Name: 생체 내 노화 마커의 공간 평가를 위한 다중화 면역형광 분석법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-07-24T12:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: 배우세요 다중화 면역형광 분석법을 활용한 인체 조직 내 노화 세포의 공간적 평가 방법을. 이 기술은 단일 조직 섹션에서 여러 바이오마커를 동시에 검출하여 세포 유형과 조직 구조를 종합적으로 프로파일링할 수 있습니다.

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<ol><li>Gorgoulis, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence%3A+Defining+a+Path+Forward%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence: Defining a Path Forward.</a> Cell. 179 (4), 813-827 (2019).</li>
<li>Hernandez-Segura, A., Nehme, J., Demaria, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cellular+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cellular senescence.</a> Trends Cell Biol. 28 (6), 436-453 (2018).</li>
<li>De Souza, N., Zhao, S., Bodenmiller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+protein+imaging+in+tumour+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Multiplex protein imaging in tumour biology.</a> Nat Rev Cancer. 24 (3), 171-191 (2024).</li>
<li>Teo, Y. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch+signaling+mediates+secondary+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Notch signaling mediates secondary senescence.</a> Cell Rep. 27 (3), 997-1007 (2019).</li>
<li>Ogrodnik, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+minimal+information+on+cellular+senescence+experimentation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Guidelines for minimal information on cellular senescence experimentation in vivo.</a> Cell. 187 (16), 4150-4175 (2024).</li>
<li>Sharpless, N. E., Sherr, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forging+a+signature+of+in+vivo+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Forging a signature of in vivo senescence.</a> Nat Rev Cancer. 15 (7), 397-408 (2015).</li>
<li>Schürch, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinated+cellular+neighborhoods+orchestrate+antitumoral+immunity+at+the+colorectal+cancer+invasive+front%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Coordinated cellular neighborhoods orchestrate antitumoral immunity at the colorectal cancer invasive front.</a> Cell. 182 (5), 1341-1359.e19 (2020).</li>
<li>Lin, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+multiplexed+immunofluorescence+imaging+of+human+tissues+and+tumors+using+t-CyCIF+and+conventional+optical+microscopes%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Highly multiplexed immunofluorescence imaging of human tissues and tumors using t-CyCIF and conventional optical microscopes.</a> eLife. 7, e31657(2018).</li>
<li>Tomimatsu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+immunofluorescence+cancelling+for+highly+multiplexed+imaging+to+capture+specific+cell+states%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Precise immunofluorescence cancelling for highly multiplexed imaging to capture specific cell states.</a> Nat Commun. 15, 3657(2024).</li>
<li>Kiessling, P., Kuppe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+multi-omics%3A+novel+tools+to+study+the+complexity+of+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Med%22%5BJournal%5D)">Spatial multi-omics: novel tools to study the complexity of cardiovascular diseases.</a> Genome Med. 16 (1), 14(2024).</li>
<li>Chaib, S., Tchkonia, T., Kirkland, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence+and+senolytics%3A+the+path+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence and senolytics: the path to the clinic.</a> Nat Med. 28, 1556(2022).</li>
<li>Freund, A., Laberge, R. M., Demaria, M., Campisi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lamin+B1+loss+is+a+senescence-associated+biomarker%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Lamin B1 loss is a senescence-associated biomarker.</a> Mol Biol Cell. 23 (11), 2066-2075 (2012).</li>
<li>Eng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+framework+for+multiplex+imaging+optimization+and+reproducible+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">A framework for multiplex imaging optimization and reproducible analysis.</a> Commun Biol. 5 (1), 1-11 (2022).</li>
<li>Wallis, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence-associated+morphological+profiles+%28SAMPs%29%3A+an+image-based+phenotypic+profiling+method+for+evaluating+inter-+and+intra-model+heterogeneity+of+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+%28Albany+NY%29%22%5BJournal%5D)">Senescence-associated morphological profiles (SAMPs): an image-based phenotypic profiling method for evaluating inter- and intra-model heterogeneity of senescence.</a> Aging (Albany NY). 14, 1-27 (2022).</li>
