마우스 양측 신림프절출술

우리는 신장 림프절에서 신장으로, 그리고 배액되는 림프절로의 신장 항원이 전달되는 과정을 연구합니다. 우리의 수술적 접근법은 신장 림프절을 선택적으로 파괴하면서도 다른 모든 림프절은 온전하게 유지할 수 있다는 독특한 장점을 가지며, 장기 생존 모델에서 잘 견딜 수 있습니다. 이 모델이 개발되었으니, 신림프절과 면역 반응의 기여, 그리고 이 림프절 제거가 면역 관련 신장 손상에 어떻게 기여하는지 탐구할 수 있습니다.

먼저 마취된 동물을 수술대에 올려놓고 연고를 바릅니다. 테이프를 사용해 동물의 왼팔은 위 방향으로, 꼬리는 아래쪽으로 고정하여 편안하지만 길게 뻗은 자세를 만듭니다. 털을 밀고 수술 부위를 세 번 소독하세요.

발가락 꼬집기로 마취 깊이를 확인한 후, 비장 바로 아래 피부를 관통하여 마지막 갈비뼈보다 약 1센티미터 아래 1센티미터 비스듬이 절개합니다. 둔기 해리를 사용해 복부와 흉벽에서 피부를 분리하고 복부 안에 비장이 있음을 확인한다. 그 후 비장 바로 아래쪽 복벽 근육을 1센티미터 절개하여 복강 안으로 들어가세요.

왼쪽 신장은 비장 바로 아래 복부 후벽을 따라 위치한 매끄러운 기관으로 식별하세요. 두 개의 각진 겸자를 사용해 왼쪽 신장 뒤쪽을 무딘 채로 해리하여 후복막에 접근하고, 왼쪽 신장을 부드럽게 전내측 방향으로 반사합니다. 신장 뒤쪽, 신장 혈관 위에 위치한 왼쪽 신림프절을 감싸는 지방 조직 패드를 찾아보세요.

부신은 상부에 위치하고, 대동맥은 후방에, 소뇌는 전내측에 위치하며, 이를 피하세요. 가늘게 끝이 있는 겸자를 사용해 림프절 캡슐 주변을 둔하게 해부하여 인접한 혈관과 분리하고, 각도를 둔 겸자로 부드러운 반대 장력을 제공합니다. 가늘게 뻗은 직선 겸자를 사용해 림프절을 위쪽으로 당기세요.

그 다음 미세 가위로 후내측 부착물을 날카롭게 잘라냅니다. 지혈 여부를 확인하기 위해 해당 부위를 검사하세요. 다음으로, 신장을 원래 해부학적 위치로 되돌려 놓습니다.

복벽을 닫은 후 6-0 모노필라멘트 폴리프로필렌 봉합사로 돌진으로 피부를 봉합하세요. 멸균 수술용 접착제를 발라서 상처를 봉합하세요. 신림프절 식별을 개선하기 위해 신림프절 절제술 전에 양쪽 뒷발 패드에 10에서 20마이크로리터 정도의 멸균되고 여과된 5% 에반스 블루 염료를 PBS에 주입할 수 있습니다.

주사 후 5분 이내에 염료는 장골림프관을 따라 배액을 통해 신림프절에 도달합니다. 동물을 왼쪽 측면 디큐비투스 위치로 다시 위치시키고, 왼쪽은 아래를 향하게 합니다. 테이프를 사용해 동물의 오른팔은 위 방향으로, 꼬리는 아래쪽으로 고정하여 편안하지만 길게 뻗은 자세를 유지하세요.

이제 마지막 갈비뼈 바로 아래에 1센티미터 비스듬한 피부 절개를 하는데, 왼쪽보다 약간 위쪽에 위치시킵니다. 둔기 해리를 사용해 복부와 흉벽에서 피부를 분리합니다. 복벽 근육을 따라 1센티미터 절개를 하여 복강에 접근합니다.

오른쪽 신장을 확인하세요. 이 신장은 복벽 뒤쪽을 따라 간 바로 아래에 위치한 매끄러운 기관입니다. 각진 겸자 두 개를 사용해 오른쪽 신장 뒤쪽을 무딘 박리하여 후복막 공간에 진입하고 오른쪽 신장을 전내측 방향으로 반사합니다. 신장 뒤쪽, 신장 혈관 위에 위치한 오른쪽 신장 림프절을 둘러싼 지방 조직 패드를 확인하세요.

림프절보다 위에 위치한 부신을 확인하고 피하세요. 이제 가늘게 잘린 겸자를 사용해 림프절 캡슐을 무딘 상태로 해부하여 주변 혈관과 분리하고, 각도를 둔 겸자로 부드럽게 반대 견인합니다. 그 후 끝이 가는 직선 겸자로 림프절을 위쪽으로 당기고, 후정측 부착부를 미세 가위로 날카롭게 절단합니다.

지혈 여부를 확인하기 위해 부위를 점검하세요. 마지막으로 오른쪽 신장을 해부학적 위치로 되돌립니다. 복벽과 피부를 6-0 모노필라멘트 폴리프로필렌 봉합사로 두 겹으로 봉합한 후 절개 부위에 멸균 수술용 접착제를 바릅니다.

유세포검사는 5개의 좌측 및 5개 우측 신림프절 절제술 샘플에서 림프절 적출이 성공적으로 확인되었으며, 각각 50% 이상의 CD45 양성 생세포를 보였으며, 이는 내장 지방 대조군의 2% 미만과 비교됩니다. CD45 양성 세포의 정량 분석 결과, 좌우 신림프절개 샘플 간에 내장 지방 조직 간에 매우 유의미한 차이가 있었으나, 좌우 세포 간에는 유의미한 차이가 없었습니다.