June 10th, 2025
이것은 포괄적인 Xenopus 샘플링 프로토콜의 첫 번째 부분입니다. 표본 조직은 심실, 동맥 줄기, 왼쪽 간엽, 담낭, 폐, 췌장, 비장, 후두, 식도, 위, 장, 고환, 지방체, 난관, 쌍을 이루는 신장, 좌골신경총, 피부, 흉선 및 눈 전체입니다.
이 연구는 Xenopus 심실, 동맥 줄기, 좌간엽, 담낭, 폐, 췌장, 비장, 후두, 식도, 위, 장, 고환, 지방체, 난관, 쌍을 이루는 신장, 좌골 신경총, 피부, 흉선 및 눈 전체를 1시간 이내에 신속하게 수집하는 복제 가능한 방법을 만드는 것을 목표로 합니다. 실험적 과제는 조직 신선도를 최적화하는 것입니다. 이러한 이유로 프로토콜은 1시간 이내에 완료되도록 설계되었습니다. 조직의 신선도를 우선시함으로써 이러한 조직은 단백질체학과 같은 고품질 생화학적 분석을 완료하는 데 사용되는 동물의 수를 최소화하는 데 사용할 수 있습니다. 앞으로 우리는 뇌, 근육, 뼈와 같이 접근하기 더 어려운 조직에 대한 프로토콜을 작성할 것입니다.
[강사] 시작하려면 해부 절차를 위해 안락사된 개구리를 배치하고 팔다리를 고정합니다. 해부 가위를 사용하여 정중선을 따라 피부를 절단한 다음 측면으로 절단하여 두 개의 피부 플랩을 만듭니다. 집게를 사용하여 백선을 잡고 체강에서 당겨 빼냅니다. 근육 조직을 머리 쪽으로 조심스럽게 자르고 구멍 벽의 두 개의 플랩을 만듭니다. 심장에 더 잘 접근할 수 있도록 오구골을 줄입니다. 심낭을 늘리고 천공한 다음 다시 벗겨 3개의 심실을 노출시킵니다. 이제 심실과 동맥 줄기와 만나는 교차점에서 신탁을 다듬습니다. 겸자를 사용하여 심실의 정점을 잡고 동맥 줄기와의 접합부 바로 아래에서 여백을 남겨 자릅니다. 동맥 몸통 분기점을 관찰하면서 몸통을 팽팽하게 당기고 아치로 갈라진 지점 바로 뒤에서 대동맥 줄기를 자릅니다. 다음으로 왼쪽 간엽의 입술을 잡고 부드럽게 들어 올려 간관과 낭성관을 노출시킵니다. 이 부착물 아래 왼쪽 엽의 아래쪽 2/3을 샘플링합니다. 담낭을 확인한 후 담낭을 잡고 오른쪽 간엽에서 떼어내고 부착물을 끊습니다. 그런 다음 폐의 정점을 잡고 팽팽하게 당깁니다. 기관지로 전환되는 경계에서 폐를 절단합니다. 후두에서 기관지를 제거합니다. 난소 제거를 위해 난소엽을 각각의 측면으로 이동하여 신장 복부의 부착 부위를 시각화합니다. 가위를 사용하여 손상 없이 신장에 가까운 난소를 제거합니다. 다음으로, 정중엽이라고도 알려진 간의 전엽을 검사하고 중간엽을 통해 십이지장과의 연결을 관찰합니다. 홍채절제술 가위를 사용하여 간중막과 간십이지장 인대를 절단합니다. 나머지 다육질 덩어리는 췌장과 총담관입니다. 전간엽에서 췌장과 총담관의 연결을 끊고 마진을 남깁니다. 이빨 겸자로 위를, 조직 겸자로 췌장의 한쪽 끝을 잡습니다. 확대하여 췌장을 위에서 부드럽게 떼어냅니다. 그런 다음 비장을 식별하고 복막에 부착된 비장을 절단하여 샘플링합니다. 후두의 아래쪽 끝을 잡고 구멍에서 들어 올리기 시작하여 복막 부착물이 발견되면 절단합니다. 후두가 올라가면 구부러진 홍채절제술 가위를 사용하여 후두에서 식도 조직을 조심스럽게 분리하고 절단합니다. 그런 다음 후두를 아래로 당겨 눈에 보이는 부착물을 절단하면서 구강에서 잘라냅니다. 식도와 구별되는 위의 곡률 및 장의 시작을 표시하는 유문 제한을 관찰하십시오. 위의 곡률 바로 앞쪽에서 소화관을 절단하여 식도와 분리합니다. 입을 벌리고 지붕에 있는 유스타키오관의 공유 개구부를 찾습니다. 입을 벌린 채 식도를 잡아당겨 부착을 관찰합니다. 그런 다음 유스타키오 개구부 바로 아래 협강에서 식도를 절단합니다. 그런 다음 식도를 제거하십시오. 이제 위를 잡고 십이지장과 연결되는 유문 제한에서 자릅니다. 결장을 팽팽하게 당기고 배설강에 최대한 가깝게 자릅니다. 