Name: 수정된 스위스 롤 기법을 이용한 생쥐 위근층의 향상된 공간 지도 작성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 18 s
Description: 배우세요 수정된 스위스 롤 기법을 이용한 생쥐 위 전체 면역염색 방법으로 위 구조와 세포 구성을 공간 방향을 유지하며 시각화하는 기술입니다. 이 방법은 모든 위 영역을 동일한 조건에서 처리하여 실험의 신뢰성과 재현성을 높입니다.

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<ol><li>Chaudhry, S. R., Liman, M. N. P., Omole, A. E., Peterson, D. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChaudhry%2C+SR+%22Anatomy%2C+abdomen+and+pelvis%3A+Stomach%22">Anatomy, abdomen and pelvis: Stomach</a>. , StatPearls. (2025).</li>
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<li>Gao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-inducible+factor+1alpha+stabilization+restores+epigenetic+control+of+nitric+oxide+synthase+1+expression+and+reverses+gastroparesis+in+female+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-inducible factor 1alpha stabilization restores epigenetic control of nitric oxide synthase 1 expression and reverses gastroparesis in female diabetic mice.</a> Gastroenterology. 165 (6), 1458-1474 (2023).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>#5SF 겸자</td><td>파인 과학 도구</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민&nbsp;</td><td>시그마-올드리치</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>콜드비전 MC-LS LED 광원</td><td>쇼트</td><td>MC-LS</td><td></td></tr><tr><td>공초점 소프트웨어와 nbsp;</td><td>니콘</td><td>니콘 NIS-엘리먼스 이미징 소프트웨어</td><td></td></tr><tr><td>크라이오실 XYL</td><td>에프레디다</td><td>9312-4</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4', 6-디아미디노-2-페닐린돌, 딜락테이트)</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>해부 접시, 대형</td><td>리빙 시스템&nbsp; 악기 편성</td><td>SKU: DD-90</td><td></td></tr><tr><td>당나귀 안티-고트 AF647 pAb</td><td>라이프 테크놀로지</td><td>A21447</td><td>로트: 1739289 RRID:AB_2535864</td></tr><tr><td>당나귀 안티마우스 AF555 pAb</td><td>라이프 테크놀로지</td><td>A31570</td><td>로트: 1774719 RRID:AB_2536180</td></tr><tr><td>당나귀 안티-래빗 AF488 pAb</td><td>라이프 테크놀로지</td><td>A21206</td><td>로트: 2668665 RRID:AB_2535792</td></tr><tr><td>E-카다린 (1:400 희석)</td><td>BD 생명과학</td><td>610181</td><td>부지: 25510 RRID:AB_397580</td></tr><tr><td>이오신</td><td>ELITechGroup</td><td>$SS-071C</td><td></td></tr><tr><td>에폭시 코팅 겸자</td><td>파인 과학 도구</td><td>11210-10</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>시그마-올드리치</td><td>459828-4L</td><td></td></tr><tr><td>플렉스 튜브 1.5 mL</td><td>에펜도르프</td><td>22364111</td><td></td></tr><tr><td>거즈 스펀지</td><td>피셔사이언티브</td><td>22-362-178</td><td></td></tr><tr><td>경화된 파인 가위</td><td>파인 과학 도구</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>헤마톡실린</td><td>에프레디아</td><td>7211</td><td></td></tr><tr><td>KIT (0.2 & 마이크로; g/mL; 1:1000 희석)</td><td>R& D 시스템즈</td><td>AF1356</td><td>로트: IEO0217101 리드: AB_354750</td></tr><tr><td>렌즈 세정용 1온스 스프레이 병</td><td>니콘</td><td>77013066</td><td></td></tr><tr><td>현미경 커버 유리</td><td>피셔 사이언티브</td><td>12541016</td><td></td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>카디널헬스</td><td>M6133A</td><td></td></tr><tr><td>민분대 핀</td><td>파인 과학 도구</td><td>26002-20</td><td></td></tr><tr><td>MYH11 (1:400 희석)</td><td>생의학 기술</td><td>BT-562</td><td>RRID:AB_10013421</td></tr><tr><td>매니큐어</td><td>죄악 있는 색깔</td><td>7.33855E+11</td><td></td></tr><tr><td>바늘 30g x 1/2인치 & nbsp;</td><td>BD 생명과학</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>시그마-올드리치</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>페르소나 단일 엣지 블레이드</td><td>레이저 블레이드 컴퍼니</td><td>76247-652</td><td></td></tr><tr><td>ReadyProbes 마우스 간 IgG 차단 솔루션 (30x)</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>R37621</td><td>로트: 3226230</td></tr><tr><td>슬로우페이드 다이아몬드 안티페이드 마운턴트 (마운팅 미디어)</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>S36972</td><td></td></tr><tr><td>스테인트레이 10 슬라이드 스테인 시스템</td><td>소포트 사이언티픽</td><td>M918-2</td><td></td></tr><tr><td>입체 현미경 0.8x-5x</td><td>니콘</td><td>SMZ645</td><td></td></tr><tr><td>자로스&nbsp;</td><td>시그마-올드리치</td><td>S9378-1KG</td><td></td></tr><tr><td>서피스-앰프 X-100 (트라이톤 X)</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>28314</td><td></td></tr><tr><td>TMEM16A (ANO1: 1:400 희석)</td><td>앱캠</td><td>ab53212&nbsp;</td><td>로트: GP3295656-1 RRID: AB_883075</td></tr><tr><td>전송 피펫</td><td>팔콘</td><td>357575</td><td></td></tr><tr><td>TUBB3 (1:400 희석)</td><td>세포 신호 전달 기술</td><td>4466</td><td>부지: 5 RRID: AB_1904176</td></tr><tr><td>자일렌&nbsp;</td><td>피셔 사이언티브</td><td>X3P-1GAL</td><td>많이 206238</td></tr></tbody></table>