<li>González-Gualda, E., Baker, A. G., Fruk, L., Muñoz-Espín, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+assessing+cellular+senescence+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">A guide to assessing cellular senescence in vitro and in vivo.</a> FEBS J. 288 (1), 56-80 (2021).</li>
<li>O’Sullivan, E. A., Wallis, R., Mossa, F., Bishop, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+paradox+of+senescent-marker+positive+cancer+cells%3A+challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Aging%22%5BJournal%5D)">The paradox of senescent-marker positive cancer cells: challenges and opportunities.</a> NPJ Aging. 10 (1), 1-11 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>30% Hydrogen Peroxide (H2O2)</td><td>Merck</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>Antigen unmasking solution 1 (H3300) (ARS1)</td><td>Vector Labs.</td><td>H-3300</td><td>Prepare with 12.5 ml Antigen Unmasking Solution + 237.5 ml ddH2O</td></tr><tr><td>Antigen unmasking solution 2 (ARS2)</td><td>Sigma</td><td>T6066 / E5134</td><td>Prepare 10x stock (12.9 g Trizma base, 3.7 g EDTA, 5 mL Tween 20, 995 mL ddH20).&nbsp;</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td><td>Merck</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>Bulk Dewaxing Solution</td><td>Leica</td><td>AR9222</td><td></td></tr><tr><td>Bulk Epitope Retrieval 1 (ER1)</td><td>Leica</td><td>AR9961</td><td></td></tr><tr><td>Bulk&nbsp; Epitope Retrieval (ER2)</td><td>Leica</td><td>AR9640</td><td></td></tr><tr><td>Bulk Wash Solution</td><td>Leica</td><td>AR9590</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Merck</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>Doubled distilled water (ddH20)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Merck</td><td>472301</td><td></td></tr><tr><td>Donkey Serum</td><td>Merck</td><td>D9663</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Merck</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Merck</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Merck</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Merck</td><td>BP399</td><td></td></tr><tr><td>Propyl Gallate</td><td>Merck</td><td>P3130</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Bicarbonate</td><td>Merck</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Triton X 100</td><td>Merck</td><td>H5141</td><td></td></tr><tr><td>Trizma Base</td><td>Merck</td><td>T6066</td><td></td></tr><tr><td>Tween20</td><td>Merck</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>기타 소모품 또는 장비</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Decloaking chamber</td><td>BioCare</td><td>DC2012</td><td></td></tr><tr><td>Steam strips</td><td>BioCare</td><td>613QC</td><td></td></tr><tr><td>Bond RXm Auto Slide Stainer</td><td>Leica</td><td>HIS2330</td><td>자동 슬라이드 스태이너로 언급됨&nbsp;</td></tr><tr><td>Cell DIVE</td><td>Leica</td><td>29429159</td><td>다중 형광 이미징 시스템으로 언급됨&nbsp;</td></tr><tr><td>Click Well slide holders</td><td>Leica</td><td>29463259</td><td>웰 커버슬립리스 슬라이드 홀더로 언급됨&nbsp;</td></tr><tr><td>항체 목록</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD31 (Pecam-1)</td><td>Cell Signalling</td><td>61255</td><td>Clone: 89C2 Fluorophore: AF555 Dilution: 1 in 50</td></tr><tr><td>CD8a</td><td>BioLegend</td><td>372906</td><td>Clone: C8/144B Fluorophore: Alexa 647 Dilution: 1 in 100</td></tr><tr><td>CDKN2A/p16</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-56330 AF647</td><td>Clone: jc8 Fluorophore: Alexa 647 Dilution: 1 in 200</td></tr><tr><td>FOXP3</td><td>BioLegend</td><td>320114</td><td>Clone: 206D Fluorophore: Alexa 647 Dilution: 1 in 50</td></tr><tr><td>Keratin 15</td><td>Abcam</td><td>ab194065</td><td>Clone: EPR1614Y Fluorophore: AF_488 Dilution: 1 in 200</td></tr><tr><td>Ki67</td><td>Abcam</td><td>ab215226</td><td>Clone: EPR3610 Fluorophore: AF555 Dilution: 1 in 50</td></tr><tr><td>Lamin B1</td><td>Abcam</td><td>ab194106</td><td>Clone: EPR8985(B) Fluorophore: AF_488 Dilution: 1 in 100</td></tr><tr><td>PanCK_AE1/AE3</td><td>Thermofisher</td><td>53-9003-82</td><td>Clone: AE1/AE3 Fluorophore: AF_488 Dilution: 1 in 100</td></tr><tr><td>SMA</td><td>R&amp;D systems</td><td>IC1420S</td><td>Clone: 1A4 Fluorophore: Alexa 750 Dilution: 1 in 100</td></tr><tr><td>Vimentin</td><td>Cell Signalling</td><td>69227</td><td>Clone: D21H3 Fluorophore: Alexa 750 Dilution: 1 in 100</td></tr></tbody></table>

