Name: 교세포섬유산성 단백질 및 그 질병 관련 변이체의 생화학적 분석에 대한 실험적 접근법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-28T14:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 2 s
Description: 배우세요 GFAP 및 돌연변이체의 생화학적 특성 분석 방법을 통해 알렉산더병의 메커니즘을 규명하고 치료 표적을 탐색하는 체계적인 실험 접근법을 확인하세요.

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<table><tbody><tr><td>30% 아크릴아마이드/Bis 용액 37.5:1</td><td>바이오라드</td><td>1610158</td><td></td></tr><tr><td>과황산암모늄(APS)</td><td>바이오라드</td><td>1610700</td><td></td></tr><tr><td>암피실린</td><td>USB</td><td>11259</td><td></td></tr><tr><td>항GFAP 항체</td><td>세포 신호 전달 기술</td><td>12389</td><td></td></tr><tr><td>항유비퀴틴 항체</td><td>밀리포어</td><td>ST 1200</td><td>클론 FK2</td></tr><tr><td>아반티 J-26S XP 원심분리기</td><td>벡맨</td><td></td><td></td></tr><tr><td>클로로암페니콜</td><td>USB</td><td>23660</td><td></td></tr><tr><td>CM-세프로즈</td><td>시티바</td><td>1707 1901</td><td></td></tr><tr><td>쿠매시 블루 염료</td><td>USB</td><td>32826</td><td></td></tr><tr><td>구리 격자</td><td>테드 펠라</td><td>01753-F</td><td></td></tr><tr><td>CS 150 NX 마이크로 울트라센트퓨지</td><td>히타치</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>둔스 균질화</td><td>휘튼</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>UR</td><td>DTT</td><td></td></tr><tr><td>대장균 BL21(DE3) pLysS 균주</td><td>애질런트</td><td></td><td></td></tr><tr><td>이지글로우</td><td>테드 펠라</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ECL 시약</td><td>퍼킨엘머</td><td>넬 105001</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>USB</td><td>15699</td><td></td></tr><tr><td>H2O2</td><td>시그마-올드리치</td><td>18312</td><td></td></tr><tr><td>HiRes S 칼럼</td><td>시티바</td><td>2927 5877</td><td></td></tr><tr><td>하이트랩 Q 칼럼</td><td>시티바</td><td>1711 5301</td><td></td></tr><tr><td>IPTG</td><td>UR</td><td>IPTG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>허니웰</td><td>12636</td><td></td></tr><tr><td>LB 미디엄 (LB 아가)</td><td>USB</td><td>75851</td><td></td></tr><tr><td>LB 미디엄 (LB 육수)</td><td>BD 디프코</td><td>244620</td><td></td></tr><tr><td>머캅토에탄올</td><td>시그마-올드리치</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>MES</td><td>시그마-올드리치</td><td>M8250</td><td></td></tr><tr><td>나클</td><td>허니웰</td><td>31434S</td><td></td></tr><tr><td>NGC 크로마토그래피 시스템</td><td>바이오래드</td><td></td><td></td></tr><tr><td>옵티마 XE-90 초심심분리기</td><td>벡맨</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>아크로스 오가닉스</td><td>215740050</td><td></td></tr><tr><td>폴리에틸레네이민</td><td>시그마-올드리치</td><td>P3143</td><td></td></tr><tr><td>로터</td><td>벡맨</td><td></td><td></td></tr><tr><td>S55S 로터</td><td>히타치</td><td></td><td></td></tr><tr><td>S80AT3 로터</td><td>히타치</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>USB</td><td>75819</td><td></td></tr><tr><td>SDS-페이지</td><td>바이오라드</td><td></td><td></td></tr><tr><td>StarBright Blue 520 염소 안티마우스 IgG&nbsp;</td><td>바이오라드</td><td>12005867</td><td></td></tr><tr><td>StarBright Blue 700 염소 안티토끼 IgG&nbsp;</td><td>바이오래드</td><td>12004161</td><td></td></tr><tr><td>자당</td><td>시그마-올드리치</td><td>S5391</td><td></td></tr><tr><td>테메드</td><td>USB</td><td>76320</td><td></td></tr><tr><td>투과 전자현미경 H-7700)</td><td>히타치</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>트리스</td><td>USB</td><td>75825</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>시그마-올드리치</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>우라닐 아세테이트</td><td>전자현미경 과학부;</td><td>22400</td><td></td></tr><tr><td>요소</td><td>허니웰</td><td>15604H</td><td></td></tr></tbody></table>

