Name: 냉동 세포에서 시작 문화 : 인간 ES 세포 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 47 s
Description: 배우세요 냉동 HuES 인간 배아줄기세포 배양 시작 방법을. 해부학 및 발달생물학 연구에 필수적인 재현 가능한 프로토콜로 세포 생존율과 증식을 확인할 수 있습니다.

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냉동 주식에서 해동 : <ol><li> 색상 세포를 해동하기 전에, 당신이 이미 준비 MEF 접시가 제대로 양호한 상태로 도금하고 있는지 확인합니다. 바람직한 판, 아니면 3 일 이상 오래된 하나보다 적게 사용하려고하지 마십시오. 그것은 모두 원뿔 튜브와 우물을 사용하고 사전 레이블을 권장합니다. </li><li> 37 ° C. 사전 따뜻한 색채 미디어 나누어지는의 색채 미디어의 각 라인에 대한 살균 원뿔 관에. -80에서 색채 유리병 / s를 제거하고 즉시 잠수함 37 ° C 물 욕조에서 튜브의 아래쪽 절반을. 세포는 80 % (왼쪽 작은 부분 냉동) 해동되기 전에는 45~60초 정도 걸릴 것입니다. </li><li> 신속 튜브는 층류 후드에 가지고 70 %의 알코올로 아래로 스프레이하고, 부드럽게 사전 예열 미디어의에 세포를 전송할 수 있습니다. 튜브를 스핀, 미디어를 제거하고 신선한 사전 예열 색채 미디어의 적절한 볼륨에 resuspend. </li><li> 당신이로 해동 것입니다 많은 우물 등에서 MEF 미디어를 대기음. 신속하게 나누어지는 사전 예열 색채 미디어 다시 접시의 각 우물에가 첨부된 MEFs을 방해하지 않도록주의하고. 후드에 따로 접시를 설정합니다. 방울이 균일하게 접시에 대한 배포하는 경우 MEFs와 마찬가지로 가장 좋은 결과를 얻을 수있다. 종자로 색상 세포가 MEFs 수 있도록 야간 37 ° C 배양기에 플레이트를 주의깊게 반환합니다. 신선한 색채 미디어 대체, ~ 48 시간 해동 후 미디어를 변경합니다. </li></ol>

<ol><li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li>
</ol>

저자들은 공개할 이해관계가 없습니다.

이 비디오에서는, 우리는 우리 연구실은 정기적으로 냉동 주식에서 색채 인간 배아의 줄기 세포 배양을 수립 방법을 보여줍니다. 이 프로세스는 DMSO 용액에서 냉동하는 경우 모든 포유 동물 세포와 함께 일반적인 사용을위한 의무입니다. 효율적인 해동 꽁꽁 얼어붙은 주식에서 색채 세포의 새로운 문화를 구축 필수적이며, 실험의 일관성을 위해 중요합니다.

색상 미디어 651.5 ML KO - DMEM 500 ML PenStrep 6.5 ML Glutamin 6.5 ML NEAA 6.5 ML 베타 - 메르 캅 토 에탄올 0.5ul KO 세럼 교체 65 ML Plasmanate 65 ML bFGF2 (10 NG / ML 최종) 0.65 ML

냉동 세포에서 시작 문화 : 인간 es 세포

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

여기 우리는 우리의 실험실은 냉동 주식에서 색채 인간 배아의 줄기 세포 라인 문화를 시작하는 방법을 보여줍니다. 첫째, 약 한 1-2일 오래된 십cm 플레이트 (두) 만 조사 마우스 배아 fibroblast 피더 세포는 잔류 혈청 및 세포 파편을 제거하는 색채 미디어 씻어서이며, 다음 색채 미디어는 추가하고 셀에 평형 왼쪽 문화 인큐베이터. 장기 액체 질소 저장 또는 - 80C 냉장고에서 세포의 냉동 유리병 빨리 해동을위한 37C 물을 욕조에 공급하고 빠르게 잠수입니다. 냉동 미디어 세포 다음 유리병에서 제거와 색채 미디어의 큰 볼륨에 배치됩니다. 색채의 큰 볼륨 미디어 색채 인간 배아 줄기 세포가 구별시킬 수있는 여분의 혈청과 DMSO의 제거를 용이하게합니다. 전지는 부드럽게 정지 뽑아 버리고 다음 다음 씨앗 MEF 접시를 사용하는 신선한 색채 미디어의 작은 볼륨에서 다시 일시 중지됩니다. 그것은 부드럽게 균일하게 접시에 걸쳐 뿌려주하는 드롭 현명한 방식으로 색상 세포를 추가하여 씨앗 MEF 판을하는 것이 중요 간주됩니다. 미디어가 교체되기 전에 새로 설립 색채 문화 플레이트가 48 시간을위한 인큐베이터로 반환됩니다, 그때 이후 24 시간마다 공급합니다.

여기 우리는 우리의 실험실은 냉동 주식에서 색채 인간 배아의 줄기 세포 라인 문화를 시작하는 방법을 보여줍니다.

