Name: 환자 유래 대장직장 종양 오가노이드(Patient-derived Colorectal Tumor Organoids)와 종양 침윤 림프구(TIL)의 공동 배양 시스템 구축 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-27T13:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: 배우세요 대장직장암 오가노이드와 종양 침윤 림프구(TIL)의 공동 배양 방법을 통해 면역 반응을 연구하고 개인 맞춤형 치료 전략을 개발하는 기법을 익히세요.

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<ol><li>Eng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Colorectal cancer.</a> Lancet. 404 (10449), 294-310 (2024).</li>
<li>Sarnaik, A. A., Hwu, P., Mulé, J. J., Pilon-Thomas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-infiltrating+lymphocytes%3A+A+new+hope%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor-infiltrating lymphocytes: A new hope.</a> Cancer Cell. 42 (8), 1315-1318 (2024).</li>
<li>Paijens, S. T., Vledder, A., De Bruyn, M., Nijman, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-infiltrating+lymphocytes+in+the+immunotherapy+era%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tumor-infiltrating lymphocytes in the immunotherapy era.</a> Cell Mol Immunol. 18 (4), 842-859 (2021).</li>
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<li>Huang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+I+study+of+adjuvant+immunotherapy+with+autologous+tumor-infiltrating+lymphocytes+in+locally+advanced+cervical+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Phase I study of adjuvant immunotherapy with autologous tumor-infiltrating lymphocytes in locally advanced cervical cancer.</a> J Clin Invest. 132 (15), e157726(2022).</li>
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<li>Itzhaki, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+large-scale+expansion+of+minimally+cultured+%26%2334%3Byoung%26%2334%3B+tumor+infiltrating+lymphocytes+for+adoptive+transfer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother%22%5BJournal%5D)">Establishment and large-scale expansion of minimally cultured &#34;young&#34; tumor infiltrating lymphocytes for adoptive transfer therapy.</a> J Immunother. 34 (2), 212-220 (2011).</li>
<li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+predict+chemoradiation+responses+of+locally+advanced+rectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids predict chemoradiation responses of locally advanced rectal cancer.</a> Cell Stem Cell. 26 (1), 17-26.e16 (2020).</li>
<li>Moore, D. K., Motaung, B., Du Plessis, N., Shabangu, A. N., Loxton, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+b-cells+using+miltenyi+macs+bead+isolation+kits%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Isolation of b-cells using miltenyi macs bead isolation kits.</a> PLoS One. 14 (3), e0213832(2019).</li>
<li>Albrecht, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+colon+cancer-derived+tumor-infiltrating+t+cells+%28tils%29+for+adoptive+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Generation of colon cancer-derived tumor-infiltrating t cells (tils) for adoptive cell therapy.</a> Cytotherapy. 25 (5), 537-547 (2023).</li>
<li>Tan, Y. S., Lei, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+tumor-infiltrating+lymphocytes+by+ficoll-paque+density+gradient+centrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of tumor-infiltrating lymphocytes by ficoll-paque density gradient centrifugation.</a> Methods Mol Biol. 1960, 93-99 (2019).</li>
<li>Ou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+melanoma+organoid+models+facilitate+the+assessment+of+immunotherapies%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Patient-derived melanoma organoid models facilitate the assessment of immunotherapies.</a> EBioMedicine. 92, 104614(2023).</li>
<li>Huang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+as+personalized+avatars+and+a+potential+immunotherapy+model+in+cervical+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids as personalized avatars and a potential immunotherapy model in cervical cancer.</a> iScience. 26 (11), 108198(2023).</li>
<li>Parikh, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+patient-derived+tumor+organoids+from+common+epithelial+cancers+to+analyze+personalized+T-cell+responses+to+neoantigens%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Immunother%22%5BJournal%5D)">Using patient-derived tumor organoids from common epithelial cancers to analyze personalized T-cell responses to neoantigens.</a> Cancer Immunol Immunother. 72 (10), 3149-3162 (2023).</li>
