Name: CAR T 세포에서 CRISPR-Cas9 스크리닝 개선: 라이브러리 준비를 위한 정교한 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-02T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: 학습하세요 CAR T 세포에서 CRISPR-Cas9 스크리닝을 위한 최적화된 프로토콜을. 효소 소화 및 선택적 풀다운 단계를 통해 sgRNA 카세트를 효율적으로 복구하고 PCR 증폭을 개선하는 방법을 배우세요. 이 기술은 CAR T 세포 기능을 조절하는 유전자 조절자를 식별하여 면역치료 효과를 높이는 데 활용됩니다.

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<ol><li>Brudno, J. N., Maus, M. V., Hinrichs, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+T+cells+and+T-cell+therapies+for+cancer%3A+A+translational+science+review%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">CAR T cells and T-cell therapies for cancer: A translational science review.</a> JAMA. 332 (22), 1924-1935 (2024).</li>
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<li>Tsuji, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+biotinylated+RNA+or+DNA+pulldown+assays+for+detection+of+binding+proteins%3A+Examples+of+IRP1%2C+IRP2%2C+HuR%2C+AUF1%2C+and+Nrf2%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Optimization of biotinylated RNA or DNA pulldown assays for detection of binding proteins: Examples of IRP1, IRP2, HuR, AUF1, and Nrf2.</a> Int J Mol Sci. 24 (4), 3604(2023).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>4200 테이프스테이션</td><td>애질런트</td><td>G2991A</td><td></td></tr><tr><td>아크리딘 오렌지</td><td>인비트로젠</td><td>A1301</td><td></td></tr><tr><td>플루어 XP&nbsp;</td><td>벡먼 쿨터</td><td>A63881</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS NEO 분리기</td><td>밀텐이</td><td>130-120-327</td><td>고속 자기 셀 분류기</td></tr><tr><td>비오티닐화 올리고</td><td>IDT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>시그마</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>셀로미터 K2 형광 세포 계수기</td><td>리비티</td><td>CMT-K2-MX-150</td><td>형광 세포 계수기</td></tr><tr><td>CHT4 카운팅 챔버</td><td>리비티</td><td>CHT4-SD100-002</td><td></td></tr><tr><td>CytoSinct CD4 나노비즈</td><td>젠스크립트</td><td>L00863-1</td><td></td></tr><tr><td>CytoSinct CD8 나노비즈</td><td>젠스크립트</td><td>L00864-1</td><td></td></tr><tr><td>dNTP</td><td>애질런트</td><td>200418-51</td><td></td></tr><tr><td>다이나비즈 M-280 스트렙타비딘</td><td>인비트로젠</td><td>11206D</td><td></td></tr><tr><td>다이나매그-2 자석</td><td>인비트로젠</td><td>12321D</td><td></td></tr><tr><td>EDTA 0.5 M pH 8.0</td><td>인비트로젠</td><td>15575-038</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>머크</td><td>1,00,98,31,000</td><td></td></tr><tr><td>ExPERT ATX 전기포공기</td><td>맥스사이트</td><td>엑스퍼트 ATx</td><td></td></tr><tr><td>피콜-파케</td><td>시티바</td><td>17544203</td><td></td></tr><tr><td>필트로푸르 S 0.2 및 마이크로; m</td><td>사르스테트</td><td>83,18,26,001</td><td></td></tr><tr><td>GenCRISPR 울트라 NLS-Cas9-연구</td><td>젠스크립트</td><td>Z03621-1</td><td></td></tr><tr><td>허큘레이즈 버퍼 5X</td><td>애질런트</td><td>600675-52</td><td>5배 버퍼</td></tr><tr><td>허큘라스 II 융합 효소</td><td>애질런트</td><td>600679-51</td><td>DNA 중합효소</td></tr><tr><td>IL-15</td><td>밀텐이</td><td>130-095-765</td><td></td></tr><tr><td>IL-7</td><td>밀텐이</td><td>130-095-362</td><td></td></tr><tr><td>마스터사이클러 X50a</td><td>에펜도르프</td><td>6313HG006059</td><td></td></tr><tr><td>맥스사이트 전기천공 버퍼</td><td>시티바</td><td>EPB1</td><td></td></tr><tr><td>NdeI</td><td>뉴잉글랜드 바이오랩스</td><td>R0111L</td><td></td></tr><tr><td>뉴클레오스핀 조직</td><td>마셰레이-나겔</td><td>74,09,52,250</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>깁코</td><td>14190-094</td><td></td></tr><tr><td>폴리브렌</td><td>머크</td><td>TR-1003-6</td><td></td></tr><tr><td>프라이머</td><td>서모피셔</td><td></td><td></td></tr><tr><td>프로피듐 요오드</td><td>시그마</td><td>P4864</td><td></td></tr><tr><td>PspXI</td><td>뉴잉글랜드 바이오랩스</td><td>R0656S</td><td></td></tr><tr><td>푸로마이신</td><td>깁코</td><td>A11138-03</td><td></td></tr><tr><td>큐비트 3.0 형광도계</td><td>인비트로젠</td><td>Q33216</td><td></td></tr><tr><td>큐비트 HS DNA 분석법</td><td>인비트로젠</td><td>Q32851</td><td></td></tr><tr><td>R-50x3 무균 우물 처리 조립체</td><td>맥스사이트</td><td>LM243882</td><td></td></tr><tr><td>T 세포 트랜스액트 인간</td><td>밀텐이</td><td>130-111-160</td><td>T 세포 자극 시약</td></tr><tr><td>테이프 스테이션 HSD1000</td><td>애질런트</td><td>5067-5585</td><td></td></tr><tr><td>텍스맥스</td><td>밀텐이</td><td>130-097-196</td><td>T 세포 배양지</td></tr><tr><td>트리스 버퍼, 1.0 M, pH 8.0, 분자생물학 등급</td><td>EMD 밀리포어</td><td>648314</td><td></td></tr><tr><td>분자생물학을 위한 물, DNAse, RNAse 및 프로테아제 프리</td><td>열과학</td><td>327390010</td><td></td></tr></tbody></table>

