Name: 글라이칸 분석을 위한 Microglia의 미토콘드리아 제제 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-30T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: 배우세요 미세아교세포에서 미토콘드리아를 분리하고 질량분석으로 글라이칸을 검출하는 방법을. 이 프로토콜은 뇌질환에서 신경면역 상호작용의 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

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<ol><li>Dos Santos, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+microglial+cell+densities+across+brain+structures+and+mammalian+species%3A+Implications+for+brain+tissue+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Similar microglial cell densities across brain structures and mammalian species: Implications for brain tissue function.</a> J Neurosci. 40 (24), 4622-4643 (2020).</li>
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<li>Arcuri, C., Mecca, C., Bianchi, R., Giambanco, I., Donato, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiological+role+of+microglia+in+dynamic+surveillance%2C+phagocytosis+and+structural+remodeling+of+the+developing+cns%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The pathophysiological role of microglia in dynamic surveillance, phagocytosis and structural remodeling of the developing cns.</a> Front Mol Neurosci. 10, 191(2017).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+glycolytic+reprogramming+controls+microglial+inflammatory+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Early glycolytic reprogramming controls microglial inflammatory activation.</a> J Neuroinflammation. 18 (1), 129(2021).</li>
<li>Cătălin, B., Cupido, A., Iancău, M., Albu, C. V., Kirchhoff, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia%3A+First+responders+in+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Rom+J+Morphol+Embryol%22%5BJournal%5D)">Microglia: First responders in the central nervous system.</a> Rom J Morphol Embryol. 54 (3), 467-472 (2013).</li>
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<li>Hickman, S., Izzy, S., Sen, P., Morsett, L., El Khoury, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia in neurodegeneration.</a> Nat Neurosci. 21 (10), 1359-1369 (2018).</li>
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<li>Starossom, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galectin-1+deactivates+classically+activated+microglia+and+protects+from+inflammation-induced+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Galectin-1 deactivates classically activated microglia and protects from inflammation-induced neurodegeneration.</a> Immunity. 37 (2), 249-263 (2012).</li>
<li>Puigdellívol, M., Allendorf, D. H., Brown, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sialylation+and+galectin-3+in+microglia-mediated+neuroinflammation+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sialylation and galectin-3 in microglia-mediated neuroinflammation and neurodegeneration.</a> Front Cell Neurosci. 14, 162(2020).</li>
<li>Gerlach, J. Q., Kilcoyne, M., Eaton, S., Bhavanandan, V., Joshi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-carbohydrate-mediated+interaction+of+lectins+with+plant+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Non-carbohydrate-mediated interaction of lectins with plant proteins.</a> Adv Exp Med Biol. 705, 257-269 (2011).</li>
<li>Cummings, R. D., Pierce, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+challenge+and+promise+of+glycomics%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">The challenge and promise of glycomics.</a> Chem Biol. 21 (1), 1-15 (2014).</li>
<li>Robichaud, G., Barry, J. A., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IR-MALDESI+mass+spectrometry+imaging+of+biological+tissue+sections+using+ice+as+a+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">IR-MALDESI mass spectrometry imaging of biological tissue sections using ice as a matrix.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 25 (3), 319-328 (2014).</li>
<li>Barry, J. A., Groseclose, M. R., Robichaud, G., Castellino, S., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+drug+and+metabolite+detection+in+liver+tissue+by+uv-maldi+and+ir-maldesi+mass+spectrometry+imaging+coupled+to+ft-icr+ms%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Assessing drug and metabolite detection in liver tissue by uv-maldi and ir-maldesi mass spectrometry imaging coupled to ft-icr ms.</a> Int J Mass Spectrom. 377, 448-155 (2015).</li>