생체 내 노화 마커의 공간 평가를 위한 다중화 면역형광 분석법

Multiplexed Immunofluorescence Assay for Spatial Assessment of Senescence Markers in vivo

Multiplexed immunofluorescence (IF) staining represents a step-change in sophistication over traditional IF imaging allowing sequential detection of ...

multiplexed-immunofluorescence-assay-for-spatial-assessment

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

세포 노화는 만성 연령 과 관련된 병리 발달의 핵심 요소입니다. 노화 세포를 표적으로 하는 치료제의 식별은 건강한 노화를 연장하기 위한 약속을 보여줍니다. 여기서, 우리는 단일 세포에서 의 노화 관련 β-갈락토시다아제 활성의 측정에 기초하여 senotherapeutics의 식별을 위해 스크리블하는 새로운 분석방법을 제시한다.

SA-β-갈락토시다아제 계 선별 분석법

우리는 냉동 된 조직에 다중 스펙트럼 이미징을 수행하는 빠른 염색 방법을 설명합니다.

냉동 조직 섹션의 다스펙트럼 형광 이미징을위한 신속한 방법

이 프로토콜은 다중 표지 FISH 및 형광 IHC 신호를 달성하는 것을 목표로 신선 냉동 및 고정 마우스 뇌 절편 모두에서 형광 in situ hybridization(FISH)과 형광 면역조직화학(IHC)을 결합하는 방법을 설명합니다. IHC는 세포질 및 막 부착 단백질을 표적으로 삼았습니다.

Multiplex Fluorescence In Situ Hybridization with Fluorescent Immunohistochemistry on Fresh Frozen or Fixed Mouse Brain Section(신선 냉동 또는 고정 마우스 뇌 절편에서 Multiplex Fluorescence In Situ Hybridization과 형광 면역조직화학의 결합)

여기서 우리는 단일 세포에서 다중 노화 관련 마커의 시각화 및 정량화를 위한 유세포 측정 기반 방법을 제시한다.

치료 유도 노인성 암 세포에서 다중 형광 노화 마커의 동시 이미징 및 유동 세포 측정 기반 검출

세포 배양 또는 쥐 종양 모델에서 화학 요법 약물에 의해 유도 된 노화 암 세포의 형광, 유세포 측정 정량화를위한 프로토콜이 제시된다. 선택적 절차에는 공동 면역염색, 대규모 배치 또는 시점 분석을 용이하게 하기 위한 샘플 고정, 유세포 분석 분류에 의한 생존 가능한 노화 세포의 농축이 포함됩니다.

유세포분석을 통한 노화 종양 세포의 식별 및 농축을 위한 원적색 형광 노화 관련 β-갈락토시다아제 프로브

이 기사에서는 이미지 분석 및 공간 분석과 결합된 수동 티라마이드 신호 증폭(TSA) 다중 면역형광(mIF)을 위한 프로토콜에 대해 설명합니다. 이 프로토콜은 실험실에서 사용할 수 있는 슬라이드 스캐너에 따라 슬라이드당 2-6개의 항원을 염색하기 위해 포르말린 고정 파라핀 포매(FFPE) 섹션과 함께 사용할 수 있습니다.

종양 미세 환경의 임상 및 생물학적 평가를 위한 공간 이미지 분석과 결합된 Multiplex Immunofluorescence

이 보고서는 자동 슬라이드 염색기에서 다중 면역형광(mIF) 분석을 위한 자동 프로토콜에 대해 설명합니다. 이는 표준 고처리량 조직 자동염색기 및 전체 슬라이드 형광 이미저에서 공간 단백질체학의 높은 재현성을 보여주며, 이는 중개 연구에서 많은 수의 조직 슬라이드에 걸친 맞춤형 mIF 분석에 이상적입니다.

중개 연구를 위한 High-Throughput Automated Multiplex Immunofluorescence Assay

이 프로토콜은 인간 지방 조직에서 분리된 기질 혈관 분획에서 노화 관련 베타-갈락토시다제(SA-β-gal) 활성을 객관적이고 단일 세포로 검출하기 위한 반사광 공초점 현미경을 제시합니다. 이 방법은 면역세포화학과 호환되며, 정량 평가를 위한 pH 조절을 포함하고, 기존의 SA-β-갤 염색보다 더 민감하고 주관적인 대안을 제공합니다.

지방 기질 혈관 분율에서 반사광을 이용한 노화 검출

DNA 이중 가닥의 휴식 시간에 대한 응답으로 빼앗아 - 139에서 H2AX의 인산화 다음 양식 γH2AX foci,의 현미경 분석 방사선 생물학에서 매우 중요한 도구가되었습니다. 여기서 우리는 핵 내에서 방사선 유발 γH2AX 형성의 공간적 분포를 평가하기 위해 적극적으로 속기 euchromatin의 epigenetic 마커로 라이신 4 모노 - methylated 히스톤 H3에 항체를 사용합니다.

이온화 방사선 다음 γH2AX의 공간적 분포 평가

우리는 직접의 근육 힘, 근육 힘, 수축성 속도론 및 절연 골격 근육의 fatigability를 측정하는 방법을...

절연 골격근의 수축성, Fatigability 및 Alternans의 예 VIVO 평가

배우세요 다중화 면역형광 분석법을 활용한 인체 조직 내 노화 세포의 공간적 평가 방법을. 이 기술은 단일 조직 섹션에서 여러 바이오마커를 동시에 검출하여 세포 유형과 조직 구조를 종합적으로 프로파일링할 수 있습니다.

생체 내 노화 마커의 공간 평가를 위한 다중화 면역형광 분석법

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