car t 세포에서 crispr-cas9 스크리닝 개선: 라이브러리 준비를 위한 정교한 방법

Improving CRISPR-Cas9 Screens in CAR T Cells: A Refined Method for Library Preparation

CAR T 세포에서 CRISPR-Cas9 스크리닝 개선: 라이브러리 준비를 위한 정교한 방법

Chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapies have demonstrated remarkable efficacy in several hematological malignancies, yet their success has not ...

improving-crispr-cas9-screens-car-t-cells-refined-method-for-library

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 비디오는 CRISPR-Cas9 시스템을 통해 유전자 변형 CAR T 세포를 만드는 과정을 간략하게 설명합니다. T 세포를 CRISPR과 CAR 렌티바이러스에 감염시키면 표적 유전자가 변형되고 키메라 항원 수용체(CAR)가 합성되어 궁극적으로 유전적으로 변형된 CAR T 세포가 형성됩니다.

CRISPR-Cas9 시스템을 사용한 CAR T 세포의 유전자 변형

이 CRISPR/Cas9 ribonucleoproteins 및 수정된 된 특성을 사용 하 여 편집 다음 프로토콜 자세히 설명 발자국 없는 유도 만능 줄기 세포 (Ipsc)의 세대 급지대 무료 조건에서 인간의 췌장암 세포에서 단일 셀 복제합니다.

효율적인 생성 및 급지대 무료 Ipsc CRISPR Cas9 시스템을 사용 하 여 인간의 췌 장 세포에서의 편집

CRISPR-Cas는 식물과 동물의 복잡 한 유전자를 강력한 기술. 여기, 우리는 효율적으로 다른 Cas endonucleases를 사용 하 여 인간 게놈을 편집 하려면 프로토콜 선발. 우리는 중요 한 고려 사항 및 설계 매개 변수 편집 효율 최적화를 강조 표시 합니다.