<li>Pace, C. L., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+analysis+of+native+N-linked+glycans+by+IR-MALDESI%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Direct analysis of native N-linked glycans by IR-MALDESI.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 31 (8), 1759-1762 (2020).</li>
<li>Palomino, T. V., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicting+sialic+acid+content+of+N-linked+glycans+using+the+isotopic+pattern+of+chlorine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Predicting sialic acid content of N-linked glycans using the isotopic pattern of chlorine.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 34 (7), 1392-1399 (2023).</li>
<li>Mariethoz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycomics%40expasy%3A+Bridging+the+gap%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Glycomics@expasy: Bridging the gap.</a> Mol Cell Proteomics. 17 (11), 2164-2176 (2018).</li>
<li>Varki, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symbol+nomenclature+for+graphical+representations+of+glycans%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">Symbol nomenclature for graphical representations of glycans.</a> Glycobiology. 25 (12), 1323-1324 (2015).</li>
<li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+glycopattern+alterations+of+mitochondrial+proteins+in+cerebral+cortex+between+rat+alzheimer%27s+disease+and+the+cerebral+ischemia+model%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Comparison of the glycopattern alterations of mitochondrial proteins in cerebral cortex between rat alzheimer's disease and the cerebral ischemia model.</a> Sci Rep. 7 (1), 39948(2017).</li>
<li>Dixit, B., Vanhoozer, S., Anti, N. A., O'Connor, M. S., Boominathan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+enrichment+of+mitochondria+from+mammalian+cell+cultures+using+digitonin%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">Rapid enrichment of mitochondria from mammalian cell cultures using digitonin.</a> MethodsX. 8, 101197(2021).</li>
<li>Kalathil, A. A., et al. New pathway for cisplatin prodrug to utilize metabolic substrate to overcome cancer intrinsic resistance. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKalathil%2C+AA+%22central+science%22">central science</a>. 9, 1297-1312 (2023).</li>
<li>Hecht, E. S., McCord, J. P., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definitive+screening+design+optimization+of+mass+spectrometry+parameters+for+sensitive+comparison+of+filter+and+solid+phase+extraction+purified%2C+inlight+plasma+N-glycans%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Definitive screening design optimization of mass spectrometry parameters for sensitive comparison of filter and solid phase extraction purified, inlight plasma N-glycans.</a> Anal Chem. 87 (14), 7305-7312 (2015).</li>
<li>Hecht, E. S., McCord, J. P., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+glycomics+and+proteomics+combined+purification+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A quantitative glycomics and proteomics combined purification strategy.</a> J Vis Exp. (109), e53735(2016).</li>
<li>Fischler, D. A., Orlando, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-linked+glycan+release+efficiency%3A+A+quantitative+comparison+between+NaOCl+and+PNGase+F+release+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Tech%22%5BJournal%5D)">N-linked glycan release efficiency: A quantitative comparison between NaOCl and PNGase F release protocols.</a> J Biomol Tech. 30 (4), 58-63 (2019).</li>
<li>Tu, A., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internal+energy+deposition+in+infrared+matrix-assisted+laser+desorption+electrospray+ionization+with+and+without+the+use+of+ice+as+a+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Internal energy deposition in infrared matrix-assisted laser desorption electrospray ionization with and without the use of ice as a matrix.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 30 (11), 2380-2391 (2019).</li>
