Name: 고처리량 스캐폴드 기반 배양 플랫폼으로서의 SPOT의 재현 가능한 제조 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 22 s
Description: 배우세요 고처리량 스캐폴드 기반 배양 플랫폼 SPOT의 재현 가능한 제조 방법을. 자동화된 액체 처리 시스템을 활용하여 약물 스크리닝 워크플로우와 질병 모델링 연구의 효율성을 높입니다.

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<ol><li>Antoni, D., Burckel, H., Josset, E., Noel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-Dimensional+Cell+Culture%3A+A+Breakthrough+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Three-Dimensional Cell Culture: A Breakthrough in vivo.</a> Int J Mol Sci. 16 (3), 5517-5527 (2015).</li>
<li>Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+third+dimension+bridges+the+gap+between+cell+culture+and+live+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 8 (10), 839-845 (2007).</li>
<li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Organoids.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 1-21 (2022).</li>
<li>Done, A. J., Birkeland, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+as+a+tool+in+drug+discovery+and+patient-specific+therapy+for+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22CR+Med%22%5BJournal%5D)">Organoids as a tool in drug discovery and patient-specific therapy for head and neck cancer.</a> CR Med. 4 (6), 101087(2023).</li>
<li>Drost, J., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Organoids in cancer research.</a> Nat Rev Cancer. 18 (7), 407-418 (2018).</li>
<li>Schuster, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+microfluidic+platform+for+dynamic+and+combinatorial+drug+screening+of+tumor+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Automated microfluidic platform for dynamic and combinatorial drug screening of tumor organoids.</a> Nat Commun. 11 (1), 5271(2020).</li>
<li>Bozal, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+automated+3D+high+content+cell+screening+platform+for+organoid+phenotyping%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+Disc%22%5BJournal%5D)">Development of an automated 3D high content cell screening platform for organoid phenotyping.</a> SLAS Disc. 29 (7), 100182(2024).</li>
<li>Seiler, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modular+automated+microfluidic+cell+culture+platform+reduces+glycolytic+stress+in+cerebral+cortex+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Modular automated microfluidic cell culture platform reduces glycolytic stress in cerebral cortex organoids.</a> Sci Rep. 12 (1), 20173(2022).</li>
<li>Costa, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+tumor+spheroids%3A+an+overview+on+the+tools+and+techniques+used+for+their+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">3D tumor spheroids: an overview on the tools and techniques used for their analysis.</a> Biotechnol Adv. 34 (8), 1427-1441 (2016).</li>
<li>Pinho, D., Santos, D., Vila, A., Carvalho, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+Colorectal+Cancer+Organoids+in+Microfluidic-Based+System%5BTitle%5D)+AND+%22Micromachines%22%5BJournal%5D)">Establishment of Colorectal Cancer Organoids in Microfluidic-Based System.</a> Micromachines. 12 (5), 497(2021).</li>
