Name: 인간 유도만능줄기세포에서 섬유아세포 성장 인자 신호 파괴의 실시간 모니터링에 기반한 발달 독성 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 45 s
Description: 학습하세요 인간 유도만능줄기세포에서 FGF/SRF 신호 파괴를 실시간 모니터링하여 발달 독성을 분석하는 방법을. 이 검정법은 동물 실험 없이 기형 유발 물질을 정확하게 평가할 수 있는 신뢰할 수 있는 지표를 제공합니다.

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<ol><li>Gilbert-Barness, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Teratogenic+causes+of+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Clin+Lab+Sci%22%5BJournal%5D)">Teratogenic causes of malformations.</a> Ann Clin Lab Sci. 40 (2), 99-114 (2010).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>1.5 mL 마이크로 원심분리관</td><td>패스트진</td><td>FG-MCT015C</td><td>시험 화학 준비</td></tr><tr><td>15mL 원심분리관</td><td>비올라모</td><td>1-3500-21</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>8스트립 PCR 튜브</td><td>왓슨</td><td>137-333C</td><td>시험 화학 준비</td></tr><tr><td>96 웰 화이트/클리어 바닥판, TC 표면</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>165306</td><td>세포 배양 및 발광 측정</td></tr><tr><td>검은색 마이크로플레이트 플랫 바텀 96웰</td><td>아소네</td><td>3-3321-04</td><td>세포독성 검사에서 발광 측정을 위한</td></tr><tr><td>숨 쉬기 좀 더 편하게</td><td>도호</td><td>BERM-2000</td><td>가스 투과성 밀봉막</td></tr><tr><td>셀타이터-글로우 발광 세포 생존 분석</td><td>프로메가</td><td>G7572</td><td>세포독성 검사</td></tr><tr><td>원심분리기 5702 R</td><td>에펜도르프</td><td></td><td>원심 분리</td></tr><tr><td>클립팁 300, 필터 처리, 멸균, 진열대</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>94420513</td><td></td></tr><tr><td>클립팁 50, 필터 처리, 멸균, 랙</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>94420253</td><td></td></tr><tr><td>Countess 3 FL 자동 셀 카운터</td><td>인비트로젠</td><td></td><td>세포 세기</td></tr><tr><td>백작부인 셀 계수실 슬라이드</td><td>인비트로젠</td><td>C10312</td><td>세포 세기</td></tr><tr><td>컬처 슈어 DMSO&nbsp;</td><td>후지필름 와코</td><td>031-24051</td><td>화학물질용 용매</td></tr><tr><td>컬처슈어 Y-27632</td><td>후지필름 와코</td><td>036-24023</td><td>iPSC 시딩을 위한 ROCK 억제제</td></tr><tr><td>DMEM/F12 HEPES, 페놀 레드 없음</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>11039-021</td><td>iPS 세포 배양용 코팅</td></tr><tr><td>F1-클립팁 멀티채널 피펫, 30에서 300 및 마이크로; L</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>4661180N</td><td></td></tr><tr><td>F1-ClipTip 멀티채널 피펫, 5에서 50 및 마이크로; L</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>4661160N</td><td></td></tr><tr><td>필터 칩</td><td>왓슨</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Geltrex LDEV 자유 저축 성장인자 기저막 기질</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>A1413202</td><td>iPS 세포 배양용 코팅</td></tr><tr><td>히에나이 매트 01R</td><td>코스모 바이오</td><td>HMAT01R</td><td>세포 배양 작업 중 판 온도 안정성 유지를 위해</td></tr><tr><td>히에나이 튜브 워머 GX01</td><td>코스모 바이오</td><td>TWGX013</td><td>실험 중에 중간 온도를 따뜻하게 유지하기 위해</td></tr><tr><td>인간 열 안정 bFGF 재조합 단백질</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>PHG0367</td><td>리포터 분석을 위한 FGF 자극</td></tr><tr><td>인간 유도 다능성 줄기세포(iPS)</td><td>201B7 (RCB Cat# HPS0063, RRID: CVCL_A324)</td><td>리켄 BRC 셀 뱅크</td><td></td></tr><tr><td>마이크로플레이트 셰이커</td><td>타이텍</td><td>0089532-000</td><td>세포 적도 검사를 위한 판 흔들기</td></tr><tr><td>멀티플레이트 리더</td><td>퍼킨엘머</td><td>ARVO X4</td><td>루미네세기 측정</td></tr><tr><td>나노글로 엔듀라진 생세포 기질</td><td>프로메가</td><td>N2571</td><td>발광 기질</td></tr><tr><td>PBS (-)&nbsp;</td><td>후지필름 와코</td><td>166-23555</td><td>세포 문화</td></tr><tr><td>파라필림</td><td>AS 원</td><td>65-1681-93</td><td>도금 도장 보관</td></tr><tr><td>피페토</td><td></td><td>에펜도르프</td><td></td></tr><tr><td>WSL-1563 크로노스HT</td><td>ATTO</td><td>3510140</td><td>실시간 발광 측정 시스템;</td></tr><tr><td>저수지</td><td>BMBio</td><td>BM-0850-1</td><td></td></tr><tr><td>STEMdif APEL2 미디엄 &nbsp;</td><td>스템셀 테크놀로지</td><td>ST-05275</td><td>분석용 매체</td></tr><tr><td>스템플렉스 미디엄</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>A3349401</td><td>유지 매체</td></tr><tr><td>멸균수, 엔도톡신 없는 상태</td><td>후지필름 와코</td><td>196-15645</td><td>iPS 세포 배양을 위한 습도 조절</td></tr><tr><td>조직 배양 플레이트 VTC-P6</td><td>비올라모</td><td>2-8588-01</td><td>세포 문화</td></tr><tr><td>트라이플 셀렉트 효소(1X), 페놀 레드 없음</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>12563011</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>발프로산</td><td>후지필름 와코</td><td>227-01071</td><td>시험 화학물질</td></tr></tbody></table>

