Name: 골육종 세포에서 특정 RNA의 m6A 변형 수준을 검출하기 위한 MeRIP-qPCR 분석법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-30T13:55:00.000+00:00
Duration: 5 min 16 s
Description: 배우세요 골육종 세포에서 MeRIP-qPCR을 이용해 특정 RNA의 m⁶A 변형 수준을 검출하는 방법을. c-Myc 전사체의 m⁶A 변형을 민감하게 분석하여 암 연구에 활용할 수 있습니다.

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<ol><li>Ma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interplay+between+m6A+RNA+methylation+and+noncoding+RNA+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">The interplay between m6A RNA methylation and noncoding RNA in cancer.</a> J Hematol Oncol. 12 (1), 121(2019).</li>
<li>Zhu, Z. M., Huo, F. C., Zhang, J., Shan, H. J., Pei, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+m6A+modification+and+alternative+splicing+during+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between m6A modification and alternative splicing during cancer progression.</a> Clin Transl Med. 13 (10), e1460(2023).</li>
<li>Hu, T., Wang, G., Wang, D., Deng, Y., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((m6A+methylation+modification%3A+Potential+pathways+to+suppress+osteosarcoma+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">m6A methylation modification: Potential pathways to suppress osteosarcoma metastasis.</a> Int Immunopharmacol. 145, 113759(2025).</li>
<li>Nagarajan, A., Janostiak, R., Wajapeyee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dot+blot+analysis+for+measuring+global+N6-methyladenosine+modification+of+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Dot blot analysis for measuring global N6-methyladenosine modification of RNA.</a> Methods Mol Biol. 1870, 263-271 (2019).</li>
<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+progress+in+strategies+to+profile+transcriptomic+m6A+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Current progress in strategies to profile transcriptomic m6A modifications.</a> Front Cell Dev Biol. 12, 1392159(2024).</li>
<li>McIntyre, A. B. R., Gokhale, N. S., Cerchietti, L., Jaffrey, S. R., Horner, S. M., Mason, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limits+in+the+detection+of+m6A+changes+using+MeRIP%2Fm6A-seq%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Limits in the detection of m6A changes using MeRIP/m6A-seq.</a> Sci Rep. 10 (1), 6590(2020).</li>
<li>Meyer, K. D., Saletore, Y., Zumbo, P., Elemento, O., Mason, C. E., Jaffrey, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+analysis+of+mRNA+methylation+reveals+enrichment+in+3%27+UTRs+and+near+stop+codons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Comprehensive analysis of mRNA methylation reveals enrichment in 3' UTRs and near stop codons.</a> Cell. 149 (7), 1635-1646 (2012).</li>
<li>Zheng, H. X., Zhang, X. S., Sui, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+profiling+of+N6-methyladenosine+%28m6A%29+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">Advances in the profiling of N6-methyladenosine (m6A) modifications.</a> Biotechnol Adv. 45, 107656(2020).</li>
<li>Matsuzawa, S., Wakata, Y., Ebi, F., Isobe, M., Kurosawa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+monoclonal+antibodies+against+N6-methyladenosine+for+the+detection+of+RNA+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development and validation of monoclonal antibodies against N6-methyladenosine for the detection of RNA modifications.</a> PLoS One. 14 (10), e0223197(2019).</li>
<li>Law, J., Günther, S., Watanabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitranscriptome+mapping+of+N6-methyladenosine+using+m6A+immunoprecipitation+with+high-throughput+sequencing+in+skeletal+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Epitranscriptome mapping of N6-methyladenosine using m6A immunoprecipitation with high-throughput sequencing in skeletal muscle stem cells.</a> Methods Mol Biol. 2640, 431-443 (2023).</li>
<li>Mathur, L., Jung, S., Jang, C., Lee, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+m6A+RNA+modification+by+LC-MS%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of m6A RNA modification by LC-MS.</a> STAR Protoc. 2 (3), 100724(2021).</li>
<li>Slama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+enrichment+factors+for+modified+RNA+in+MeRIP+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Determination of enrichment factors for modified RNA in MeRIP experiments.</a> Methods. 156, 102-109 (2019).</li>
<li>Guo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-molecule+m6A+detection+empowered+by+endogenous+labeling+unveils+complexities+across+RNA+isoforms%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-molecule m6A detection empowered by endogenous labeling unveils complexities across RNA isoforms.</a> Mol Cell. 85 (6), 1233-1246.e7 (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100% 에탄올</td><td>상하이 타이탄 과학 주식회사, 미국</td><td>1158566</td><td></td></tr><tr><td>143B</td><td>ATCC, 미국</td><td>ATCC CRL-8303TM</td><td></td></tr><tr><td>2&times; SYBR 그린 qPCR 믹스</td><td>베이징 치헝싱 바이오테크놀로지 유한회사, 중국</td><td>FS-Q1002</td><td></td></tr><tr><td>데노빅스 DS-11&nbsp;</td><td>데노빅스</td><td>DS-11&nbsp;</td><td>분광광도계</td></tr><tr><td>DMEM 매체</td><td>와이센트 코퍼레이션, 중국</td><td>319-005-CL</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12 중형</td><td>깁코, 미국</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>에피퀵 컷& RUN m6A RNA 풍부화 (MeRIP) 키트</td><td>에피젠텍, 미국</td><td>P-9018-24</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청</td><td>와이센트 코퍼레이션, 중국</td><td>086-150</td><td></td></tr><tr><td>hFOB1.19</td><td>중국 과학원 셀뱅크</td><td>GNHu14</td><td></td></tr><tr><td>m6A RNA 메틸화 분석 키트</td><td>애브캠, 영국</td><td>AB185912</td><td></td></tr><tr><td>마이크로RNA 역전사 키트</td><td>EZBioscience-EZB, 미국</td><td>A0010CGQ</td><td></td></tr><tr><td>실시간 시스템</td><td>바이오-래드, 미국</td><td>CFX96</td><td></td></tr><tr><td>토털 RNA 추출 키트</td><td>EZBioscience-EZB, 미국</td><td>B0004DP</td><td></td></tr><tr><td>트라이플LE 발현효소</td><td>깁코, 미국</td><td>12604021</td><td></td></tr></tbody></table>