수정된 스위스 롤 기법을 이용한 생쥐 위근층의 향상된 공간 지도 작성

Enhanced Spatial Mapping of Mouse Gastric Muscle Layers Using a Modified Swiss Roll Technique

새로운 방법을 사용하면, 쥐 위스위스 롤은 위의 세 주요 부위인 기저, 혈체, 전부와 식도, 십이지장의 일부를 한 구역에 포함시켰습니다. 한 구역에 전체 위를 포함하면 포괄적인 지역 분석이 가능합니다(그림 1). 위 스위스 롤의 전체 이미지에 헤마톡실린과 에오신(H&amp;E) 염색을 적용하여, 모든 부위에 걸쳐 위 구조가 잘 보존되어 점막, 점막하, 근층을 명확히 시각화할 수 있게 되었습니다(그림 3). 그림 4는 카할(ICC; 위상 장 운동의 기저에 리드미컬한 느린 파동을 생성하는 박동 조율 세포; KIT 및 ANO1로 확인), 장신경세포(위장 운동성을 조절하는 장신경계 신경세포; TUBB3 면역염색으로 식별됨), 핵(DAPI)의 세포 간 세포의 대표적인 면역형광 염색을 보여줍니다. 위 점막에서는 이전에 보고된 9,10,11과 같이 판네스 세포와 잔 세포에서도 발현됩니다. ANO1은 위상피, 특히 기저의 기둥 상피세포에서 매우 많이 발현되어 염화물 운반과 점막 분비에 관여하는 역할을 부합한다11. 또한, TUBB3는 인간 단백질 아틀라스12,13의 데이터에 따르면 특정 위 내분비 세포와 점액 분비 세포에서 발현됩니다. 그림 5는 MYH11에 의해 표지된 평활근 세포, E-카데린에 의해 표지된 위 점막 상피세포, 그리고 KT에 의해 표지된 ICC의 대표적인 면역형광 염색을 보여줍니다. MYH11은 앞서 보고된 바와 같이 위 점막의 근섬유아세포에서도 발현됩니다. 이 면역형광 결과들은 우리 프로토콜이 조직 구조를 보존한다는 것을 확인시켜 줍니다.
<img alt="그림 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig1.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 1"> 
그림 1: 냉동절을 위해 쥐 위를 '스위스 롤' 준비하는 과정. (A) 조직 완전성을 유지하기 위해 제거 직후 검은색 실리콘 코팅 해부접시에 차가운 인산염 완충 식염수(PBS)를 채운다. (B) 십이지장 중앙부를 따라 위가 열려 있습니다. (C) 배를 부드럽게 늘려 접시에 고정하여 과도한 긴장 없이 평평하게 눕힌다. 조직을 따라 빨간 점선이 그려져 있어 말리기 쉽게 다듬어야 할 부분을 나타냅니다. (D) 열리고 고정된 위를 PBS에 적셔 필터 페이퍼 위에 올려 압축 형태로 말아야 합니다. 빨간 화살표는 위가 굴러가는 방향을 나타냅니다. (E) 조직 조각은 최적 절단 온도(O.C.T.) 화합물에 박혀 드라이아이스 위에 냉동하여 냉동절부 준비를 합니다. (F) 냉동 블록은 −80 °C에 저장되어 5 μm 두께로 냉동 절반되어 후속 분석에 사용됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.</a>
<img alt="그림 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig2.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 2"> 
그림 2: Z-스택 이미징 중 ND 획득 설정 및 포화 시각화. (A) 다중 채널 스펙트럼 이미징을 위해 공초점 영상 소프트웨어에서 설정된 레이저 및 검출기 설정. 네 가지 형광체가 사용되며, 각각 각각 여기 레이저 및 방출 검출기와 함께 사용됩니다. 스펙트럼 그래프는 여기 및 방출 곡선을 표시하여 조정하여 교차 토크를 최소화하고 신호 검출을 최적화할 수 있습니다. (B) 각 형광체별로 노출 설정을 개별적으로 조정하여 픽셀 채도를 피하고 고강도 영역의 세부 사항을 보존합니다. (C) 6개 × 6개 필드 같은 대형 이미지 획득 설정으로 위 전체 스위스 롤을 시각화할 수 있습니다; 영상 필드 크기는 말린 조직의 크기와 조짐에 따라 조절되어야 합니다. (D) ND 획득 창에서 Z-스택 매개변수 설정을 보여줍니다. Z 범위는 위근육의 상단과 하단 위치를 선택하여 정의되며, 조직의 전체 깊이를 포착하여 3차원(3D) 분석을 위해 8단계로 구성됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.</a>
