Name: 라이브 고정화 효모 세포의 시각화에 대한 신속한 기술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 54 s
Description: 학습하세요 고정화된 효모 세포의 성장과 분열을 시각화하는 빠른 기술을 통해 후성유전학적 상태 변화를 관찰하는 방법을 배우세요. 이 기법은 세포 생물학 연구에 필수적인 도구입니다.

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우리 모두는 그들의 도움 피트 휴스턴과 유제 니아 쑤 감사하고 싶습니다.

<ol><li> 시간 코스 epifluorescence 현미경을위한 고정화 세포. 당신의 현미경의 목적 렌즈 아래 현미경 무대 경우에는이 프로토콜은 유용하게된다는 점에 유의하시기 바랍니다. </li><li> 긴 coverslip에 액체 매체에서 원하는 농도에 플레이스 세포 (약 24x50mm) </li><li> 합성 미디어 플레이트 (이들은 낮은 autofluorescence을 가지고)과 세포 이상의 장소에서 원하는 크기의 한천 블록 컷. 세포와 접촉 핀셋으로 처​​리되지 한천 블록의 측면을 놓으십시오. </li><li> 짧은 시간 코스 (최대 3 시간)의 경우이 설정가 충분합니다. 현미경에 대한 시각 때 세포가 이동하는 경우, 세포 또는 한천 블록의 증가 영역의 볼륨을 줄이십시오. </li><li> 더 이상 시간 코스, 한천 블록 위에 신선한 액체 매체의 한 방울을 배치하고, 한천 블록 위에 유리 슬라이드를 놓으십시오. 이 슬라이드는 한천 블록의 상단을 통해 증발을 줄여줍니다. 원하는 경우, 커버 슬립 접촉 한천 블록의 가장자리가 더 이상 수분을 줄이기 위해 바셀린과 함께 봉인 수 있습니다. 전 와일드 타입 속도로 나누어 세포와 장기 9시간하는 영화이 설정을 최대 사용하고 있습니다. </li></ol>

<ol>
	<li>Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+observations+reveal+intermediate+transcriptional+silencing+states.">Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states.</a> Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).</li></ol>

저자들은 공개할 사항이 없습니다.

이것은 아직도 성장을 허용하면서 효모 세포를 움직이게 빠른 방법입니다. 우리는 효모의 실험을하는 동안 야생 유형 부문 속도를 표시와 함께 십 시간을위한 효모의 성장을 따라있다. 이 설정은 현미경의 무대 아래로 객관적 렌즈를 필요로합니다.

라이브 고정화 효모 세포의 시각화에 대한 신속한 기술

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

우리는 여기서 epifluorescence 현미경으로 성장 효모 세포의 고정과 시각화를위한 단순하고 빠른, 그리고 매우 유연한 기법을 제시한다. 기술은 동일 길이가 한 열 시간까지 정적 효모 집단 또는 시간 과정 실험의 시각화에 적합합니다. 내 현미경은 S. cerevisiae의에서 무성 짝짓기 loci에서 epigenetic 상속을 조사. 그들이 heterochromatin에서 포장 그대로 정상적으로 표현되지 두 무성 짝짓기 loci, HML과 HMR이 있습니다. sir1 돌연변이 배경 입을 각 로커스 역시 표현하거나 침묵 epigenetic 상태에있을 수있는 등 약화되므로 전체 인구의 HML과 HMR 모두 다른 epigenetic 상태의 세포의 혼합이 있습니다. 내 현미경은 각 세포에 HML과 HMR의 epigenetic 주 사이에 관계가 없다는 것을 보여주었다. sir1 세포는 stochastically 이전에 표현 로커스에서 입을를 설립하거나 이전에 침묵 로커스을 표현, epigenetic 상태를 전환합니다. 내 시간 코스 현미경은 네 가지 epigenetic 스위치의 각각의 주파수 때문에 sir1 세포의 epigenetic 상태의 각각의 안정성을 점수로 개별 sir1 세포와 그 자손을 추적. 또한 쑤 외를 참조하십시오., 몰. 세포 2006.

여기에 침묵 교미 loci HML과 HMR에서 형광등 기자 적용 성장 고정화 효모 세포의 시각화에 대한 신속한 기술,

본 연구에서는 에피형광 현미경을 통해 성장하는 효모 세포를 고정하고 시각화할 수 있는 간단하고 신속하며 매우 유연한 기술을 제시합니다.

