겐분해효소</td><td>Solarbio</td><td>&nbsp; CB140</td><td></td></tr></tbody></table>

optimizing isolation and purification of murine glomerular mesangial cells

Optimizing Isolation and Purification of Murine Glomerular Mesangial Cells

이 연구는 쥐 MC 분리 및 생체 외 세포 배양을 위한 최적화된 프로토콜을 개발했습니다. 우리가 아는 한, 생체 외에서 1차 MC를 검증하기 위한 표준 방법은 존재하지 않습니다. 이전 간행물에 따르면 MC는 αSMA, Vimentin 및 Fibronectin 3,14,15의 발현을 특징으로 합니다. MC의 발현 수준을 검출하기 위해 웨스턴 블롯 분석을 사용했습니다. 이 연구에서 분리된 MC는 αSMA, Fibronectin 및 Vimentin의 발현이 상당히 높았습니다(그림 4A). 전체 웨스턴 블롯 이미지는 보충 그림 1에 나와 있습니다.
scRNA-seq 데이터베이스 CellMarker를 기반으로...

Mesangial cells (MCs) are stromal cells located in the middle space of the glomerulus, with pivotal functions in glomerular homeostasis. Methods for ...

optimizing-isolation-purification-murine-glomerular-mesangial

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 보고서에서 우리는 개발 신장의 줄기 / 전구 세포를 조절 신호 경로를 연구하는 데 사용할 수있는 배아 마우스 신장에서 전구 세포의 틈새의 격리와 문화에 대한 방법을 설명합니다. 이러한 교양 세포가 작은 분자 및 재조합 단백질 치료에 매우 접근하고 있으며, 또한 중요한 후보 경로의 효율적인 조작을 허용 바이러스 전달에.

배아 마우스 신장의 Nephrogenic 지대의 세포의 분리 및 문화

이 비디오는 쥐의 신장에서 온전한 사구체를 분리하는 방법을 설명합니다. 이렇게 얻어진 캡슐화 및 캡슐화되지 않은 사구체는 쥐 신장에서 두정엽 상피 세포 파생물을 배양하는 데 추가로 사용될 수 있습니다.

사구체 분리: 쥐 신장에서 온전한 사구체를 얻는 기술

이 비디오에서는 광범위한 분자 생물학 및 세포 배양 연구를 위해 신장 세뇨관 상피 세포를 분리하고 정제하는 단계를 보여줍니다.

쥐 신장 세포 분리: 신장 세뇨관 상피 세포의 1차 배양을 분리하고 생성하는 기술

신장 면역 세포를 분리하기 위해 신뢰할 수 있고 효율적인 기술이 다운스트림 응용 프로그램에 필요합니다. 이를 위해서는 소수의 신장 면역 세포에 대한 표면 항체 라벨링이 필요합니다. 여기에서는 이 목표를 달성하는 것처럼 보이는 신장 면역 세포를 분리하는 간결한 방법을 설명합니다.

신장 면역 세포의 신뢰성 및 고효율 추출

기본 microglia murine 두뇌에서의 격리에 대 한 프로토콜 제공 됩니다. 이 기술은 신경 상황의 현재 이해를 발전에 에이즈. 조밀도 기온 변화도 원심 분리와 자력 분리 매우 순수한 샘플의 충분 한 수확량을 생산 하기 위해 결합 됩니다. 또한, 우리 microglia의 특성에 대 한 단계를 설명합니다.

특성화 및 조밀도 기온 변화도 원심 분리 하 여 마우스 기본 Microglia의 절연

이 프로토콜의 주요 초점은 가능한 기본 glomeruli 문화 다양 한 다운스트림 응용 프로그램에에서 사용 하기 위해 최소한의 오염 물질을 효율적으로 분리 하는 것입니다. 격리 된 glomeruli 구성 요소 셀 형식 간의 구조적 관계를 유지 하 고 교양 비보 전 짧은 시간 동안 수 있습니다.

그대로 Glomeruli 성인 쥐 신장에서 분리 하는 효율적인 체질 하 방법

여기 선물이 murine 비보에 biotin과 사 세포 표면 단백질의 라벨에 대 한 프로토콜. 이 프로토콜은 마우스 신장 perfuse glomeruli, 격리 하 고, 관심사의 단백질의 생 immunoprecipitation를 수행 하는 방법에 대 한 정보를 포함 합니다.

절연 Glomeruli와 비보에 사 세포 표면 단백질의 라벨

우리는 그들의 생물학 과 치료 잠재력의 기본적인 연구 그리고 조사를 위한 뮤린 심장 pericytes를 격리하고 정화하는 프로토콜을 설치했습니다.

뮤린 심장 pericytes의 격리 및 정화

이 문서는 마우스 신장에서 분리된 캡슐화된 사구체 사구류의 구체 정수리 세포 성장을 배양하고 분석하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 정수리 상피 세포 증식 및 마이그레이션에 관여하는 경로를 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

정수리 상피 세포 활성화에 관여하는 통로를 분석하는 전 비보 분석으로 구체 아웃스승

이 논문은 열안정성 유인원 바이러스 40 및 광활성성 미토콘드리아를 발현하는 트랜스제닉 마우스의 신장으로부터 조건부로 불멸화된 사구체 내피 세포를분리하는 방법을 설명한다. 우리는 구슬, 소화 단계, 파종 및 GECs-CD31 양성의 배양을 사용하여 전체 신장에서 사구체를 분리하는 절차를 설명합니다.

형광 미토콘드리아를 이용한 조건부 불멸화 마우스 사구체 내피 세포의 분리

배우세요 생쥐 사구체 중간엽세포(MCs) 분리 및 배양 최적화 방법을. 콜라게나제 소화와 기계적 분리를 활용하여 신장 질환 모델 및 신호전달 연구에 활용할 수 있는 견고한 실험 도구를 제공합니다.

Optimizing Isolation and Purification of Murine Glomerular Mesangial Cells

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