<li>Töpfer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bovine+colon+organoids%3A+From+3D+bioprinting+to+cryopreserved+multi-well+screening+platforms%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+in+Vitro%22%5BJournal%5D)">Bovine colon organoids: From 3D bioprinting to cryopreserved multi-well screening platforms.</a> Toxicol in Vitro. 61, 104606(2019).</li>
<li>Tong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+defined+ECM+and+small+molecule+based+monolayer+culture+system+for+the+expansion+of+mouse+and+human+intestinal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Towards a defined ECM and small molecule based monolayer culture system for the expansion of mouse and human intestinal stem cells.</a> Biomaterials. 154, 60-73 (2018).</li>
<li>Krebs, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carrageenan-Based+Crowding+and+Confinement+Combination+Approach+to+Increase+Collagen+Deposition+for+In+Vitro+Tissue+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Gels%22%5BJournal%5D)">Carrageenan-Based Crowding and Confinement Combination Approach to Increase Collagen Deposition for In Vitro Tissue Development.</a> Gels. 9 (9), 705(2023).</li>
<li>Li, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+off-the-shelf+multi-well+scaffold-supported+platform+for+tumour+organoid-based+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">An off-the-shelf multi-well scaffold-supported platform for tumour organoid-based tissues.</a> Biomaterials. 291, 121883(2022).</li>
<li>Phan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+high-throughput+approach+identifies+actionable+drug+sensitivities+in+patient-derived+tumor+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">A simple high-throughput approach identifies actionable drug sensitivities in patient-derived tumor organoids.</a> Commun Biol. 2 (1), 78(2019).</li>
<li>Hofer, M., Lutolf, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mater%22%5BJournal%5D)">Engineering organoids.</a> Nat Rev Mater. 6 (5), 402-420 (2021).</li>
<li>Landon-Brace, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Engineered+Patient-Derived+Tumor+Organoid+Model+That+Can+Be+Disassembled+to+Study+Cellular+Responses+in+a+Graded+3D+Microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Func+Mater%22%5BJournal%5D)">An Engineered Patient-Derived Tumor Organoid Model That Can Be Disassembled to Study Cellular Responses in a Graded 3D Microenvironment.</a> Adv Func Mater. 31 (41), 2105349(2021).</li>
<li>Cao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Automation+Workflow+for+High-Throughput+Manufacturing+and+Analysis+of+Scaffold-Supported+3D+Tissue+Arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthcare+Mater%22%5BJournal%5D)">An Automation Workflow for High-Throughput Manufacturing and Analysis of Scaffold-Supported 3D Tissue Arrays.</a> Adv Healthcare Mater. 12 (19), 2202422(2023).</li>