교세포섬유산성 단백질 및 그 질병 관련 변이체의 생화학적 분석에 대한 실험적 접근법

Experimental Approaches for Biochemical Analysis of Glial Fibrillary Acidic Protein and Its Disease-associated Variants

AxD를 유발하는 돌연변이가 GFAP 조립 특성에 미치는 영향을 조사하기 위해, 우리는 PET 기반 발현 시스템을 사용하여 박테리아에서 재조합 단백질을 생산했습니다. 우리는 WT GFAP를 예로 들어 GFAP를 발현하고 정제하는 프로토콜을 자세히 설명합니다. IPTG 유도(그림 1A, 레인 2) 후, GFAP는 포함체 준비(그림 1B)와 이온 교환 크로마토그래피(CM 컬럼(그림 1C, 레인 1)와 Q 컬럼(그림 1C, 레인 2, 3)을 이용한 3단계 과정을 통해 정제되었습니다.
정제된 재조합 GFAP는 투석을 통해 시험관 내에서 조립되었고, 우라닐 아세테이트로 음성 염색 후 전자현미경으로 시각화되었습니다. WT GFAP는 전형적인 10nm 필라멘트를 형성했으며(<str...

Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) is a key intermediate filament protein critical for maintaining the structural integrity and function of astrocytes ...

experimental-approaches-for-biochemical-analysis-glial-fibrillary

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

우리는 명확히 인간 대뇌 피질 homogenates, SDS - PAGE로 단백질 분리, 항원 검색 및 Aβ 펩타이드에 대한 항체와 immunoblotting의 준비를위한 기술을 설명합니다. 이 프로토콜을 사용하여, 우리는 지속적으로 알츠하이머의 병리 현상과 인간의 대뇌 피질 조직에서 monomeric 및 multimeric Aβ를 감지합니다.

인간의 두피 조직에서 Aβ Multimers의 SDS-PAGE/Immunoblot 감지는 항원 에피토프 검색을 사용 Homogenates

인간과 쥐의 뇌 조직을위한 요소 / 티오 / SDS 버퍼를 사용하는 일반적인 단백질 추출 프로토콜은 허용 2D-DIGE 미니 2DE의 면역 블롯에 의해 그들의 연속 특성에 의한 단백질의 indentification. 이 방법은 인간의 조직 검사 및 실험 모델에서 더 많은 재현성 및 신뢰성있는 결과를 얻기 위해 하나를 할 수 있습니다.

합의 뇌 유래 단백질, 2D-DIGE 미니 2DE 면역 블롯을 모두 사용하여 인간과 쥐과 뇌 프로테옴 연구를 위해 추출 프로토콜

바이오패닝 기술과 원자력 현미경을 사용하여 낮은 농도에서도 모든 생물학적 물질에 존재하는 질병 특이적 단백질 변이체에 대한 항체를 획득하는 음성 및 양성 바이오패닝 시스템을 만들었습니다.  우리는 근위축성 측삭 경화증(Amyotrophic Lateral Sclerosis)과 관련된 TDP-43 단백질 변이체에 대한 항체를 획득하는 데 성공했습니다.

루게릭 병에 TDP-43 변종 형태론 특정 시약의 분리에 대한 소설 원자 힘 현미경 기반 Biopanning

새로운 정량적 접근법을 제공하는 ELISA가 설명되었습니다. 이는 시누클레이노파시(synucleinopathy)의 형질전환 마우스 모델(M83)에서 질병 관련 α-시누클레인(αSD)을 특이적으로 검출하기 위해 인산화된 Ser129 αS 형태 또는 단백질의 C-말단 부분에 대한 여러 항체를 사용합니다.