<li>Barry, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+antiretroviral+drugs+in+tissue+by+IR-MALDESI+MSI+coupled+to+the+Q+exactive+and+comparison+with+LC-MS%2FMS+SRM+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Mapping antiretroviral drugs in tissue by IR-MALDESI MSI coupled to the Q exactive and comparison with LC-MS/MS SRM assay.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 25 (12), 2038-2047 (2014).</li>
<li>Samal, J., Palomino, T. V., Chen, J., Muddiman, D. C., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+detection+of+charged+N-glycans+in+the+brain+by+infrared+matrix-assisted+laser+desorption+electrospray+ionization+mass+spectrometric+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Enhanced detection of charged N-glycans in the brain by infrared matrix-assisted laser desorption electrospray ionization mass spectrometric imaging.</a> Anal Chem. 95 (29), 10913-10920 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amersham 600 이미저</td><td>Cytvia&nbsp;</td><td>29194217</td><td>젤 및 멤브레인 이미저</td></tr><tr><td>Countess 3 자동 세포 계수기</td><td>Fisher Scientific</td><td>X003SZ1LY9</td><td></td></tr><tr><td>Dry Bath Stdrd 4 blck 100-120V</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>88870003</td><td></td></tr><tr><td>i-Blot2 겔 전사 장치</td><td>Invitrogen</td><td>IB21001</td><td>웨스턴 블롯 전사 시스템</td></tr> 도<tr><td>립 현미경</td><td>세포 치료</td><td>04355223EA</td><td></td></tr><tr><td>마이크로플레이트 리더</td><td></td><td>82050-760</td><td></td></tr><tr><td>미니 젤 탱크</td><td>Invitrogen</td><td>A25977</td><td></td></tr><tr><td>야외 로커</td><td>피셔 브랜드</td><td>88861025</td><td></td></tr><tr><td>피펫 보이&nbsp;</td><td>BioTek</td><td>229310</td><td></td></tr><tr><td>Vortex mixer</td><td>Integra- VWR</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>strong>Mitochondria 분리 시약&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>미토콘드리아 분리 키트</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>89874</td><td></td></tr><tr><td>포스포타제 억제제</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>1861274</td><td></td></tr><tr><td>프로테아제 억제제</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>1861281</td><td></td></tr><tr><td>N-글리칸 분리 및 IR-MALDESI 시약</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acetic acid&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>A11350</td><td>50% ESI 용매</td></tr><tr><td>아세토니트릴&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>34851-4L</td><td>ESI 용매 중</td></tr><tr><td>탄산 암모늄&nbsp</td>에서 1mM;<td>Fisher Scientific</td><td>A643500</td><td>100 mM</td></tr><tr><td>교정 용액</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>A39239</td><td>Pierce FlexMix</td></tr><tr><td>Dithiothreitol&nbsp;</td><td>시그마 알드리치</td><td>AC426380100</td><td>1M</td></tr><tr><td>요오도아세트아미드</td><td>시그마 알드리치</td><td>A322-10VL</td><td></td></tr><tr><td>LC/MS 등급 물</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>047146.M6</td><td></td></tr><tr><td>PNGase F</td><td>Bulldog Bio</td><td>NZPP010</td><td>75000 U/mL, N-글리칸 방출용 효소&nbsp;</td></tr><tr><td>N-글리칸 분리 및 IR-MALDESI 소모품</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amicon 원심 필터</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>UFC501024</td><td>10kDa MWCO</td></tr><tr><td>질량 분석기</td><td>Orbitrap Exploris 240</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mid-IR Laser</td><td>JGM Associates, Burlington, MA, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Teflon 마이크로웰 슬라이드</td><td>Prosolia, Indianapolis, IN, USA</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>strong>N-글리칸 분석 소프트웨어</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>GlycoMod&nbsp;</td><td>익스패시&nbsp;</td><td></td><td>https://web.expasy.org/glycomod/</td></tr> <tr><td>글라이커넥트</td><td>익스파시&nbsp;</td><td></td><td>https://glyconnect.expasy.org/</td></tr><tr><td>단백질 분리 및 웨스턴 블롯 소모품&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Basix 젤 로딩 팁(10 & micro; L)&nbsp;</td><td>Basix</td><td>13-611-102</td><td></td></tr><tr><td>Basix 젤 로딩 팁(200 & micro; L)&nbsp;</td><td>Basix</td><td>13-611-116</td><td></td></tr><tr><td>셀 스크래퍼</td><td>VWR 연구소</td><td>14-388-100</td><td></td></tr><tr><td>i-Blot NC 일반 스택</td><td>Invitrogen</td><td>IB23001</td><td></td></tr><tr><td>i-Blot2 PVDF 일반 스택</td><td>Invitrogen</td><td>IB24001</td><td></td></tr><tr><td>10&nbsp; &micro; L 