<li>Rodenhizer, D., Dean, T., Xu, B., Cojocari, D., McGuigan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+engineered+heterogeneous+tumor+model+for+assessing+cellular+environment+and+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional engineered heterogeneous tumor model for assessing cellular environment and response.</a> Nat Protoc. 13 (9), 1917-1957 (2018).</li>
<li>Young, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+TRACER+3D+Co-Culture+tumour+model+for+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A TRACER 3D Co-Culture tumour model for head and neck cancer.</a> Biomaterials. 164, 54-69 (2018).</li>
<li>Dean, T., Li, N. T., Cadavid, J. L., Ailles, L., McGuigan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+TRACER+culture+invasion+assay+to+probe+the+impact+of+cancer+associated+fibroblasts+on+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cell+invasiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">A TRACER culture invasion assay to probe the impact of cancer associated fibroblasts on head and neck squamous cell carcinoma cell invasiveness.</a> Biomater Sci. 8 (11), 3078-3094 (2020).</li>
<li>Du, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+miniaturized+3D+organoid+culture+platform+for+ultra-high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of a miniaturized 3D organoid culture platform for ultra-high-throughput screening.</a> J Mol Cell Biol. 12 (8), 630-643 (2020).</li>
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생물의학 연구의 발전에도 불구하고 생리학적으로 관련된 체외 분석을 개발하는 것은 여전히 어려운 과제입니다. 이상적인 분석은 다양한 분야의 연구자의 요구를 충족하기 위해 다양한 세포 유형, 치료 제형, 시간 척도, 상용 기기 및 분석 판독값을 수용해야 합니다. 그러나 적절한 도구가 부족하기 때문에 연구자들은 특히 암 연구에서 복잡성과 임상적 관련성을 요약하지 못하는 불멸화된 세포주의 2D 단층과 같은 단순한 모델에 의존하는 경우가 많습니다 1,2. 이 문제를 해결하기 위해 대규모 종양 바이오뱅킹과 임상의 협력을 통해 세포주에 비해 더 많은 환자별 유전 및 치료 프로필을 유지하는 환자 유래 종양 오가노이드(PDO)와 같은 충실도가 높은 시험관 내 모델의 개발이 촉진되었습니다 3,4,5. 한편, 실험실 자동화 및 신약 개발의 발전으로 인해 처리량이 많은 워크플로에 원활하게 통합되는 플랫폼이 필요합니다. 기존 플랫폼은 생물학적 충실도 또는 확장성을 다루지만 두 가지 문제를 동시에 해결할 수 있는 플랫폼은 거의 없습니다 6,7,8. 주요 질병 특징을 복제하는 자동화된 고처리량 모델을 개발하는 것은 생물의학 연구를 발전시키고 중개 애플리케이션을 위한 데이터 생성을 가속화하는 데 매우 중요합니다.
수많은 새로운 모델은 PDO와 같은 특수 세포 유형을 높은 처리량으로 배양하는 것과 관련된 문제를 해결하는 것을 목표로 합니다(그림 1). 오가노이드가 96웰 또는 384웰 플레이트에서 하이드로겔과 혼합되는 표준 플랫폼에는 몇 가지 제한 사항이 있습니다: (i) 높은 세포-겔 부피는 일관되지 않은 영양소 접근으로 이어지며, (ii) 웰 메니스커스 곡률은 이미징 아티팩트 및 세포 구배를 생성하며, (iii) 하이드로겔 파종은 배치 및 인력 전반에 걸쳐 균일성이 부족합니다., (iv) 자동화된 제조 및 자동화된 현미경과의 비호환성, (v) 일반적으로 부드럽고 깨지기 쉬운 위험 샘플인 세포외 기질(ECM)의 사용 생리학적 조직 밀도에서의 파괴 또는 수축 세포 유형의 혼입 1,9. 현재 플레이트 기반 PDO 연구의 대부분은 세포-겔을 플레이트(10,11)에 수동으로 시딩하거나, 하이드로겔을 덜 점성이 있는 배지로 희석하고 세포를 웰 바닥으로 원심분리하여 적절한 광학 평면(12,13)에 배치하는 겔 오버레이 방법을 사용하여 수행됩니다. 두 접근 방식 모두 장기적인 배양을 위한 기계적 지원을 제공하지 못합니다. 이전 관찰(미공개 데이터)에 따르면, 표준 웰 플레이트의 세포와 혼합된 상업용 하이드로겔은 12일 동안 12개의 웰 중 9개 동안 웰 표면에서 수축하는 반면, 겔 오버레이 방법에는 생리학적 세포-기질 상호 작용이 부족합니다. 또한, 생성된 배양물은 웰 내의 공간 제한으로 인해 장기간 유지될 수 없으며 높은 시약 대 세포-배지 비율을 요구하는 분석과 양립할 수 없습니다 14,15,16. 이러한 실질적인 장벽은 3D 모델의 채택을 방해하고 현장 전반에 걸쳐 실험 재현성을 제한합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68405/68405fig1.jpg"> 