<img alt="그림 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig3.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 3"> 
그림 3: 헤마톡실린과 에오신 염색이 묻은 쥐 위장 스위스 롤 이미지. 타일 스캔은 8주 된 암컷 C57BL/6J 마우스의 위스위스 롤 전체를 시각화할 수 있음을 보여줍니다. 주요 해부학적 부위는 식도(빨간 점선), 하부 식도 괄약근(보라색 점선), 저저부(검은색 점선), 뇌질(파란색 점선), antrum(초록색 점선), 십이지장(주황색 점선) 등이 표시되어 있습니다. 스케일 바: 1000 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭해 주세요.</a>
<img alt="그림 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig4.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 4"> 
그림 4: 전체 쥐 위의 스위스 롤 공초점 이미지: ANO1, KIT, TUBB3. 상단 패널: 8주 된 암컷 C57BL/6J 마우스의 위스위스 롤을 대표적으로 꿰매 공초점 이미지로, ANO1(녹색), KIT(청록색), TUBB3(노란색), 핵(파란색)에 대한 면역염색을 보여줍니다. 안저, 코퍼스, 그리고 안트럼을 포함한 전체 굴러간 위가 시각화됩니다. 스케일 바: 1000 μm. 하단 패널: 상단 패널의 흰색 점선 상자로 표시된 영역의 확대 뷰로, 카할의 간질 세포(ANO1+ 및 KIT+; 노란색 화살표)와 장내 신경세포(TUBB3⁺; 빨간 화살표)의 세포 세부 사항을 강조합니다. 스케일 바: 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 확대 버전을 보시려면 여기를 클릭하세요.</a>
<img alt="그림 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig5.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 5"> 
그림 5: 전체 쥐 위장의 스위스 롤 공초점 이미지: MYH11, KIT, E-cadherin. 상단 패널: 8주 된 암컷 C57BL/6J 마우스의 위스위스 롤 대표성 공초점 이미지로, MYH11(녹색), KIT(청록색), E-카데린(노란색), 핵(파란색)의 면역 염색을 보여줍니다. 안저, 코퍼스, 그리고 안트럼을 포함한 전체 굴러간 위가 시각화됩니다. 스케일 바: 1000 μm. 하단 패널: 상단 패널의 흰색 점선이 그려진 영역의 확대 뷰. 흰색 점선은 점막 상피(E-카데린)와 근육층(MYH11)을 구분합니다. 흰색 화살표는 KIT+ 카할 간질세포(ICC)를 나타냅니다. 스케일 바: 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 확대 버전을 보시려면 여기를 클릭하세요.</a>

Spatial "omics" technologies provide unprecedented opportunities to study the biology and interactions of individual cells of the gastric neuromuscular ...

enhanced-spatial-mapping-mouse-gastric-muscle-layers-using-modified

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

Cajal (ICC)의 중간 세포는 위장 (GI) 트랙트의 맥박 조정기 세포입니다. 그들은 평활근 세포와 GI 수축성 조절에 게시할 - ganglionic의 연결 섬유 사이의 복잡한 네트워크를 형성하고 있습니다. 여기, 우리는 immunofluorescence 횡단면 방법과 murine ICC 네트워크 전체 마운트 시각화를 제시한다.