인간 유도만능줄기세포에서 섬유아세포 성장 인자 신호 파괴의 실시간 모니터링에 기반한 발달 독성 분석

Developmental Toxicity Assay Based on Real-Time Monitoring of Fibroblast Growth Factor Signal Disruption in Human Induced Pluripotent Stem Cells

우리의 경험에 따르면 세포 형태는 분석이 올바르게 수행되었는지 여부를 결정하는 데 유용합니다. 그림 2A 는 화학 물질 노출 직전과 직후의 세포의 일반적인 공초점 현미경 이미지를 보여줍니다. 분석이 끝나면 우물의 거의 전체 표면이 세포로 덮여 있습니다. 그림 2B 는 살아있는/죽은 세포 염색의 이미지를 보여줍니다. 요오드화 프로피듐(PI)으로 염색된 죽은 세포의 수는 화학 물질에 노출된 후 증가합니다. 그러나 세포 생존율은 최소 50%이며 거의 모든 세포가 칼세인-AM으로 염색됩니다.
표 1에는 이전 연구 7,8에서 사용된 테스트 화학 물질이 나열되어 있습니다. 이러한 연구는 인간 iPS 세포에서 FGF 신호의 파괴를 기반으로 Devtox 화학 물질을 향상된 정확도로 구별할 수 있음을 보여줍니다. 주요 발견은 시그널링 활동이 시간이 지남에 따라 동적으로 변하기 때문에 시그널링 활동을 지속적으로 모니터링하는 것이 중요하다는 것입니다. 실시간 발광 측정 시스템을 사용하면 더 적은 측정 노동력으로 훨씬 더 높은 시간 분해능을 얻을 수 있습니다. 여기에서는 실시간 모니터링 시스템을 사용하는 프로토콜에 대해 설명합니다.
그림 3A 는 테스트 화학 물질 없이 동일한 조건에서 6개의 반복 웰에서 48시간 동안의 발광 강도 변화를 보여줍니다. 6개의 곡선이 거의 정렬되어 있어 웰 간 재현성이 우수함을 나타냅니다. 이전 연구에서 24시간 수동 측정에서 명확하게 식별되지는 않았지만 FGF 리간드 추가 직후의 초기 피크와 약 24시간의 두 번째 피크인 두 개의 뚜렷한 피크가 48시간 실시간 측정에서 나타납니다. 그림 3B 는 잘 알려진 발달 독성 물질인 발프로산(VPA)에 노출되었을 때의 발광 강도의 변화를 보여줍니다. VPA는 신경관, 심장 및 사지에 결함을 유발하는 히스톤 탈아세틸라제 억제제입니다¹¹. VPA는 농도 의존적 방식으로 FGF 신호 전달을 방해합니다. 자동화된 실시간 측정 시스템은 수동 측정보다 신호 역학을 더 정확하게 캡처했습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68910/68910fig1v2.jpg"> 
그림 1: FGF/SRF 신호 중단 분석. (A) FGF/SRF 신호 리포터 세포를 생성하기 위한 인간 iPS 세포의 유전 공학. 혈청 반응 요소의 하류에 Nluc, 표적 녹인을 위한 상동 암, 인간 포스포글리세레이트 키나제 프로모터의 제어 하에 퓨로마이신 내성 유전자를 포함하는 플라스미드를 구성했습니다. 퓨로마이신 선택 후, SRE-Nluc 리포터 세포가 확립되었습니다. (B) 분석 일정. 리포터 세포를 96웰 플레이트에 파종하고 전체 표면을 덮도록 4일 동안 성장시켰습니다. 발광 기판과 시험 화학물질은 측정을 시작하기 3시간 및 1시간 전에 각각 첨가되었습니다. FGF 리간드 첨가 시간을 0시간으로 설정하고, 이후 48시간 동안 발광 강도를 지속적으로 측정하였다. ( C) 데이터 분석. 신호 역학은 테스트 화학 물질에 노출된 세포와 노출되지 않은 세포에서 기록되고 화학 물질로 인한 신호 중단의 척도로 곡선 사이의 면적을 추정하기 위해 차량 제어에 정규화되었습니다. 서로 다른 농도에서 각 화학 물질에 대한 ABC 값을 얻고 그 합계를 계산했습니다. 임계값을 결정하기 위해 테스트된 모든 알려진 발달 독성 물질을 사용하여 수신자 작동 특성 곡선 분석을 수행했습니다. 약어: iPS = 유도만능줄기세포; RLU = 상대 조명 단위; AUC = 곡선 아래 면적; FGF = 섬유아세포 성장 인자; SRF = 혈청 반응 인자; SRE = 혈청 반응 요소; HA = 상동 팔; L = 왼쪽; R = 오른쪽; PuroR = 퓨로마이신 내성 유전자; hPGK = 인간 포스포글리세레이트 키나아제; Nluc = 나노룩 루시페라아제; ROC = 수신기 작동 특성; ABC = 곡선 사이의 면적. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68910/68910fig1v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68910/68910fig2.jpg"> 
그림 2: 세포 형태 및 살아있는/죽은 세포 염색. (A) 시험 화학 물질에 노출되기 전(4일) 및 후(6일) 세포의 공초점 현미경 이미지. 테스트 후 우물의 거의 전체 표면을 덮고 있는 나머지 세포는 성공적인 테스트 실행의 지표입니다. 분석이 끝날 때 거의 완전한 유정 커버리지가 성공적인 실행을 나타냅니다. (B) 시험 화학 물질에 노출되기 전과 후의 살아있는/죽은 세포 염색. 살아있는 세포는 Calcein-AM으로 녹색으로 염색되었고, 죽은 세포는 요오드화 프로피듐(PI)으로 빨간색으로 염색되었습니다. 칼세인-AM(녹색)으로 염색하고 죽은 세포를 요오드화 프로피듐(PI, 빨간색)으로 염색했습니다. 죽은 세포의 비율은 전체 세포의 50%&lt; 적어야 합니다. 스케일 바 = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68910/68910fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68910/68910fig3.jpg"> 