그림 1: 확장성 및 생물학적 관련성을 기반으로 한 배양 모델 평가. 플레이트 처리량과 생물학적 관련성(x축)으로 정의되는 확장성(y축)을 따라 다양한 시험관 내 및 생체 내 배양 시스템의 상대적 위치를 지정하여 처리량 잠재력과 생리학적 충실도 간의 절충안을 강조합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68405/68405fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
이러한 과제에 동기를 부여하여 얇은 셀룰로오스 스캐폴드의 높은 다공성과 기계적 강화를 활용하여 96웰 및 384웰 형식으로 제공되는 오가노이드 기반 조직용 스캐폴드 지원 플랫폼(SPOT)을 개발했습니다. SPOT은 플레이트 레이아웃과 일치하는 이전에 개발된 침투 방법(17)을 사용하여 폴리머 사전 패턴화된 스캐폴드를 통합하여 정밀한 세포-겔 액적 배치를 가능하게 하고 하이드로겔 상에 대한 구조적 지지를 제공합니다(그림 2A). 스캐폴드로의 모세관 위킹은 세포-겔 용액을 안내하여 기계적으로 강제된 생체 복합재 네트워크를 형성합니다(그림 2B). 스캐폴드의 다공성 구조로 인해 세포-겔이 침투하여 얇은 층(두께 약 70μm)을 형성하여 웰(14)의 바닥을 덮는 데 10배 적은 양의 세포-겔이 필요합니다. SPOT과 파종 췌관 선암종(PDAC) PDO의 호환성은 대사 분석 및 이미지 기반 측정을 사용하여 성장을 평가함으로써 입증되었습니다. 개발 이후 SPOT은 오가노이드 배양에 종사하는 연구자들에게 상당한 다양성과 유용성을 입증했습니다. 또한 SPOT의 설계는 평평하고 반월상연이 없는 마이크로겔 형상을 통해 시약 부피를 줄이고 이미징 기능을 개선하여 사용자 친화적인 확장성을 수용하여 균일한 빛 투과와 정확한 고함량 이미징을 보장합니다14(그림 2C,D). SPOT은 또한 종양 미세 환경을 더 잘 요약하기 위해 섬유아세포와 같은 다른 관련 세포 유형과의 공동 배양을 지원합니다18.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68405/68405fig2.jpg"> 
그림 2: 96-SPOT 장치 및 이미지 분석 워크플로우 개요. (A) SPOT 플레이트 제조의 개략도: 장치는 양면 폴리아크릴 접착제 층(노란색으로 표시됨)을 사용하여 상업용 바닥이 없는 웰 플레이트(상단), PMMA 패턴 스캐폴드(파란색으로 표시) 및 폴리카보네이트 필름(하단)을 대조하여 조립됩니다. (B) 스캐폴드 웰에 세포 파종: 세포를 중합되지 않은 하이드로겔(분홍색으로 표시됨)에 현탁시키고 스캐폴드에 침투하는 각 웰에 피펫팅합니다. 그런 다음 하이드로겔을 겔화하여 스캐폴드 지지 하이드로겔 내에서 세포를 캡슐화합니다. (C) 현미경: 생성된 미세조직은 자동화된 광시야 현미경을 사용하여 이미지화할 수 있습니다. (D) 이미지 기반 분석: 겔에 부유하는 형광 세포(녹색)의 획득 이미지는 표준 이미지 분석 파이프라인을 사용하여 분석할 수 있습니다. 하나의 96-SPOT 웰에서 GFP 발현 KP4 세포의 대표적인 낙산화 현미경 이미지. 스케일 바는 500μm입니다. 이 수치는14에서 수정되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68405/68405fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
SPOT의 또 다른 장점은 시스템을 오픈 소스 액체 처리기와 통합하여 PDO 배양의 자동화되고 재현 가능한 제조를 용이하게 할 수 있다는 것입니다. 이러한 발전은 사용자 변동성을 줄이고 고처리량 약물 스크리닝 및 맞춤형 의학 접근법을 포함한 복잡한 실험 설계를 지원합니다18. SPOT은 또한 이전에 이질적인 종양 환경에서 세포 표현형의 단일 세포 기반 다중화 특성화 및 분해에 의한 SPOT으로부터 필요에 따라 세포를 회수하는 것으로 나타났습니다18. 이러한 기능은 SPOT을 생리학적으로 관련된 조건에서 약물 효능 및 세포 거동을 평가하는 데 종단적 고해상도 데이터가 필수적인 스크리닝 응용 분야를 위한 다목적 도구로 자리매김합니다14,18. 이러한 기술 혁신을 결합함으로써 SPOT은 기존 3D 배양 시스템의 중요한 한계를 해결합니다.
이 프로토콜은 견고하고 재현 가능한 3D 오가노이드 배양을 위한 SPOT 구성 요소 제작, 플레이트 조립 및 파종 방법에 대한 포괄적인 가이드를 제공합니다. 여기에는 마이크로피펫을 사용한 수동 플레이트 시딩과 96웰 및 384웰 형식을 모두 지원하는 액체 핸들러를 사용한 자동 시딩 워크플로우에 대한 자세한 지침이 포함되어 있습니다. 또한 이 프로토콜은 높은 실험 표준을 유지하기 위해 균일한 겔 분포 및 스캐폴드 무결성 확인과 같은 필수 품질 관리 조치를 간략하게 설명합니다. 불완전한 젤 침투, 파종 중 증발, 스캐폴드 분리와 같은 일반적인 문제를 해결하기 위한 문제 해결 전략도 제공되어 연구자에게 작업 흐름을 최적화하고 신뢰할 수 있는 결과를 얻을 수 있는 실용적인 솔루션을 제공합니다.
SPOT은 겔 무결성을 유지하면서 분석 및 배지 변경 수행과 관련된 문제를 포함하여 전통적인 오가노이드 분석이 직면하는 격차를 메우도록 설계되었습니다 10,11,12,13. 이 방법의 전반적인 목표는 12일 동안 오가노이드 배양을 지원하는 스캐폴드 지원 플랫폼을 제조하는 것입니다. 또한 이 방법은 수동 또는 액체 처리기 지원 시딩을 통해 SPOT에서 조직 어레이를 생성하는 것을 포함하여 사용자가 약물 IC50 분석 및 소분자 스크리닝을 포함한 모든 다운스트림 섭동을 수행할 수 있도록 합니다.