인간 A53T를 과발현 형질 전환 마우스의 뇌에 강화 된 ELISA에 의한 질병 관련 α-synuclein의 검출은 α-synuclein의 돌연변이

여기에서는 사후 인간 뇌 조직에서 점점 더 불용성/응집된 알파-시누클레인(α-syn)을 분리하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 세제 강도가 증가하는 완충액과 고속 초원심분리 기술을 통해 병든 조직과 그렇지 않은 조직에서 α-syn 응집의 다양한 특성을 검사할 수 있습니다.

파킨슨 뇌에서, 수용성 알파 시누 클레인의 순차 추출

여기에 제시 된 분석 섬유 소 혈전 구조에 베타-아 밀 로이드의 효과 개별적으로 또는 조합에서 사용할 수 있는 두 가지 방법이 있습니다. 생체 외에서 섬유 소 혈전, 만드는 뒤에 병 탁도 및 스캐닝 전자 현미경 검사 법 방법 포함 된 프로토콜이입니다.

분광학 그리고 스캐닝 전자 현미경 검사 법에 의해 섬유 소 혈전 구조에 β 아 밀 로이드 유도 비정상의 분석

여기에서, 우리는 파킨슨 병및 파킨슨 병에 관여하는 알파 시누클레인의 질병 특정 형태 변이체의 식별을 허용하는 피부 생검 섹션에 자유 부동 간접 면역 형광 분석에 대한 프로토콜을 제시하고 말초 신경계.

자유 부동 면역 형광 분석에 의하여 절단 말초 신경 섬유에 있는 알파 Synuclein 응집체를 표적으로 하는

이 프로토콜은 뇌 기증 프로그램과 뇌의 적절한 특성을 통해 개별 뇌 노화 궤적을 추적하는 방법을 설명합니다. 두뇌 기증자는 연쇄 다차원 평가를 포함하여 장기 종방향 연구 결과에 관여합니다. 이 프로토콜에는 뇌 처리에 대한 자세한 설명과 정확한 진단 방법론이 포함되어 있습니다.

노화 뇌 수집, 처리 및 특성화를 위한 Abbiategrasso 브레인 뱅크 프로토콜

시냅스 전달에 필요한 세포하 이벤트를 시각화하기 위해 두 가지 관련 방법이 설명된다. 이들 프로토콜은 시험관내 배양된 뉴런의 라이브 세포 이미징을 사용하여 시냅스 전 칼슘 유입 및 시냅스 소포막 융합의 역학의 실시간 모니터링을 가능하게 한다.

근위축성 측삭 경화증 모델에서 시냅스 기능의 실시간 형광 측정

우리는 hSOD1G93A 쥐 모델에서 근 위축성 측삭 경화증의 병태 생리학에 대한 연구를 위해 세포 내Ca 2+의 타임 랩스 비디오 이미징을 위해 쥐 피질에서 신경교 세포, 성상 세포 및 미세 아교 세포의 1 차 배양을 준비하는 방법에 대한 프로토콜을 제시합니다.

쥐 성상 세포와 미세 아교 세포의 1 차 배양과 근 위축성 측삭 경화증 연구에서의 사용

질량 분광법 기반 프로테오믹 분석을 통한 이 생화학적 정제 방법은 아밀로이드 피브릴 코어의 강력한 특성화를 용이하게 하며, 이는 알츠하이머병 예방을 위한 표적의 식별을 가속화할 수 있다.

뇌에서 아밀로이드 피브릴 코어의 생화학 적 정제 및 프로테오믹 특성화

배우세요 GFAP 및 돌연변이체의 생화학적 특성 분석 방법을 통해 알렉산더병의 메커니즘을 규명하고 치료 표적을 탐색하는 체계적인 실험 접근법을 확인하세요.

교세포섬유산성 단백질 및 그 질병 관련 변이체의 생화학적 분석에 대한 실험적 접근법

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