그림 3: 발광 강도 역학의 일반적인 예. (A) 시간 경과 발광은 실시간 발광 측정 시스템을 사용하여 측정된 FGF 리간드 자극 후 발주의 시간 경과를 변화시킵니다. 발광 강도는 48시간 동안 22분마다 모니터링되었습니다. 6개의 색상 선은 서로 다른 웰의 신호를 나타냅니다. (B) 발프로산을 사용한 수동 및 실시간 발광 측정의 비교. 두 가지 측정 방법 모두에서 신호 중단이 관찰된 반면, 실시간 모니터링은 두 번째 피크에서 향상된 신호를 보다 명확하게 포착했습니다. 약어: RLU = 상대 조명 단위; VPA = 발프로산; FGF = 섬유아세포 성장 인자. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68910/68910fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68910/68910_Table%201.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<table border="1" fo:font-size="8px" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>테스트 화학 물질</td>
			<td>약어</td>
			<td>카스 아니오.</td>
			<td>동물 연구 (이전 연구)</td>
			<td>체외 연구 (본 연구)</td>
			<td>ABC 값의 합계</td>
			<td>최대 집중 (μg/mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>올트랜스-레티노산</td>
			<td>아트라</td>
			<td>302-79-4</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>65.9</td>
			<td>0.0100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>하이드록시우레아</td>
			<td>후</td>
			<td>127-07-1</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>63.3</td>
			<td>149</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>메톡시아세트산</td>
			<td>마아</td>
			<td>625-45-6</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>225</td>
			<td>683</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>메틸 수은 염화물</td>
			<td>메Hg</td>
			<td>115-09-3</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>77.7</td>
			<td>1.20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>메토트렉세이트 하이드레이트</td>
			<td>MTX</td>
			<td>133073-73-1</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>80.5</td>
			<td>5.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>살리실산나트륨</td>
			<td>SA</td>
			<td>54-21-7</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>38.7</td>
			<td>666</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>발프로산</td>
			<td>VPA</td>
			<td>99-66-1</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>63.3</td>
			<td>100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-아미노니코틴아미드</td>
			<td>6-AN</td>
			<td>329-89-5</td>
			<td>P</td>
			<td>N</td>
			<td>24.9</td>
			<td>1.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>붕산</td>
			<td>바</td>
			<td>10043-35-3</td>
			<td>P</td>
			<td>N</td>
			<td>24.2</td>
			<td>250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-브로모-2'-데옥시우리딘</td>
			<td>브르듀</td>
			<td>59-14-3</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>83.9</td>
			<td>50.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5,5-디메틸-2,4-옥사졸리딘디온</td>
			<td>DMO</td>
			<td>695-53-4</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>50.3</td>
			<td>840</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>리튬 클로라이드</td>
			<td>LiCl</td>
			<td>7447-41-8</td>
			<td>P</td>
			<td>N</td>
			<td>29.8</td>
			<td>250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-플루오로우라실</td>
			<td>5-FU</td>
			<td>51-21-8</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>92.4</td>
			<td>2.65</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>시클로포스파미드 일수화물</td>
			<td>CPA</td>
			<td>6055-19-2</td>
			<td>P</td>
			<td>N</td>
			<td>19.1</td>
			<td>400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>이마티닙 메실레이트</td>
			<td>IMA</td>
			<td>220127-57-1</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>42.4</td>