<table><tbody><tr><td>0.2mL PCR 튜브(8개 스트립)&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>72.985.002</td><td></td></tr><tr><td>1.5mL 원심분리기 튜브</td><td>프로가바이오</td><td>LMCT1.7B</td><td></td></tr><tr><td>1000-&무; L 피펫 팁</td><td>식</td><td>4-1019-260-000</td><td></td></tr><tr><td>10mL 혈청학적 피펫</td><td>프로가바이오</td><td>394010</td><td></td></tr><tr><td>10mL 주사기</td><td>BD, 캐나다</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>10x 최소 필수 배지(MEM 10x)</td><td>깁코</td><td>11430030</td><td></td></tr><tr><td>150mm 접시</td><td>코 닝</td><td>430599</td><td></td></tr><tr><td>루어 잠금 연결 기능이 있는 16게이지 디스펜싱 팁</td><td>McMaster-Carr, 일리노이, 미국</td><td>6699A2</td><td></td></tr><tr><td>20&마이크로; L 필터 팁 랙</td><td>오픈트론</td><td>999-00099</td><td></td></tr><tr><td>200&마이크로; L 필터 팁 랙</td><td>오픈트론</td><td>999-00081</td><td></td></tr><tr><td>200-&무; L 피펫 팁</td><td>식</td><td>4-1030-260-000</td><td></td></tr><tr><td>루어 잠금 연결 기능이 있는 20게이지 디스펜싱 팁</td><td>McMaster-Carr, 일리노이, 미국</td><td>6699A4</td><td></td></tr><tr><td>384-웰 노-바텀 웰 플레이트(검은색)</td><td>그라이너</td><td>82051-544</td><td></td></tr><tr><td>3mL 주사기&nbsp;</td><td>BD, 캐나다</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>50mL 폴리프로필렌 원추형 원심분리기 튜브</td><td>VWR</td><td>CA21008-940</td><td></td></tr><tr><td>50mL 폴리프로필렌 원추형 원심분리기 튜브</td><td>VWR</td><td>CA21008-940</td><td></td></tr><tr><td>96웰 노-바텀 웰 플레이트(검은색)</td><td>그라이너</td><td>82050-714</td><td></td></tr><tr><td>아세톤</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>답18-1</td><td></td></tr><tr><td>분석 저울</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>Inkscape용 AxiDraw 확장 (https://wiki.evilmadscientist.com/Axidraw_Software_Installation)</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>AxiDraw Python API(https://axidraw.com/doc/py_api/#installation)&nbsp;</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>AxiDraw V3 고성능 개인용 필기 및 드로잉 머신</td><td>Evil Mad Scientists, 미국</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>소 콜라겐 (PureCol 3 mg/ml)</td><td>고급 바이오매트릭스</td><td>5005</td><td></td></tr><tr><td>선택한 세포주</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>클립 이젤(AxiDraw V3 패키지에 포함)</td><td>Evil Mad Scientists, 미국</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>선택한 배양 배지</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>먼지 트래핑 보호 테이프</td><td>3분</td><td>6851 PN36851</td><td></td></tr><tr><td>양면 폴리아크릴 접착 테이프(800mm x 1200mm)</td><td>접착제 연구, ARcare</td><td>90106NB</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청(FBS)</td><td>깁코</td><td>12483-020</td><td></td></tr><tr><td>Finum 차 필터 XL&nbsp;</td><td>리엔쉬 & Held GmbH & Co. KG, 함부르크, 독일</td><td>420.69.00</td><td></td></tr><tr><td>0.2mL