Hippophae rhamnoides subsp. sinensis와 Hippophae gyantsensis의 다당류 함량 및 항산화 활성에 관한 비교 연구

본 연구는 Hippophae rhamnoides sub. sinensis와 Hippophae gyantsensis의 다당류 함량과 항산화 활성을 비교하여 차이점을 밝혔다. 이 연구는 방법론적으로 건전하며 다당류 특성의 종별 차이에 관한 문헌의 격차를 해결합니다.

이 연구의 결과는 품질 평가 및 잠재적인 제약 응용 분야에 중요합니다. 시작하려면 바다 갈매 나무속 샘플 분말 5g을 250밀리리터 둥근 바닥 플라스크에 옮깁니다. 그런 다음 무수 에탄올 50ml를 넣고 섭씨 25도의 실온에서 24시간 동안 담가둡니다.

다음날 Buchner 깔때기를 사용하여 담근 샘플 분말을 여과하여 필터 잔류물을 얻습니다. 필터 잔여물을 50밀리리터의 탈이온수로 세 번 세척합니다. 이제 탈지된 필터 잔류물을 건조된 250밀리리터 둥근 바닥 플라스크에 옮깁니다.

150밀리리터의 탈이온수를 밀리리터당 1-30g의 고체 대 액체 비율로 첨가합니다. 80°C의 수조에서 2시간 동안 환류 추출을 2회 수행합니다. 그런 다음 회전식 증발기를 사용하여 추출물을 농축합니다.

나중에 사용할 수 있도록 농축된 용액을 섭씨 4도의 냉장고에 보관하십시오. 그런 다음 Sevag 시약을 조다당류 용액에 1:4 부피 비율로 첨가하고 자기 교반기에 놓습니다. 그런 다음 혼합물을 50밀리리터 원심분리기 튜브로 옮깁니다.

현탁액을 4, 000 g에서 15분 동안 원심분리하고 상청액을 수집합니다. 단백질 제거 후 다당류 추출물을 농축하려면 무수 에탄올을 1:3의 부피비로 첨가하여 다당류를 침전시킵니다. 혼합물을 섭씨 4도에서 밤새 놓습니다.

다음날 에탄올의 상층을 제거합니다. 혼합물을 50밀리리터 원심분리기 튜브로 옮기고 이전과 같이 원심분리합니다. 침전물을 동결 건조하여 총 다당류를 얻습니다.

페놀 3g을 갈색 부피 플라스크에 옮깁니다. 페놀을 녹이기 위해 50밀리리터의 탈이온수를 첨가합니다. 균질해질 때까지 흔든 다음 나중에 사용할 수 있도록 플라스크에 라벨을 붙이고 보관하십시오.

다음으로, 무수 포도당 10mg을 10밀리리터 부피 플라스크에 옮깁니다. 탈이온수를 넣고 혼합물을 완전히 흔듭니다. 그런 다음 플라스크에 라벨을 붙입니다.

테스트 샘플 용액을 준비하기 위해 동결 건조 바다 갈매 나무속 다당류 5mg을 부피 플라스크에 무게를 잰다. 탈이온수를 첨가하여 각각의 최종 부피를 50밀리리터로 만듭니다. 완전히 용해될 때까지 각 혼합물을 20분 동안 초음파 처리합니다.

표준 포도당 용액을 탈이온수로 밀리리터당 0.1mg으로 희석합니다. 그런 다음 마이크로피펫을 사용하여 200, 300, 400, 500, 600 및 700마이크로리터를 6개의 깨끗한 시험관으로 옮깁니다. 순수한 물을 첨가하여 각각의 총 부피를 1밀리리터로 만들고 각 용액을 부드럽게 혼합하여 균일하게 희석되도록 합니다.

각 시험관에 6% 페놀 용액 1밀리리터와 황산 5밀리리터를 넣고 잘 섞는다. 샘플을 큐벳으로 옮깁니다. 순수한 물을 블랭크로 사용하고 UV 가시광선 분광 광도계를 사용하여 490나노미터에서 흡광도를 3회 반복하여 측정합니다.