마이크로피펫</td><td>Fisher Scientific</td><td>FBE00010</td><td></td></tr><tr><td>20 & micro; L 마이크로피펫</td><td>Invitrogen</td><td>FBE00020</td><td></td></tr><tr><td>200&nbsp; &micro; L 마이크로피펫&nbsp;</td>피<td>셔 브랜드</td><td>FBE00200</td><td></td></tr><tr><td>1000 & micro; L 마이크로피펫</td><td>피셔 브랜드</td><td>FBE01000</td><td></td></tr><tr><td>10&nbsp; &micro; L 피펫 팁&nbsp;</td><td>VWR 연구소</td><td>76322-528</td><td></td></tr><tr><td>20&nbsp; &micro; L 피펫 팁</td><td>VWR 연구소</td><td>76322-134</td><td></td></tr><tr><td>200&nbsp; &micro; L 피펫 팁&nbsp;</td><td>VWR 연구소</td><td>76322-150</td><td></td></tr><tr><td>1000&nbsp; &micro; L 피펫 팁</td><td>VWR 실험실</td><td>76322-154</td><td></td></tr><tr><td>웰 플레이트&nbsp;</td><td>피셔 브랜드</td><td>14-388-100</td><td></td></tr><tr><td>단백질 분리 및 웨스턴 블롯 시약&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Actin 항체 (숙주 : 토끼)</td> <td>Cell Signaling Technologies</td><td>8457T</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Rabbit IgG HRP Linked&nbsp;</td><td>Cell Signaling Technologies</td><td>7074S</td><td></td></tr><tr><td>Bolt 4-12% Bis-Tris Plus</td><td>Invitrogen</td><td>NW04120BOX</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>피셔 바이오시약</td><td>BP9700-100</td><td></td></tr><tr><td>COXIV 항체 (숙주 : 토끼)</td><td>세포 신호 기술</td><td>4844S</td><td></td></tr><tr><td>GAPDH 항체 (숙주 : 토끼)</td><td>세포 신호 전달 기술</td><td>2118S</td><td></td></tr><tr><td>MicroBCA 단백질 분석 키트</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>23235</td><td></td></tr><tr><td>Nupage MOPS SDS 러닝 버퍼 [20x]</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>NP0001</td><td></td></tr><tr><td>PAGE 눈금자 사전 염색 단백질 사다리</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>815-968-0747</td><td>희석= 7&nbsp; &micro; L을 첫 번째 웰</td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수&nbsp</td>에 로드합니다.<td>Aniara Diagnostics</td><td>A12-9423-5</td><td>10x 분말에서 1x PBS를 준비합니다&nbsp;</td></tr><tr><td>피어스 ECL 웨스턴 블로팅 기질</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>32106</td><td>화학발광 기질 키트</td></tr><tr><td>RIPA 버퍼</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>89901</td><td></td></tr><tr><td>샘플 완충액</td><td>Novex</td><td>B0007</td><td>볼트 LDS 샘플 완충액은 샘플 대 샘플 완충액의 3:1 비율로 준비됩니다</td></tr>. <tr><td>Tween-20</td><td>MP Biomedicals</td><td>TWEEN201</td><td></td></tr><tr><td>조직 배양 소모품&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Countess Slides</td><td>Avantor</td><td>229411</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 튜브</td><td>세포 치료</td><td>414004-265612-5884</td><td></td></tr><tr><td>2mL 흡인 피펫</td><td>Vista lab</td><td>5090-0010E</td><td></td></tr><tr><td>5mL 혈청학적 피펫&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11D</td><td></td></tr><tr><td>10mL 혈청학적 피펫&nbsp;</td><td>Basix</td><td>13-678-11E</td><td></td></tr><tr><td>25 mL 혈청 피</td>펫 <td>Vista lab</td><td>FB012937</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 혈청 피펫</td><td>Vista lab</td><td>14955233</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 원뿔형 튜브</td><td>Avantor</td><td>229225A</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 원뿔형 튜브</td><td>세포 치료</td><td>4190-0050</td><td></td></tr><tr><td>T-75 cm2 조직 배양 플라스크</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012937</td><td></td></tr><tr><td>T-180 cm2 조직 배양 플라스크</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012939</td><td></td></tr><tr><td>조직 배양 시약&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BV2 미세아교세포주&nbsp;</td><td>크리에이티브 바이오어레이&nbsp;</td><td>CSC-I2227Z</td><td>C57/BL6 신생아 미세아교세포&nbsp에서 유래한 불멸화 마우스 미세아교세포(BV2);</td></tr><tr><td>세포 해리 효소&nbsp;</td><td>써모피셔 사이언티픽&nbsp;</td><td>12563029</td><td>TrypLE&nbsp;</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM) 저포도당 배지&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>10567014</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>Cytiva</td><td>SH30071.03HI</td><td></td></tr><tr><td>최소 필수 배지(MEM) 비필수 아미노산</td><td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>페니실리움 스트렙토마이신</td><td>Cytivia</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충액 식염수</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>트리판 블루 염색 0.4%</td><td>Invitrogen</td><td>티10282</td><td></td></tr></tbody></table>