마우스의 Cajal (ICC) 네트워크의 중간 세포의 시각화

실험실 동물의 위장관을 따라 평활근 수축을 생체 내에서 측정하는 것은 활용도가 낮지만 강력한 기술로 남아 있습니다. 유연한 이중 요소 스트레인 게이지는 상업적으로 이용 가능하지 않으며 제작이 필요합니다. 이 프로토콜은 설치류에 급성 또는 만성 이식을 위한 신뢰할 수 있고 저렴한 스트레인 게이지의 구성을 설명합니다.

측정을위한 소형 이중 요소 스트레인 게이지의 제조 및 주입<em&gt; 생체</em&gt; 설치류에서 위장 수축.

이 기사는 생쥐를 이용한 위식도 역류의 수술 절차를 보여줍니다. 이러한 모델은 위식도 역류 질환 및 잠재적으로 배럿 식도 및 식도암 연구의 메커니즘 및 치료법에 유용한 도구입니다.

마우스와 위식도 역류의 외과 모델

전체 마운트 준비를 신속하게 준비하기 위해 마우스 창자를 자르고 '굴리는' 간단한 장치를 사용하는 것이 설명되어 있습니다.

간단한 장치는 빠르게 마우스 소장의 전체 마운트를 준비하는 방법

최근에 사용 가능한 비디오 녹화 및 시공간 매핑(STmap) 기술을 사용하면 장 운동성의 전파 및 혼합 패턴을 시각화하고 정량화할 수 있습니다. 이 프로토콜의 목표는 GIMM(GastroIntestinal Motility Monitoring) 시스템을 사용하여 STmap의 생성 및 분석을 설명하는 것입니다.

운동성의 시공간 매핑<em&gt; 전의 VIVO</em내장의&gt; 준비

이 기사에서는 성체 마우스에서 결장 운동성의 신경 조절 변화를 식별하기 위한 비디오 이미징 기술과 고해상도 시공간 매핑에 대해 설명합니다. 위장관(GI) 기능에 대한 미묘한 영향은 위장관 질환에 대한 이해를 증진하기 위해 분리된 조직 제제에서 이 접근법을 사용하여 감지할 수 있습니다.

비디오 이미징 및 시공간지도는 마우스에서 위장관 운동성을 분석하는

정확한 식별 및 장 점막 안감을 따라 상피 세포의 위치는 다른 세포 계보를 정의하는 것이 필수적이다. 장 조직의 적절한 촬상 최대 해상도 단백질 발현 패턴을 식별하기 위해 중요하다. 이 연구는 처리 마우스 장 조직을위한 최적의 방법과 조건을 서술하는 것을 목표로하고있다.

면역 조직 화학적 및 면역 형광 분석을위한 창자 조직 준비를위한 향상된 스위스 압연 기술

다음에서는 쥐에 수직 소매 위절제술의 성능을 설명합니다. 복 부의 약 70%의 제거를 포함 하는 체중 감소 수술의 유형입니다.

수직 소매 위절제술의 Murine 모델

장은 소화와 흡수에 매우 중요합니다. 십이지장, 제주눔, 회장, 결장 등 각 부위는 독특한 세포 구조로 인해 뚜렷한 기능을 수행합니다. 장 생리학을 연구하려면 세심한 조직 분석이 필요합니다. 이 프로토콜은 스위스 롤 기법을 사용한 조직 고정 및 처리를 간략하게 설명하며, 적절한 조직 보존 및 배향을 통해 정확한 면역염색을 보장합니다.

Intestinal Swiss Rolls 및 파라핀 포매 조직의 면역형광 염색에 최적화된 프로토콜

본 연구는 전체 마운트 장 조직과 다광자 현미경을 사용하여 분비된 점액을 정량화하여 카르바모일콜린 클로라이드와 같은 자극에 대한 점액 역학의 정밀한 체적 분석 및 시각화를 가능하게 하는 3D 이미징 방법을 제시합니다.

전체 마운트 조직 이미징을 사용한 장 점액의 3차원 정량화

배우세요 수정된 스위스 롤 기법을 이용한 생쥐 위 전체 면역염색 방법으로 위 구조와 세포 구성을 공간 방향을 유지하며 시각화하는 기술입니다. 이 방법은 모든 위 영역을 동일한 조건에서 처리하여 실험의 신뢰성과 재현성을 높입니다.

수정된 스위스 롤 기법을 이용한 생쥐 위근층의 향상된 공간 지도 작성

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