<li>Wherry, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+exhaustion%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">T cell exhaustion.</a> Nat Immunol. 12 (6), 492-499 (2011).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+engineered+IL-15+cytokine+mutein+fused+to+an+anti-PD1+improves+intratumoral+T-cell+function+and+antitumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Res%22%5BJournal%5D)">An engineered IL-15 cytokine mutein fused to an anti-PD1 improves intratumoral T-cell function and antitumor immunity.</a> Cancer Immunol Res. 9 (10), 1141-1157 (2021).</li>
<li>Chang, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posttranscriptional+control+of+T+cell+effector+function+by+aerobic+glycolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Posttranscriptional control of T cell effector function by aerobic glycolysis.</a> Cell. 153 (6), 1239-1251 (2013).</li>
<li>Trefny, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+Snx9+alleviates+CD8+T+cell+exhaustion+for+effective+cellular+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Deletion of Snx9 alleviates CD8 T cell exhaustion for effective cellular cancer immunotherapy.</a> Nat Commun. 14 (1), 86(2023).</li>
<li>Sarnaik, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lifileucel%2C+a+tumor-infiltrating+lymphocyte+therapy%2C+in+metastatic+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Lifileucel, a tumor-infiltrating lymphocyte therapy, in metastatic melanoma.</a> J Clin Oncol. 39 (24), 2656-2666 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>고급 DMEM/F-12</td><td>깁코</td><td>12634028</td><td></td></tr><tr><td>2-메르캅토에탄올</td><td>시그마</td><td>63689</td><td></td></tr><tr><td>4% 파라포름알데히드</td><td>비비</td><td>E672002-0100</td><td></td></tr><tr><td>7-AAD</td><td>바이오레전드</td><td>420403</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>토크리스</td><td>2939</td><td></td></tr><tr><td>B27 보충</td><td>깁코</td><td>17504-44</td><td></td></tr><tr><td>CD107a-PE-시아닌7</td><td>바이오레전드</td><td>328618</td><td></td></tr><tr><td>CD279-PE</td><td>바이오레전드</td><td>329906</td><td></td></tr><tr><td>CD3 단클론 항체 (OKT3)</td><td>인비트로젠</td><td>14-0037-82</td><td></td></tr><tr><td>CD3-FITC</td><td>바이오레전드</td><td>300406</td><td></td></tr><tr><td>CD45(세포내 도메인)(D9M8I)&nbsp;</td><td>중부 표준시</td><td>13917S</td><td></td></tr><tr><td>CD4-APC/시아닌7</td><td>바이오레전드</td><td>300518</td><td></td></tr><tr><td>CD8-APC</td><td>바이오레전드</td><td>344722</td><td></td></tr><tr><td>CDX-2</td><td>MXB</td><td>RMA-0631</td><td></td></tr><tr><td>CK20 시리즈</td><td>MXB</td><td>키트-0025</td><td></td></tr><tr><td>CK7</td><td>MXB</td><td>키트-0021</td><td></td></tr><tr><td>Dylight 488, 염소 안티 토끼 IgG</td><td>아브킨</td><td>A23220</td><td></td></tr><tr><td>Dylight 549, 염소 항마우스 IgG</td><td>아브킨</td><td>A23310</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>페프로텍</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>EpCAM</td><td>중부 표준시</td><td>36746T</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청(FBS)</td><td>셀맥스</td><td>SA211.02</td><td></td></tr><tr><td>FGF 10</td><td>페프로텍</td><td>100-26</td><td></td></tr><tr><td>가스트린(인간)</td><td>토크리스</td><td>3006</td><td></td></tr><tr><td>글루타맥스 100배</td><td>깁코</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>헤페스</td><td>시그마</td><td>H4034</td><td></td></tr><tr><td>헴스</td><td>시그마</td><td>H4034</td><td></td></tr><tr><td>인간 CD3+ 세포 분리 키트(RUO)</td><td>RWD</td><td>K1201-10</td><td></td></tr><tr><td>인간 IFN-감마 재조합 단백질</td><td>페프로테크</td><td>300-02-20UG</td><td></td></tr><tr><td>키-67</td><td>중부 표준시</td><td>9449초</td><td></td></tr><tr><td>마트리겔</td><td>코 닝</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>N-아세틸시스테인</td><td>시그마</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>니코틴아미드</td><td>시그마</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>니볼루맙(항-PD-1)</td><td>셀렉</td><td>A2002&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>시그마</td><td>V900929</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>엔씨엠바이오텍</td><td>C100C5 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>프리모신</td><td>인비보젠</td><td>개미-pm-1</td><td></td></tr><tr><td>RBC 용해 완충액</td><td>써모-인비트로겐</td><td>00-4300-54</td><td></td></tr><tr><td>재조합 인간 IL-2(보인체 없음)</td><td>바이오레전드</td><td>589104</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>깁코</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SB202190</td><td>셀렉</td><td>S1077</td><td></td></tr><tr><td>트리판 블루 염색 0.4%</td><td>써모-인비트로겐</td><td>티10282</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-LEAF Purified anti-human CD28 항체</td><td>바이오레전드</td><td>302934</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-LEAF 정제 항인간 CD3 항체</td><td>바이오레전드</td><td>317325</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>셀렉</td><td>S1049</td><td></td></tr></tbody></table>