			<td>12.5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>레날리도마이드</td>
			<td>렌</td>
			<td>191732-72-6</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>94.7</td>
			<td>35.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>포말리도마이드</td>
			<td>폼</td>
			<td>19171-19-8</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>50.9</td>
			<td>2.50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>탈리도마이드</td>
			<td>그쪽으로</td>
			<td>50-35-1</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>53.3</td>
			<td>12.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>아크릴아미드</td>
			<td>AcA</td>
			<td>79-06-01</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>37.1</td>
			<td>454</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-장뇌</td>
			<td>캠</td>
			<td>464-49-3</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>27.5</td>
			<td>50.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>디펜히드라민 염산염</td>
			<td>DHM</td>
			<td>147-24-0</td>
			<td>N</td>
			<td>P</td>
			<td>68.2</td>
			<td>262</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>디메틸 프탈레이트</td>
			<td>DMP</td>
			<td>131-11-3</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>24.4</td>
			<td>100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>페니실린 G 나트륨염</td>
			<td>펭</td>
			<td>69-57-8</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>22.1</td>
			<td>1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>사카린 나트륨</td>
			<td>SAC</td>
			<td>82385-42-0</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>34.0</td>
			<td>1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>아세트아미노펜</td>
			<td>APAP</td>
			<td>103-90-2</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>22.3</td>
			<td>20.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>아목시실린 삼수화물</td>
			<td>AMX</td>
			<td>61336-70-7</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>28.4</td>
			<td>25.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>시메티딘</td>
			<td>센티미터</td>
			<td>51481-61-9</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>25.3</td>
			<td>30.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>에리스로마이신</td>
			<td>에리</td>
			<td>114-07-8</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>20.0</td>
			<td>15.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>히드로클로로티아지드</td>
			<td>HCTZ</td>
			<td>58-93-5</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>21.9</td>
			<td>20.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>설파살라진</td>
			<td>SSZ</td>
			<td>599-79-1</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>30.8</td>
			<td>100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>화학</td>
			<td>AUC</td>
			<td>문지방</td>
			<td>민감</td>
			<td>특이성</td>
			<td>정밀</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30가지 물질</td>
			<td>0.819</td>
			<td>37.9</td>
			<td>0.778</td>
			<td>0.917</td>
			<td>0.833</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 1: 동물 실험 내에서 분류된 Devtox 및 비Devtox 화학 물질 및 FGF 신호 중단 유무에 관계없이 추정된 결과. 약어: P = 양성(Devtox); N = 음성(비 Devtox).