골육종 세포에서 특정 rna의 m6a 변형 수준을 검출하기 위한 merip-qpcr 분석법

MeRIP-qPCR Assay for Detecting m6A Modification Levels of Specific RNA in Osteosarcoma Cells

골육종 세포에서 특정 RNA의 m6A 변형 수준을 검출하기 위한 MeRIP-qPCR 분석법

RNA epitranscriptomic modification plays a critical role in the initiation and development of various cancers, among which N6-methyladenosine (m6A) is the ...

merip-qpcr-assay-for-detecting-m6a-modification-levels-specific-rna

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 사전 microRNA의 설정 및 분석 서비스를 선보일 예정 써모 과학 매트릭스 멀티채널 피펫과 수작업으로뿐만 아니라 로봇을 사용하여 QPCR위한 96 잘 배열.

정량 실시간 PCR (qPCR) 배열을 사용하여 사전 마이크로 RNAS과 microRNAs의 프로 파일링

양적 실시간 중합 효소 사슬 반응 (qPCR)는 종양 샘플에서 여러 microRNA의 표현 수준 (miRNA) 분자를 조사하기 위해 신속하고 민감한 방법입니다. 다른 miRNA 분자의 수백이 메서드 표현식을 사용하면, 증폭 계량, 같은 cDNA 템플릿에서 분석할 수 있습니다.

정량 실시간 PCR (qPCR)에 의한 전립선 종양에 MicroRNA 감지

뼈 육종 암 줄기 세포의 존재 (CSC 추가)는 최근에 발병에 연결되어있다. 이 글에서, 우리는 비 접착 조건에서 성장하는 암줄 기세포의 능력을 사용하여 기존의 골육종 (OS)의 인간 생체 검사에서 얻은 기본 세포 배양에서 암줄 기세포의 분리를 제시한다.

암의 설립은 인간 기존의 골육종에서 세포 배양 줄기

RNA에 N 6 -methyladenosine (m 6 A) 변형을 측정하기위한 수정 북부 블로 팅 방법을 설명한다. 현재의 방법은 여러 가지 실험 설계에 따라 다양한 RNA를에서 수정 및 컨트롤을 감지 할 수 있습니다.

RNA 측정 방법<em&gt; N</em<sup&gt; 6</sup세포와 조직에서&gt; -methyladenosine 수정

우리는 여기에서 마이크로 RNA-200의 가족과 같은 grainyhead 2 (GRHL2)의 결합에 기초 이소성 발현 육종 세포에서 중간 엽 상피 전환 (MET)을 유도하는 세포 배양 방법을 제시한다. 이 방법은 암의 공격성과 치료에 대한 표현형 가소성의 생물학적 영향을 이해하기 더 적합합니다.

육종 세포의 중간 엽 상피 전환 유도

여기서, 전이 생물학의 전임상 조사에 사용될 수 있는 자발적인 폐 전이와 함께 골육종의 절단 절차를 따르는 회제 성 직소 이식이 기술되고 새로운 치료법의 개발이 설명된다.

전이율을 제어하는 절단을 가진 신제닉 직소 성 골육종 스프라그 Dawley 쥐 모델

본 프로토콜은 인간 골육종 세포에서 lncRNA를 국소화하기 위한 RNA 형광 in situ 교잡의 방법을 기술한다.

인간 골육종 세포에서 긴 비코딩 RNA 국소화를 위한 RNA Fluorescence In Situ Hybridization

이 프로토콜은 마이크로RNA와 다중화된 단백질을 동시에 검출하고 정량화하기 위해 포르말린 고정 파라핀 포매 조직을 사용한 탠덤 면역형광 혼성화 분석을 설명합니다.

새로운 검출 및 정량화 방법으로서의 Locked-nucleic-acid In situ Hybridization을 통한 MicroRNA 증폭 및 인식

여기서는 도트 블롯을 이용해 전반 m⁶A 수치를 반정량적으로 평가하는 프로토콜을 제시합니다. 총 RNA를 추출, 변성, 나일론 막에 점상화하고, 항-m⁶A 항체로 탐침하며, 화학발광으로 시각화합니다. ImageJ 그레이스케일 분석으로 정량화된 신호 강도는 상대적인 메틸화 풍부도를 반영하여 연구에 재현 가능한 워크플로우를 제공합니다.

글로벌 N6-메틸라데노신 RNA 변형 수준을 검출하기 위한 도트 블롯 분석

이 실험 프로토콜은 lncRNA 녹다운과 콜로니 형성 분석법을 결합하여 lncRNA가 골육종 세포 증식에 미치는 영향을 정량화하는 안정적이고 비용 효율적이며 효율적인 방법을 제공합니다.

LncRNA 노크다운 골육종 세포의 증식 능력을 검출하는 콜로니 형성 분석

배우세요 골육종 세포에서 MeRIP-qPCR을 이용해 특정 RNA의 m⁶A 변형 수준을 검출하는 방법을. c-Myc 전사체의 m⁶A 변형을 민감하게 분석하여 암 연구에 활용할 수 있습니다.

골육종 세포에서 특정 RNA의 m⁶A 변형 수준을 검출하기 위한 MeRIP-qPCR 분석법

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