본 실험의 목적은 현미경 하에서 S. cerevisiae 세포 집단을 추적하여, 세포가 분열할 때마다 후성유전학적 상태가 어떻게 변화하고 얼마나 자주 변화하는지 관찰하는 것입니다. 긴 커버슬립을 준비하고, 약 7 µL의 세포를 취해 커버슬립 위에 올린 후 합성 배지 플레이트를 사용합니다. 면도날을 사용하여 한천(agar)을 절개합니다. 한천 블록을 잘라 들어올린 후 세포 위에 배치합니다.좋습니다, 최대 3시간까지의 단기 실험의 경우 이 방법만으로도 충분합니다. 장기 실험을 위해 세포를 고정시키려면, 한천 패드 상단에 액체 배지를 추가한 다음 전체를 유리 슬라이드로 덮어줍니다.배지는 두 층 사이의 밀봉재와 같은 역할을 하게 됩니다. 슬라이드는 단순히 agar 블록 상단의 증발을 방지하기 위한 것입니다. 이러한 설정을 통해 agar 블록은 촉촉한 상태를 유지하며, 세포는 최소 8시간까지 계속해서 분열하게 됩니다.

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연구

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생물학

유전자 삭제 및 단백질 overexpression은 단백질의 기능을 연구하는 일반적인 방법입니다. 이 문서에서는, 우리는 인구의 단백질 농도의 기능 및 단일 세포 수준으로 표현형 개발의 분석을 위해 프로토콜을...

버딩 효모에서 단백질 농도의 함수로 형태학의 표현형의 발전 분석

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효모 콜로니 임베딩 방법

저하 및 재활용을위한 효모 공포의 산성 루멘에 organelles의 전달을 모니터링하는 강력한 방법이 설명되어 있습니다. 방법은 유전자 인코딩 듀얼 발광 형광 산도 - 바이오 센서 및 형광 현미경을 사용하여 개별 세포의 시각화와 대상 organelles의 특정 상표에 의존합니다.

효모에서 모니터링 Mitophagy을위한 형광 현미경 분석 Saccharomyces cerevisiae

분열 효모의 양적 라이브 세포 형광 - 현미경 분석

우리는 형광 성장 효모 세포의 현미경 영화, 단일 셀 시계열 데이터를 추출하는 GUI 기반의 소프트웨어 패키지를 얻을 수있는 간단한 프로토콜을 제시한다. 분석은 자동화 혈통과 육안 검사 및 추적 데이터를 수동으로 큐 레이션과 통합 부문 시간 할당을 포함합니다.

신진 효모의 형광 시간 경과 영화를 획득 및 이식을 사용하여 단일 세포 역학 분석

싹트는 효모에서 염색체를 표면으로 퍼뜨리는 방법이 제시됩니다. 이 방법은 이전에 Loidl과 Klein이 설명한 방법에서 파생되었습니다. 또한, 퍼진 염색체의 면역 염색 절차를 시연합니다.

표면 확산과 효모 염색체의 면역 염색

우리는 핵분열 효모 성 수명 주기의 장기 현미경을 위한 재현 가능한 기본 방법을 제공합니다. 설명된 사소한 조정과 함께 제시된 프로토콜은 생식 과정의 여러 단계에 대한 연구의 초점을 맞출 수 있도록 합니다.

분열 효모 성적 라이프 사이클의 현미경

이 프로토콜은 다중 색상 4D (타임 랩스 3D) 공초점 현미경을 사용하여 신진 효모에서 형광 표지 된 세포 내 구획의 분석을 설명합니다. 이미징 매개 변수는 광손상을 제한하면서 적절한 신호를 캡처하도록 선택됩니다. 사용자 정의 ImageJ 플러그인은 레이블이 지정된 구조를 추적하고 정량적으로 분석할 수 있도록 합니다.

효모의 4D 현미경 검사법

여기에서, 우리는 연구원이 유사분열과 만두증 도중 살아있는 핵분열 효모 세포에 있는 단백질 행동 그리고 핵 역학을 공부하는 것을 허용하는 비 독성 현미경 검사법인 살아있는 세포 화상 진찰을 제시합니다.

형광 라이브 세포 현미경 검사법에 의한 미토틱 및 Meiotic 핵분열 효모 핵 역학의 검사

중요한 형광 염료는 현대 곰팡이 세포 생물학에 있는 살아있는 세포 화상 진찰 분석을 위한 필수적인 공구입니다. 이 논문은 필라멘트 균류에서 플라즈마 막 역학, 내분비 / 외신 세포증 및 세포 벽 형태 형성을 추적하기위한 확립되고 덜 알려진 형광 염료의 응용 프로그램에 대해 자세히 설명합니다.

필라멘트 곰팡이의 살아있는 세포 이미징을 위한 막 및 세포벽 선택적 형광 염료의 적용

학습하세요 고정화된 효모 세포의 성장과 분열을 시각화하는 빠른 기술을 통해 후성유전학적 상태 변화를 관찰하는 방법을 배우세요. 이 기법은 세포 생물학 연구에 필수적인 도구입니다.

라이브 고정화 효모 세포의 시각화에 대한 신속한 기술

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