포유류 세포 라인 CRISPR Cas를 사용 하 여 게놈 편집

여기, 우리 CRISPR-Cas9-대상 활동의 손실 없이 더 높은 특이성을 달성 하기 위해 최적화 하는 프로토콜을 제시. 우리는 원하는 특성을 가진 돌연변이 Cas9를 찾을 수 라고 스나이퍼-화면 감독된 진화 접근을 사용 합니다. 스나이퍼-Cas9와 잘린된 단일 가이드 RNAs는 ribonucleoprotein 형태로 배달 높은 특이성을 달성 하기 위한 잘 알려진 전략 이다.

스나이퍼-Cas9를 사용 하 여 대상에서 감독된 진화를 통해 대상에 활동의 손실 없이 CRISPR Cas9의 영향을 최소화 하

CRISPR/sgRNA 라이브러리 질의 단백질 코딩 유전자에 적용 되었습니다. 그러나, 유전자 규칙에서 CTCF 경계의 기능을 밝히기 위해 sgRNA 라이브러리의 미개척 남아 있습니다. 여기, 우리는 HOX loci 특정 sgRNA 라이브러리 CTCF 경계 HOX loci의 기능을 명료 하 게 설명 합니다.

HOX Loci Focused CRISPR/sgRNA 라이브러리 심사 식별 중요 CTCF 경계

CRISPR-Cas9 기술은 모든 세포 유형에서 포유류 게놈을 정밀하게 편집하는 효율적인 방법을 제공하며 게놈 전체의 유전 적 스크린을 수행하는 새로운 수단을 나타냅니다. 풀링된 게놈 전체 CRISPR-Cas9 스크린의 성공적인 성능을 위해 필요한 단계를 논의하는 상세한 프로토콜이 여기에 제공됩니다.

포유류 세포에 있는 풀린 CRISPR 기지를 둔 유전 스크린

이 원고는 세포외 수용체-리간드 상호 작용을 확인하기 위해 게놈 규모의 세포 기반 스크리닝 접근법을 기술한다.

게놈 규모 CRISPR/Cas9 유전 스크린을 이용한 세포 표면 수용체 식별

여기서 우리는 면역 능력 마우스의 피부와 구강에 있는 몇몇 유전자의 기능을 동시에 평가하기 위하여 자궁 배아 렌즈바이러스 주사에서 초음파 유도를 사용하여 생체 내 CRISPR/Cas9 검열 방법론을 기술합니다.

마우스 피부와 구강의 유전자 기능을 동시에 평가하기 위한 Vivo CRISPR/Cas9 스크리닝

여기서, 우리는 CAR-T 세포를 수정하기 위하여 CRISPR Cas 기술을 사용하여 1 차적인 인간 T 세포에 있는 유전자 편집을 위한 프로토콜을 제시합니다.

인간 CRISPR-엔지니어링 CAR-T 셀 생산

이 논문은 건강한 기증자 키메라 항원 수용체 T 세포에서 게놈 전체 CRISPR 녹아웃 스크리닝을 완료하기 위해 고갈에 대한 체외 모델을 적용하는 프로토콜에 대해 설명합니다.

키메라 항원 수용체 T 세포에서 체외 게놈 와이드 CRISPR 녹아웃 스크리닝 수행

학습하세요 CAR T 세포에서 CRISPR-Cas9 스크리닝을 위한 최적화된 프로토콜을. 효소 소화 및 선택적 풀다운 단계를 통해 sgRNA 카세트를 효율적으로 복구하고 PCR 증폭을 개선하는 방법을 배우세요. 이 기술은 CAR T 세포 기능을 조절하는 유전자 조절자를 식별하여 면역치료 효과를 높이는 데 활용됩니다.

CAR T 세포에서 CRISPR-Cas9 스크리닝 개선: 라이브러리 준비를 위한 정교한 방법

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