글라이칸 분석을 위한 microglia의 미토콘드리아 제제

Mitochondrial Preparation from Microglia for Glycan Analysis

그림 1은 질량 분광 글라이칸 분석을 위해 BV2 미세아교세포주에서 미토콘드리아를 분리하는 데 관련된 단계의 개략도를 나타냅니다. 미세아교세포의 동일한 시작 밀도에서 서로 다른 미토콘드리아 제제 간 미토콘드리아 단백질 분리의 재현성은 그림 2에 나타나 있으며, 이는 마이크로 BCA 분석을 사용하여 추정된 미토콘드리아 단백질 농도 간에 큰 차이가 없음을 보여줍니다.
그림 3은 COX IV 및 GAPDH의 웨스턴 블롯 분석을 사용한 미토콘드리아 분리의 순도를 나타냅니다. 여기서, 우리는 프로토콜에 사용된 시약 기반 분리의 마지막 단계에서 분리된 미토콘드리아 분획에서 미토콘드리아 단백질 COX IV의 발현을 볼 수 있습니다. 면역블롯은 분리된 미토콘드리아 분획에서 두드러진 COX IV 밴드를 보여주는 반면, GAPDH는 동일한...

글라이칸 분석을 위한 Microglia의 미토콘드리아 제제

Understanding the glycosylation patterns of mitochondrial proteins in microglia is critical for determining their role in neurodegenerative diseases. ...

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Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

두뇌의 세포 이질에서 기본 microglia를 분리하는 것은 생리적 및 병리 학적 조건에 모두 자신의 역할을 조사하는 것이 필수적이다. 이 프로토콜은 기계적인 고립과 높은 수율과 높은 순도를 제공 혼합 세포 배양 기술에 대한 실용적 기본 microglial 세포에 대해...

신생아 쥐 뇌 조직의 혼합 Glial 세포 배양의 기본 Microglia 격리

Microglia은 중추 신경계의 방어 및 면역 감시의 첫번째 라인을 제공 macrophages를 거주하고 있습니다. MicroRNAs는 활성화 및 macrophages의 차별화 등 많은 생리 과정에 중요한 역할을 규제 분자입니다. 이 문서에서는 microglia에서 microRNAs의 측정을위한 방법을 설명합니다.

일반 CNS의 실시간 PCR에 의한과 Neuroinflammation 동안 Microglia에 MicroRNAs의 탐지

이 비디오는 성인 쥐의 뇌 피질에서 미세아교세포를 분리하는 기술을 보여줍니다. 첫째, 피질은 뉴런과 다른 신경교세포를 제거하기 위해 세분화와 균질화를 거쳐 미세아교세포를 보존합니다. 그 후, 세포 현탁액은 항 미엘린 자기 마이크로비드와 자기장에 노출되어 미엘린 파편과 미엘린을 포함하는 세포에서 미세아교세포와 골수성 세포를 효과적으로 분리합니다.

성인 마우스 뇌의 피질에서 미세아교세포의 분리

이 절차는 성인 마우스 뇌 미토콘드리아 - 관련 ER의 멤브레인 또는 MAMs 및 MAMs과 mitochondrial 준비에서 glycosphingolipid 강화 microdomain 분수에서 분리하는 방법을 보여줍니다.