PCR 튜브용 플랫 캡(8개 스트립)</td><td>사르슈테트</td><td>65.989.002</td><td></td></tr><tr><td>헤비 듀티 플라스틱 스프링 클램프</td><td>벤치 마크</td><td>1024-554</td><td></td></tr><tr><td>HEPA 모듈 &ndash; 110-130V 60Hz 모델</td><td>오픈트론</td><td>999-00109</td><td></td></tr><tr><td>아이스 팩 (냉동, 1400mm× 1800mm)</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>Inkscape 소프트웨어</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>레이저 커터</td><td>범용 레이저 시스템</td><td>VLS3.75</td><td></td></tr><tr><td>외경 0.07인치의 미니어처 에틸 비닐 아세테이트(EVA) 튜브</td><td>McMaster-Carr, 일리노이, 미국</td><td>1883T3</td><td></td></tr><tr><td>다중 채널 전자 피펫 P20 (Gen2)</td><td>오픈트론</td><td>999-00005</td><td></td></tr><tr><td>다중 채널 전자 피펫 P300 (Gen2)</td><td>오픈트론</td><td>999-00006</td><td></td></tr><tr><td>매니큐어</td><td>샐리 한센</td><td>SBS-006861</td><td>옵션, PMMA 잉크의 색소 침착용</td></tr><tr><td>오픈트론 OT-2</td><td>오픈트론</td><td>999-00111</td><td></td></tr><tr><td>P1000 피펫</td><td>길슨</td><td>FA10006M</td><td></td></tr><tr><td>P200 8채널 피펫</td><td>길슨</td><td>F144072</td><td></td></tr><tr><td>P200 피펫</td><td>길슨</td><td>FA10005M</td><td></td></tr><tr><td>종이 타월</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>파라필름</td><td>베미스 컴퍼니, Inc.</td><td>52859-079</td><td></td></tr><tr><td>양피지&nbsp; &nbsp;</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>파스퇴르 피펫</td><td>VWR</td><td>14672-380</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신(P/S)</td><td>시그마-알드리치</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>폴리(메틸메타크릴레이트)(PMMA)</td><td>시그마-알드리치</td><td>182230</td><td></td></tr><tr><td>폴리카보네이트 필름(760mm x 1300mm)</td><td>맥마스터-카</td><td>85585K102</td><td></td></tr><tr><td>폴리디메틸실록산 단량체 및 가교제(PDMS, 1500mm x 2700mm)</td><td>엘스워스 접착제</td><td>4019862</td><td></td></tr><tr><td>정밀 칼</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>견고한 아크릴 지지대(웰 플레이트 바닥에 맞는 크기)</td><td>맥마스터-카</td><td>8560K239</td><td></td></tr><tr><td>견고한 판지 지지대</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>통치자</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>가위&nbsp;</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨(증류수에 0.8M)</td><td>시그마-알드리치</td><td>에스6014</td><td></td></tr><tr><td>알루미늄 블록이 있는 온도 데크(Gen2)</td><td>오픈트론</td><td>999-00097</td><td></td></tr><tr><td>추적 휠&nbsp;</td><td>HEEPDD(아마존)</td><td>B07YQWB284</td><td></td></tr><tr><td>투명 테이프&nbsp;</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>트리판 블루</td><td>깁코</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>트립신</td><td>깁코</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>핀셋</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr><tr><td>와류 믹서&nbsp;</td><td>해당 사항 없음</td><td>해당 사항 없음</td><td></td></tr></tbody></table>