환자 유래 대장직장 종양 오가노이드(patient-derived colorectal tumor organoids)와 종양 침윤 림프구(til)의 공동 배양 시스템 구축

Establishment of a Co-culture System of Patient-Derived Colorectal Tumor Organoids and Tumor-Infiltrating Lymphocytes (TILs)

CRC PDO의 확립 및 특성화 종양 표본은 CRC 환자로부터 얻었다. 갓 절제된 CRC 종양 조직을 사용하여 PDO와 TIL을 확립했으며, 이는 이후 PDO-TIL 공동 배양 실험에 사용되었습니다(그림 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68346/68346fig1.jpg"> 
그림 1: 전체 실험 워크플로우의 개략도. CRC PDO 확립, TIL 확장 및 공동 배양 분석을 포함한 실험 설계의 순차적 단계를 요약한 다이어그램입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68346/68346fig1large...

환자 유래 대장직장 종양 오가노이드(Patient-derived Colorectal Tumor Organoids)와 종양 침윤 림프구(TIL)의 공동 배양 시스템 구축

Colorectal cancer (CRC) is the third most common cancer worldwide. Tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) have been identified as an important prognostic ...

establishment-co-culture-system-patient-derived-colorectal-tumor

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연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

기본 생쥐 대장 종양 organoid을 설정하는 간단한 방법이 설명되어 있습니다. 이 방법은 대장 종양 세포가 생존하고 상피 정상적인 결장하지 않는 반면, 제한된 성장 인자를 포함하는 미디어 organoids로 성장하는 기능을 사용합니다.

기본 마우스 대장 종양의 체외 Organoid의 문화

우리는 마우스의 맹장에 종양 세포 또는 유기체를 주입하고이 모델에서 순환하는 종양 세포 (CTCs)를 분리하여 정형 적 대장 직장 종양의 형성을 기술합니다.

대장 암 정위 마우스 모델에서의 순환 종양 세포의 분리

순환 종양 세포 (CTCs) 암 전이 동안 폐 식민을 촉진 역할을 해독 하는 동물 모델 필요 합니다. 여기, 우리가 설립 하 고 성공적으로 수행는 vivo에서 시험의 구체적으로 테스트를 폐 식민 CTCs에 고분자 fibronectin (polyFN) 어셈블리의 요구.