냉동 세포에서 시작 문화 : 인간 ES 세포

본 영상에서는 당사 연구실에서 동결 보관된 스톡으로부터 HuES 인간 배아 줄기 세포주 배양을 시작하는 방법을 보여드립니다. 먼저, 배양한 지 1~2일 된 10cm 플레이트의...

human-es-cells-starting-culture-from-frozen-cells

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

여기 우리 연구소 색채 인간의 배아 줄기 세포 라인을 멈추 방법을 보여줍니다.

냉동 인간 ES 세포

제임스 톰슨 외 문화에 hES을 분리하고 성장 1998 년 기술을 개발 때문에, 나중에 사용하기 위해 및 냉동 주식에서 세포를 해동 및 확대 냉동 세포는 일상 hES 세포 배양에서 수행한 중요한 절차가있다. hES 세포는 동결 융해의 스트레스에 민감하고 있으므로 특별한주의가 있어야합니다. 여기 우리는 신속하게, 액체 질소 주식에서 hES 세포를 해동 마우스 배아 피더 세포를 도금하고, 천천히 장기 저장을 위해 그들을 오해해서 적절한 방법을 보여줍니다.

인간 배아 줄기 세포를 동결 융해

우리는 함께 retroviral Oct3 / 4, Sox2, Klf4과 c-myc (OSKM)를 인코딩 벡터, 라이브 염색법에 의해 정확하게 다시 프로그램 hiPSC의 신분을 이용하여 인간의 유도된 pluripotent 줄기 세포 (hiPSC) Tra-로 인간의 체세포의 효율적인 언어학 재활을위한 프로토콜을 제시 1-81 항체.

인간 유도 Pluripotent 줄기 세포의 선택 및 분리 식민지는 성인 섬유아 세포에서 다시 프로그램

우리는 현행 cGMP(Good Manufacturing Practices) 지침에 따라 동물성 제품이 없는 시약을 사용하여 인간 양막 상피 세포(hAEC)를 분리하고 배양하는 프로토콜을 설명합니다.

분리, 냉동 보존 및 문화 임상 응용 프로그램에 대한 인간 양막 상피 세포

이 프로토콜은 추가적인 외인성 보충 또는 hPSC 특이적 합성 하층(hPSC) 없이 젤라틴으로 코팅된 접시에 담긴 인간 태반에서 유래한 조건화된 배지만을 사용하여 인간 만능 줄기세포(hPSC)를 증식시키는 간단하고 효율적인 방법을 제공합니다.

소설 문화 모델은 인간 다 능성에 대한 태반 에어컨 미디어에서 젤라틴에 세포 전파 줄기

인간의 피부는 외부 환경에 대 한 방어의 첫 번째 줄 역할을 합니다. 우리는 성인 피부에서 기본 인간의 keratinocytes를 격리 하기 위한 방법을 제시. 이러한 격리 keratinocytes 수많은 실험 설정에 유용 하 고 공부 하는 분자 메커니즘 피부 생물학에 생체 외에서. 에 대 한 매우 적합 한...

생성 및 기본 인간 Keratinocytes 성인 피부에서의 경작

프로토콜은 차별화에 생체 재료의 강성 효과 확산의 조사와 펩타이드, 없이 투입 했다 다양 한 뻣 뻣 함과 폴 리 비닐 알코올-co-itaconic 산 hydrogels를 준비 하 여 줄기 세포입니다. hydrogels 강성 가교에 의해 통제 되었다.

폴 리 비닐 알코올-Co-Itaconic 산 Hydrogels 이종 없는 조건 하에서 다양 한 강성에 인간의 Pluripotent 줄기 세포 문화

이 프로토콜은 풍부한 지방산, 콜레스테롤, 사이토카인의 낮은 농도 및 저산소증을 사용하여 골수 마이크로 환경을 모방하여 체외에서 정지한 인간 조혈 줄기 세포의 유지를 가능하게 합니다.

정지 인간 조혈 줄기 세포를 유지하는 배양 방법

세포 치료제 준비/조작 단계에 도입된 이종(화학적 또는 동물 유래) 제품은 숙주 환자에서 면역 반응성 및 병원성 전파의 위험 증가와 관련이 있습니다. 여기서, 인간 지방유래 줄기세포의 분리 및 시험관내 확장을 위한 완전한 이종발생학적 무함유 방법이 기재되어 있다.

인간 지방 유래 줄기 세포의 분리 및 배양 (Isolation and culture of human adipose-derived stem cells with an innovative Xenogeneic-free method for human therapy)

현재 프로토콜은 제조사 지침에 따라 재프로그래밍이 어려운 환자 샘플의 말초혈 단핵세포(PBMC)에서 유도 다능성 줄기세포(iPSC) 유도 문제를 해결하는 절차를 상세히 설명합니다. 이 프로토콜은 냉동 버피 코트 샘플에 특이적이지만 정제된 PBMC 재프로그래밍에도 적용될 수 있습니다.

냉동 버피 코트 샘플에서 유도된 다능성 줄기세포주 재프로그래밍

배우세요 냉동 HuES 인간 배아줄기세포 배양 시작 방법을. 해부학 및 발달생물학 연구에 필수적인 재현 가능한 프로토콜로 세포 생존율과 증식을 확인할 수 있습니다.

냉동 세포에서 시작 문화 : 인간 ES 세포

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