Developmental toxicity (Devtox) is typically evaluated in animal models. However, there are challenges in ensuring accuracy, such as false negatives due ...

developmental-toxicity-assay-based-on-real-time-monitoring-fibroblast

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

우리는 인간의 요인 Oct4, Sox2, Nanog, 그리고 Lin28의 lentivirus - 중재 전송을 사용하여 인간의 체세포에서 유도된 pluripotent 줄기 세포의 생성에 대한 프로토콜을 보여줍니다. Pluripotency는 형태학 및 배아 줄기 (ES) 세포 특정 마커의 존재에 의해 확인되었다.

Stemgent 인간 TF의 Lentivirus와 인간의 섬유아 세포를 프로그래밍하여 유도 Pluripotent 줄기 세포의 생성 세트

우리는 함께 retroviral Oct3 / 4, Sox2, Klf4과 c-myc (OSKM)를 인코딩 벡터, 라이브 염색법에 의해 정확하게 다시 프로그램 hiPSC의 신분을 이용하여 인간의 유도된 pluripotent 줄기 세포 (hiPSC) Tra-로 인간의 체세포의 효율적인 언어학 재활을위한 프로토콜을 제시 1-81 항체.

인간 유도 Pluripotent 줄기 세포의 선택 및 분리 식민지는 성인 섬유아 세포에서 다시 프로그램

마우스 배아의 섬유아 세포 (MEFs)의 품질 등 CF-1과 같은 마우스의 오른쪽 변형에 의해 결정됩니다. 이들로부터 얻은 Pluripotency - 지원 MEFs 및 에어컨 매체 (CM) 공동 operatively 자기 갱신과 pluripotency를 유지에 Activin / 결절 및 FGF 경로에 필요한 Activin, 괴물과 Tgfβ1의 최적 농도를 포함해야합니다.

Culturing 인간의 배아와 유도 Pluripotent 줄기 세포에 적합 마우스 배아 Fibroblast 세포의 준비

프로토콜은 인간 배아 줄기 세포 및 사체 연구에 기초하여 두 개의 시험관 발생 독성 시험 시스템 (UKK 및 UKN1)를 설명한다. 테스트 시스템은 인간 발생 독성 위험을 예측하고, 동물 연구, 비용 및 화학 물질의 안전성 검사에 필요한 시간을 단축에 기여할 수있다.

화학 물질 안전 검사 및 시스템 생물학 데이터 생성을 위해 발생 독성 시험 법을 바탕으로 인간 다 능성 줄기 세포

이 프로토콜은 추가적인 외인성 보충 또는 hPSC 특이적 합성 하층(hPSC) 없이 젤라틴으로 코팅된 접시에 담긴 인간 태반에서 유래한 조건화된 배지만을 사용하여 인간 만능 줄기세포(hPSC)를 증식시키는 간단하고 효율적인 방법을 제공합니다.