고처리량 스캐폴드 기반 배양 플랫폼으로서의 spot의 재현 가능한 제조

Reproducible Manufacturing of SPOT as a High-throughput Scaffold-based Culture Platform

종이 비계의 PMMA 패턴화는 웰 간 내용물 교환을 방지하는 물리적 장벽 역할을 합니다. 이 설계는 인접한 웰이 화학적, 생물학적으로 분리된 상태로 유지되도록 하여 배지, 약물, 분비 인자 또는 세포의 의도하지 않은 확산을 방지하는 데 중요합니다14. PMMA의 통합은 정확한 구획화를 가능하게 하여 SPOT을 교차 오염을 최소화해야 하는 고처리량 스크리닝 및 공동 배양 연구를 위한 신뢰할 수 있는 플랫폼으로 만듭니다14,18. 권장되는 품질 보증 및 품질 관리 실험은 표 3 및 표 4에 설명되어 있습니다. 세포-겔 혼합물 파종 관행 및 장기 오가노이드 배양을 진행하기 전에 수행해야 하는 가장 중요한 품질 보증 실험 중 하나는 조립된 플레이트의 구조적 무결성과 PMMA 장벽의 효능을 보장하기 위한 누출 테스트입니다. 성공적으...

고처리량 스캐폴드 기반 배양 플랫폼으로서의 SPOT의 재현 가능한 제조

Patient-derived organoids (PDOs) are becoming increasingly used in the field of cancer research to model tumors. They combine the benefits of in vivo and ...

reproducible-manufacturing-spot-as-high-throughput-scaffold-based

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

주로 monolayer 문화 - - 종종 차별화된 기본 세포가 상대적으로 짧은 수명을했고 문화 중에 드 차별되는 단점을 앓고 체외 배양 시스템에서 과거 많은에서. 그 결과, 그들의 장기 특정 기능의 대부분은 급속하게 손실되었다. 따라서 체외에서 이러한 세포에 대한 더 나은 조건을 재현하기 위해, 수정 및 adaptations는 기존 monolayer의 문화되었습니다.

인터뷰 : 줄기 세포 연구에 대한 Bioreactors와 분수 - 수정된 3D - 공사장 공중 발판

단백질 치료제 생산을위한 생산 세포주 개발의 높은 처리량, 자동화된 플랫폼은 설명합니다. BD FACS 아리아 세포 분류기의 구현, CloneSelect 영상기 및 TECAN 자유 에보 (Evo) 액체 처리 시스템이 향상 세포주의 품질과 높은 재현성과 세포주 개발에 크게 증가 처리 능력을 보여주었다.

단백질 치료제 제조 셀 라인의 개발을위한 높은 처리량 자동 플랫폼

설명된 프로토콜을 통해 실험실은 프로그래밍 가능한 액체 처리 로봇과 96웰 플레이트를 사용하여 최소한의 노동력, 경험 및 장비 투자 비용으로 높은 처리량으로 확장 가능하고 접착력이 있는 줄기 세포 배양을 수행할 수 있습니다.  이 시스템에서 20회 이상 통과한 iPSC는 다능성, 정상 핵형을 유지했으며 심근세포로 분화되었습니다.

로봇 액체 처리 시스템을 사용하여 확장 가능한 96 웰 IPSC 문화 기반 플레이트 및 생산

이 문서에서는 물리와 화학의 높은 처리량 조작 신호 세포 microenvironments vivo에서 흉내 낸 고을 다중화 인공 세포 MicroEnvironment (MACME) 배열 준비 하 상세한 방법론 단일 셀 프로 파일링 인간 만능 줄기 세포 (hPSCs)를 위한 최적의 휴대폰 환경을 식별 합니다.