장을 제거하고 도중에 눈에 보이는 복막 부착물을 잘라냅니다. 개구리가 수컷인 경우 고환을 식별하고 홍채 절제술 가위를 사용하여 고환을 제거하여 신장이 손상되지 않도록 합니다. 뚱뚱한 몸체를 떼어내고 각각의 측면에 배치하여 신장 근처의 복막 부착물을 노출시킵니다. 뚱뚱한 몸의 기저부를 잡고 복막에서 여백을 남겨 잘라냅니다. 방광을 제거하려면 가능한 한 배설강에 가깝게 절단하십시오. 개구리가 암컷이거나 흔적이 보이는 난관이 있는 경우 난관의 아래쪽 끝을 잡고 배설강에서 당겨 빼냅니다. 배설강 근처의 난관을 절단한 다음 체강 밖으로 빼내어 복막 부착물을 절단합니다. 겸자를 사용하여 후복막 쌍을 이루는 신장을 잡고 기저부에서 복막을 절단합니다. 신장을 구멍 밖으로 들어 올려 모든 복막 부착물을 절단합니다. 다음으로 겸자로 좌골 신경총의 신경다발을 잡고 체강에서 나오는 신경을 절단합니다. 신경 다발을 들어 올려 척추와의 연결부에서 다시 자릅니다. 이제 핀을 제거하고 동물을 복쪽으로 뒤집습니다. 팔다리를 다시 고정하고 샘플링을 위해 뒷다리 하나를 선택하여 발을 고정합니다. 비복근과 경골 비골 부위 위의 아몬드 모양의 피부 부분을 절제합니다. 등쪽 피부를 잡고 동물의 중간 부분을 측면으로 절개합니다. 연속 원형 절단을 만듭니다. 핀을 제거하고 한 손으로 다리를 고정한 다음 쥐 이빨 집게를 사용하여 앞쪽 등쪽 피부를 잡습니다. 등쪽 피부를 머리와 팔 위로 강제로 당겨 동물의 가죽을 벗깁니다. 흉선을 샘플링하려면 턱 관절을 덮고 있는 지방 덩어리를 식별하고 분홍색 근육 조직과 융합되는 덩어리의 뒤쪽 가장자리를 자릅니다. 홍채 절제술 가위를 사용하여 뼈에서 덩어리를 잘라내어 멜라노포어 클러스터가 있는 경우 드러냅니다. 그런 다음 조직을 잘라 근육이나 연골을 제거합니다. 그런 다음 동물을 다시 선택하고 눈을 선택합니다. 구부러진 홍채 절제술 가위를 안와에 삽입하고 눈의 곡률 주위를 부드럽게 잘라 근육 부착물을 풀어줍니다. 마지막으로 가위를 안와 깊숙이 밀어 넣고 눈 뒤의 시신경을 자릅니다. 눈을 소켓에서 제거하고 남아 있는 근육을 잘라냅니다. 이 절차에 따라 안락사 후 1시간 이내에 모든 주요 장기를 추출, 헹구고 다듬었습니다.
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본 연구는 생화학적 분석을 위한 조직 신선도를 최적화하는 데 초점을 맞춰 Xenopus 모델 유기체로부터 다양한 조직을 1시간 내에 효율적으로 수집하는 방법을 제시합니다. 대상 조직에는 심장, 간, 담낭 등의 중요 기관이 포함됩니다.
Standardized, rapid tissue sampling in adult Xenopus enables high-quality, reproducible biochemical analyses critical for early discovery and target validation in vertebrate models. This protocol addresses a key bottleneck in comparative biology and proteomics by ensuring sample freshness and anatomical consistency. The approach supports scalable, cross-study data generation for translational and mechanistic research pipelines.
This protocol integrates at the interface of early discovery and preclinical research, providing a foundation for lead identification and mechanistic studies in vertebrate models.