정밀도 테스트를 위해 테스트 용액을 준비하십시오. 페놀-황산 비색법을 수행합니다. 흡광도를 결정하고 6회 반복하여 상대 표준 편차를 계산합니다.

안정성 테스트를 위해 테스트 용액을 준비하십시오. 준비 후 0시간, 2시간, 4시간, 6시간, 8시간, 10시간에 색도를 수행합니다. 상대 표준 편차를 계산하기 위해 앞서 언급한 시점에서 흡광도를 결정합니다.

반복성 테스트를 위해 샘플의 6개의 병렬 반복실험을 준비합니다. 페놀-황산 비색법을 수행하고 확립된 절차에 따라 흡광도를 결정합니다. 복구 테스트를 수행하려면 테스트 용액의 9개의 병렬 반복실험을 준비합니다.

총 다당류 함량의 80, 100 및 120%에 해당하는 기준 부피를 추가합니다. 그런 다음 페놀-황산 비색법을 수행합니다. 함량 측정을 위해 샘플 용액을 준비하십시오.

확립된 방법에 따라 페놀-황산 비색을 수행합니다. 그런 다음 흡광도를 결정합니다. 빈 50밀리리터 부피 플라스크에 2.7mg의 DPPH를 담습니다.

DPPH를 용해시키기 위해 무수 에탄올 50밀리리터를 첨가하고 원액을 준비합니다. 다음으로, 5mg의 비타민 C를 10ml의 탈이온수에 녹여 ml리리터당 0.5mg의 용액을 준비합니다. 이 용액을 연속적으로 희석하여 비타민 C 테스트 용액을 준비합니다.

이제 각 산자나무속 다당류 샘플 5mg을 탈이온수 10밀리리터에 녹여 밀리리터당 0.5밀리그램의 용액을 준비합니다. 이러한 용액을 연속적으로 희석하여 테스트 농도를 얻습니다. DPPH 용액을 기질로 사용하여 96웰 플레이트에서 테스트 그룹을 준비합니다.

음성 대조군 A0에 대해 150마이크로리터의 물과 50마이크로리터의 DPPH를 추가합니다. 샘플 그룹 A1에 대해 150마이크로리터의 샘플 또는 비타민 C 용액과 50마이크로리터의 DPPH를 추가합니다. 샘플 대조군 A2의 경우 샘플 150마이크로리터와 무수 에탄올 50마이크로리터를 추가합니다. 어둠 속에서 30분 동안 반응을 진행합니다. 그런 다음 517나노미터에서 흡광도를 측정합니다.

포도당의 표준 곡선은 밀리리터당 0.02에서 0.07밀리그램 범위에서 흡광도와 농도 사이에 강한 선형 관계를 보여주었습니다. Hippophae gyantsensis의 평균 다당류 수확량은 Hippophae rhamnoides 아종 sinensis의 평균 다당류 수확량보다 유의하게 높았습니다. 정밀도 테스트는 6번의 측정에서 흡광도의 변동이 최소화되었으며 RSD는 0.21%로 높은 기기 정밀도를 나타냅니다.

안정성 테스트 결과 흡광도 값이 10시간 동안 일관되게 유지되었으며 RSD 값은 0.45%로 샘플 용액 안정성을 확인했습니다. 반복성 테스트는 RSD가 0.5%인 6회 반복에 걸쳐 일관된 흡광도 값을 생성하여 분석법의 반복성을 검증했습니다. 포도당 함량에 대한 회수 실험은 평균 99.18%의 회수율을 얻어 방법의 정확성을 확인했습니다.

Hippophae rhamnoides 아종 sinensis의 평균 다당류 함량은 Hippophae gyantsensis보다 유의하게 높았습니다. Hippophae gyantsensis는 테스트된 모든 농도에서 Hippophae rhamnoides 아종 sinensis보다 약간 더 높은 항산화 활성을 나타냈습니다. 밀리리터당 0.5밀리그램에서 Hippophae gyantsensis의 DPPH 제거율은 81.93%에 도달했으며 Hippophae rhamnoides 아종 sinensis는 75.17%에 도달했습니다