멀티플렉스 인공 세포 MicroEnvironment 배열의 제작

이 프로토콜은 점성 재료의 표준화되고 재현 가능한 혼합을 위한 포괄적인 자습서역할을 하며, 새로운 오픈 소스 자동화 기술이 있습니다. 새로 개발된 오픈 소스 워크스테이션 의 작동, 오픈 소스 프로토콜 디자이너의 사용, 재현 가능한 혼합물을 식별하기 위한 유효성 검사 및 검증에 대한 자세한 지침이 제공됩니다.

하이드로겔 기반 3D 문화 모델을 자동화및 표준화방식으로 제조하는 오픈 소스 기술 플랫폼

줄기 세포 유래 심근 세포를 사용하여 생체 공학적으로 설계된 3차원 심장 조직은 건강한 심근과 병든 인간 심근 을 체외 에서 연구하는 동시에 천연 심장 틈새 시장의 주요 측면을 요약하기 위한 유망한 모델로 부상했습니다. 이 원고는 인간 유도 만능 줄기 세포 유래 심근세포에서 생성된 high-content engineered 심장 조직을 제작하고 분석하기 위한 프로토콜을 설명합니다.

공학적 심장 조직의 데이터 수집 및 모델 처리량을 개선하기 위한 바이오리액터 설계

이 논문은mm2당 수백 개의 마이크로컨테이너를 사용하는 새로운 유형의 배양 기질에 대한 제조 프로토콜을 제시하며, 이 배양에서 오가노이드는 고해상도 현미경을 사용하여 배양 및 관찰할 수 있습니다. 세포 파종 및 면역 염색 프로토콜도 자세히 설명되어 있습니다.

오가노이드의 배양 및 3D 이미징을 위한 고처리량 플랫폼

여기서는 자동화된 세포 배양 시스템을 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 자동 배양 시스템은 iPS 세포의 유지에서 다양한 유형의 세포로의 분화에 이르기까지 유도만능줄기세포(iPS) 세포 취급에 익숙하지 않은 연구자를 포함하여 노동력을 줄이고 사용자에게 이점을 제공합니다.

인간 유도 만능 줄기 세포의 유지 및 분화를 위한 자동 배양 시스템

이 프로토콜은 산업 미생물을 위한 표준 고처리량 스크리닝 워크플로우를 제공합니다. 이 과정은 ARTP 돌연변이 유발을 통해 돌연변이 라이브러리를 구축하고, 자동화된 마이크로플루이딕스를 이용한 양성 액상 스크리닝을 수행하며, 이후 결과를 검증하는 과정을 포함합니다. 이 워크플로우의 신뢰성은 고수율 B. coagulans 균주를 스크리닝하여 검증되었습니다.

자동 액상 마이크로플루이딕 플랫폼을 이용한 L-락산을 과생산하는 바실루스 응고 체 돌연변이체의 고처리량 스크리닝

전통적인 2 차원 세포 배양 기술은 종종 차별화 마커, 크린 시토킨 및 성장 요인과 관련하여 변경된 특성의 결과. extravillous trophoblast 세포 라인과 함께 그림과 같이 회전 세포 배양 시스템의 세 가지 차원 세포 배양 (RCCS)는 이러한 요소 중 많은 표현 reestablishes.

인간 세포 배양을위한 회전 세포 배양 시스템 : 모델로 인간 Trophoblast 셀

배우세요 고처리량 스캐폴드 기반 배양 플랫폼 SPOT의 재현 가능한 제조 방법을. 자동화된 액체 처리 시스템을 활용하여 약물 스크리닝 워크플로우와 질병 모델링 연구의 효율성을 높입니다.

고처리량 스캐폴드 기반 배양 플랫폼으로서의 SPOT의 재현 가능한 제조

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