미토콘드리아 - 관련 ER의 멤브레인 (MAMs)와 Glycosphingolipid 강화 Microdomains (보석) : 마우스 뇌에서 절연

우리는 신생아 대뇌 피질 성인 척수 가능한 미세 아교 세포의 효율적이고 신속한 분리 / 문화 방법을 설명합니다. 대뇌 피질의 미세 아교 세포의 해부 및 도금은 초기 박리 다음 장소 ~ 10 일을 복용 이후 미세 아교 수확으로 90 분 이내에 수행 할 수 있습니다.

신생아와 성인 중추 신경계에서 배양 소교 세포

미세 아교 세포 생물학의 성공적인 조사에 하나의 키는 CNS의 조직으로부터 분리하는 동안 생체 미세 아교 immunofunction의 보존이다. 형광 이미징, 면역 세포 화학, 및 염증성 자극 지질 다당류 (LPS)와 팸 3 CSK 4 (팸)와 ELISA 다음 미세 아교 세포의 활성에 의해 평가 매우 순수하고 immunofunctional 세포 배양에 회전 흔들림 결과를 통해 미세 아교 세포를 분리.

쥐과 신생아에서 보존 면역 표현형과 기능으로 두피 소교 세포의 분리

여기에, 프로토콜 (MitoCeption)는 GSC 대사와 기능에 대한 생물학적 효과를 연구 목적으로, 아교 모세포종 줄기 세포 (GSC)로, 인간 중간 엽 줄기 세포 (MSC)에서 격리 된 미토콘드리아를 전송하기 위해 제공됩니다. 유사한 프로토콜이 다른 세포 유형 간 미토콘드리아를 전송하도록 구성 될 수있다.

MitoCeption는 : 아교 모세포종 줄기 세포에 고립 된 인간의 MSC 미토콘드리아 전송

여기에 제공된 것은 다른 조직과 뇌의 다양한 영역에서 분리된 미토콘드리아를 가진 다른 펩티드 및 단백질의 네이티브 형태, 프리피릴라 및 성숙한 아밀로이드 섬유사이의 상호작용을 조사하기 위한 프로토콜이다.

아밀로이드 피브릴스뇌 미토콘드리아의 상호 작용 및 막 관과화

우리는 성인 마우스 뇌 반구의 다른 해부 된 영역에서 microglia의 격리를위한 프로토콜을 제공하고, 전체 길이 전사체의 깊은 단일 세포 RNA 시퀀싱을위한 반자동 라이브러리 준비를 제공합니다. 이 방법은 건강과 질병에서 microglia의 기능적 이질성을 해명하는 데 도움이됩니다.

깊은 단세포 RNA 염기서열 분석에 대한 하나의 성인 마우스 뇌 반구에서 영역 별 Microglia의 격리

본 연구는 생쥐 뇌 조직의 면역염색 및 영상 분석을 기반으로 미토콘드리아의 형태를 분석하는 방법을 제시 한다. 또한 이를 통해 파킨슨병 모델에서 단백질 응집에 의해 유도된 미토콘드리아 형태의 변화를 감지할 수 있는 방법을 설명합니다.

파킨슨병 모델에서 미토콘드리아 형태학의 조직학적 검사

이 프로토콜은 1차 마우스 미세아교세포에서 대사 재프로그래밍을 정량화하기 위해 해당분해 스트레스 검사를 비용 효율적으로 수행하는 방법을 설명합니다. 분리 및 염증 자극 후, 신선하게 준비된 pH 조정 시약을 사용해 세포외산성화 속도(ECAR)를 측정한 후, 단백질 정규화를 통해 당해질 변화를 정확하고 재현 가능하게 평가합니다.

세포외 플럭스 분석법을 이용한 1차 미세아교세포의 당화 연구

배우세요 미세아교세포에서 미토콘드리아를 분리하고 질량분석으로 글라이칸을 검출하는 방법을. 이 프로토콜은 뇌질환에서 신경면역 상호작용의 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

글라이칸 분석을 위한 Microglia의 미토콘드리아 제제

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