소설 문화 모델은 인간 다 능성에 대한 태반 에어컨 미디어에서 젤라틴에 세포 전파 줄기

인간 유도 다 능성 줄기 세포 (hiPSCs)는 약물 및 화학 스크리닝 및 신경 독성을 포함한 독성 시험을위한 새로운 시험 관내 모델 개발을위한 강력한 도구로 간주됩니다. 여기, hiPSCs의 뉴런과 glia 로의 차별화에 대한 자세한 프로토콜이 설명되어 있습니다.

인간 독성 Pluripotent 줄기 세포의 신경 독성 테스트를위한 뉴런과 Glia의 혼합 문화로의 분화를위한 프로토콜

여기에 제시 된 프로토콜 간 질환의 치료에 대 한 작은 분자를 식별 하기 위한 플랫폼을 설명 합니다. 단계별 설명 Ipsc 96 잘 접시에서 hepatocyte 특성을 가진 세포로 분화 하 고 작은 분자에 대 한 잠재적인 치료 활동 화면 셀을 사용 하는 방법을 자세히 제시 합니다.

약물 발견에 대 한 만능 줄기 세포 유래 Hepatocyte 같은 세포를 유도 하는 인간을 사용 하 여

여기 우리 재활 요인 인코딩 수정된 mRNAs를 사용 하 여 유도 만능 줄기 세포로 인간의 기본 섬유 아 세포를 재 설 정할 임상 관련, 높은 효율, 피더 무료 메서드를 설명 하 고 성숙한 예측에 관한-367/302 모방. 또한는 재활 효율성을 평가 하는 방법 클론 iPSC 식민지 확장 및 pluripotency 마커 TRA-1-60의 식을 확인 있습니다.

인간의 기본 섬유 아 세포의 유도 만능 줄기 세포로 재프로그래밍 RNA 기반

세포 재프로그래밍은 다능성 세포 상태를 조절하고 유지하는 주요 유전자의 도입을 요구합니다. 기술된 프로토콜은 바이러스/통합 방법 없이 인간 진피 섬유아세포로부터 유도된 만능 줄기 세포(iPSCs) 콜로니의 형성을 가능하게 하지만, 세포 방어 메커니즘을 감소시키는 면역 회피 인자와 결합된 비변형 RNA(NM-RNAs)를 사용한다.

비통합 방법을 사용하여 복부 피부에서 성인 인간 진피 섬유 아세포의 분리 및 유도 만능 줄기 세포의 생성

인간 유도 만능 줄기 세포 유래 심근 세포 (hiPSC-CM)는 약물 유도 심장 독성 스크리닝 및 질병 모델링을위한 유망한 시험관 내 모델로 부상했습니다. 여기에서는 hiPSC-CM의 수축성과 전기 생리학을 측정하기위한 프로토콜에 대해 자세히 설명합니다.

인간 유도 만능 줄기 세포 유래 심근 세포에 대한 미세 전극 어레이 및 패치 클램프 기록의 기술적 응용

인간 유도 만능 줄기 세포 유래 심근 세포(hiPSC-CM)는 전임상 심장 독성 스크리닝을 위해 동물을 사용하는 것에 대한 대안을 제공합니다. 전임상 독성 스크리닝에서 hiPSC-CM의 광범위한 채택에 대한 한계는 세포의 미성숙하고 태아와 유사한 표현형입니다. hiPSC-CM의 견고하고 신속한 성숙을 위한 프로토콜이 여기에 제시되어 있습니다.

성숙한 인간 유도 만능 줄기 세포 유래 심근 세포 단층을 사용한 고처리량 심장 독성 스크리닝

학습하세요 인간 유도만능줄기세포에서 FGF/SRF 신호 파괴를 실시간 모니터링하여 발달 독성을 분석하는 방법을. 이 검정법은 동물 실험 없이 기형 유발 물질을 정확하게 평가할 수 있는 신뢰할 수 있는 지표를 제공합니다.

인간 유도만능줄기세포에서 섬유아세포 성장 인자 신호 파괴의 실시간 모니터링에 기반한 발달 독성 분석

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