순환 종양 세포 시각화 폐 조직에 대 한 폐 식민 분석 결과의 설립

있도록 매우 민감한 탐지 목표 인간의 대 장 암 (CRC) 세포 조직 정착, 우리 여기 PDX 파생 CRC organoid 셀에 녹색 형광 단백질 (GFP) lentiviral 입자의 효율적인 변환에 대 한 프로토콜을 표시 스테레오-형광 현미경 관찰 받는 쥐로 그들의 주입에의...

GFP Lentivirus 불리고 Organoids 환자 파생 결 장 종양에서 경작에 의해 생성 된 Micrometastases의 고감도 검출

시험관내 모델 시스템은 폐암 관련 섬유아세포(CAFs)와 3차원(3D) 공동 배양에서 폐 편평상피암(LUSC) 진행 동안 조직 건축 변화를 포착하기 위해 개발되었다. 이 오르가노이드 시스템은 종양 표현형을 조절하는 다양한 종양 세포 본질 및 외인성 변화의 역할을 조사하는 독특한 플랫폼을 제공한다.

폐 편평상피암 진행을 모델링하는 다차원 동문화 시스템

환자 유래 오가노이드 (PDO)는 질병의 유전 적 및 표현형 이질성과 개인화 된 항암 요법에 대한 반응을 모두 반영하는 번역 암 연구의 강력한 도구입니다. 여기서, 표현형 분석 및 약물 반응의 평가를 위한 준비로 인간 원발성 방광암 PDOs를 생성하기 위한 통합 프로토콜이 상세히 설명된다.

정밀 의학 도구로서의 방광암 오가노이드의 문화

환자 유래 유방 종양 절제술 또는 정상 유방 조직에서 인간 유방 오가노이드를 확립하기 위한 자세한 프로토콜이 여기에 제공됩니다. 이 프로토콜은 인간 환자 유래 유방 오가노이드의 배양, 동결 및 해동에 대한 포괄적인 단계별 지침을 제공합니다.

환자 유래 유방 오가노이드의 확립 및 배양

종양 오가노이드는 암 연구와 개인 맞춤형 의학에 대한 접근 방식에 혁명을 일으켰습니다. 이는 임상적으로 관련성이 높은 종양 모델을 나타내며 이를 통해 연구자들은 임상에서 종양보다 한 발 앞서 나갈 수 있습니다. 이 프로토콜은 신선한 췌장 종양 조직 샘플과 췌장 선암 기원의 환자 유래 이종이식에서 종양 오가노이드를 확립합니다.

췌장암 유래 종양 오가노이드 및 섬유아세포를 신선한 조직에서 확립

이 프로토콜은 식도 편평세포암(ESCC) 환자에서 동일한 환자에서 암세포, 암 관련 섬유아세포(CAFs), 비종양 관련 섬유아세포(CF)를 동시에 분리하는 방법을 설명합니다. 이러한 환자 맞춤형 자료의 활용은 환자 간 변동성 문제를 피하고 ESCC 연구에 적합한 실험 플랫폼을 제공할 수 있습니다.

동일한 식도암 환자로부터 종양 오가노이드, 암 관련 섬유아세포 및 대응 섬유아세포의 형성

다음 프로토콜 환자 파생 된 연 조직 육 종 (STS)의 주 문화는의 설립에 집중 한다. 이 모델 분자 배경 및 약리 프로필 이러한 드문 악성 종양의 더 나은 이해를 우리를 도울 수 및 STS 관리를 개선 하기 위한 추가 연구에 대 한 출발점을 대표할 수 있었다.

환자에서 파생 된 연 조직 육 종의 기본 문화 설립

배우세요 대장직장암 오가노이드와 종양 침윤 림프구(TIL)의 공동 배양 방법을 통해 면역 반응을 연구하고 개인 맞춤형 치료 전략을 개발하는 기법을 익히세요.

환자 유래 대장직장 종양 오가노이드(Patient-derived Colorectal Tumor Organoids)와 종양 침윤 림프구(TIL)의 공동 배양 시스템 구축

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