2008년 10월 6일
자유롭게 동물을 이동 고유 뇌 세포 지역에서 신경 전달 물질 수준의 모니터링 신경 전달 물질 방출과 행동 사이의 링크에 통찰력을 제공합니다. 그리고 기초 neurotransmission가 약리 또는 생리적 조작에 의해 변경하는 방법에 대한 정보, 전기 탐지와 결합하여 생체내 microdialysis 우수한 해부 학적 및 화학적 해상도를 제공합니다.
안녕하세요, 저는 터프츠 대학교 의과대학 약리학 및 실험 치료학과 엠마누엘 포토 연구소의 브렌다 가이거입니다. 저는 역시 연구실의 로렌 프랭크입니다. 오늘 우리는 설치류에서 생존 가능한 정위 수술을 시연할 것입니다.
이 절차에는 기구를 설치하고 동물이 수술을 받을 수 있도록 준비한 다음 정위 수술을 수행하는 것이 포함됩니다. 시작하겠습니다. 절차를 시작하기 전에 입체 기기와 필요한 모든 재료를 설정하십시오.
해당 영역과 기구를 청소하고 소독했는지 확인하십시오. 다음으로, 동물이 수술을 받을 수 있도록 준비합니다. 오늘 수술은 10주 된 Sprague 돌리 랫드를 사용하여 시연해 드리겠습니다.
우리는 또한 3개월 된 스프레이 돌리 쥐와 2개월 된 C 57 검은색 6 J 마우스를 사용하는데, 이는 특수 플랫폼 어댑터가 필요합니다. 킬로그램당 60mg, 케타민, 킬로그램당 10mg이 함유된 칵테일을 IP 주사하여 쥐를 마취합니다. 자일라진. 온도 조절기 조절 가열 패드를 사용하여 동물을 따뜻하게 유지하십시오.
동물이 진정되고 적절한 체온에서 안정되었는지 확인한 후 수술을 진행하십시오. 수술을 시작하려면 전기 면도기로 귀부터 눈 사이까지 깎아 동물의 털을 깎습니다. 면도한 부위에 요오드를 바르되 눈을 보호해야 합니다.
이제 동물을 입위 장치에 장착하십시오. 이 첫 번째 장착을 수행하려면 한쪽 이어바를 외이도에 끼운 다음 제자리에 고정하고 다른 이어바를 밀어 넣어 머리는 좌우로 움직일 수 없지만 주둥이는 위아래로 움직일 수 있도록 합니다. Stereotaxic instrument 사용자 눈금자의 앞쪽 마운트로 입을 고정하여 머리가 수평인지 확인합니다.
자와 동물 두피 중간 사이에는 90도 각도가 있어야 합니다. 동물이 제자리에 놓이면 멸균 메스로 두피의 앞쪽 뒤쪽을 절개합니다. 람다에서 동물의 눈 사이까지 절개 부위를 확장하십시오.
지혈제를 사용하여 피부를 꼬집고 절개 부위를 열어 둡니다. 노출된 두개골 표면을 여러 개의 면봉으로 말리십시오. 다음으로, 가이드 캐뉼러를 마운트에 놓습니다.
그런 다음 두개골에서 bgma를 찾아 가이드 캐뉼라를 이 위치 바로 위에 놓습니다. bgma에서 전방, 후방 및 측면 좌표를 기록하십시오. 프로브 배치에 필요한 올바른 좌표를 찾으십시오.
Stereotactic atlas의 도움으로 가이드 캐뉼러는 bgma에서 더하거나 빼서 올바른 좌표로 이동합니다. 가이드 캐뉼라가 두개골에 닿을 때까지 내린 다음 이 복부 좌표를 기록합니다. 두개골의 이 위치에 연필로 표시를 합니다.
이것은 당신이 시추할 곳입니다. 드릴링을 시작합니다. 가이드 캐뉼러를 제거하고 드릴 비트를 소독하십시오.
그런 다음 두개골 너비를 통과할 때까지 연필 자국에 0.5mm 구멍을 뚫습니다. 남자 캐뉼라에게 측면을 건드리지 않고 구멍을 뚫을 수 있는지 확인하십시오. 캐뉼라가 직선 경로의 구멍을 제거할 수 있을 때까지 계속 드릴링하고 확인하십시오.
수막막이나 혈관을 관통하지 않도록 주의한다. 구멍이 만들어지면 멸균 바늘을 사용하여 수막을 부드럽게 펀칭하여 가이드 캐뉼라가 막히지 않게 삽입할 수 있도록 합니다. 다음으로, 핸드 드릴을 사용하여 두개골 나사를 위한 6개의 구멍을 만듭니다.
캐뉼러 구멍의 앞쪽에 2개, 측면에 2개, 뒤쪽에 2개. 6개의 스테인리스 스틸 뼈 나사를 살균하고 단단히 고정될 때까지 두개골에 놓습니다. 나사를 삽입한 후 가이드 캐뉼러를 에탄올로 청소하고 건조시킨 다음 장착하고 가이드를 적절한 복부 좌표로 천천히 내립니다.
캐뉼라는 뇌 손상을 방지하기 위해 위아래로 내려갑니다. 측면이 닿지 않고 완벽하게 수직으로 들어가고 있는지 확인하십시오. 그런 다음 지혈제를 제거합니다.
액체 치과 시멘트를 얇게 섞고 가이드 캐뉼라, 나사 및 나머지 두개골을 얇은 층의 주걱으로 덮습니다. 다음으로, 앵커 나사를 뒤쪽 두개골 나사의 중앙과 뒤에 놓고 핀셋으로 제자리에 고정합니다. 이번에는 다른 시멘트 배치를 더 두껍게 만들고 시멘트가 두꺼워질 때 고정할 수 있을 만큼 충분한 시멘트로 캐뉼라와 앵커 나사를 완전히 덮습니다.
그러나 굳기 전에 시멘트 캡에서 피부를 분리하고 주걱으로 시멘트 캡을 성형하여 전체가 매끄럽고 피부에 자극을 주지 않는지 확인하십시오. 나중에 가이드 캐뉼라를 강화하고 헤드 마운트의 나머지 부분과 연결하기 위해 더 많은 시멘트가 추가됩니다. 치과 용 시멘트가 완전히 건조 된 후, 장치에서 동물을 제거하십시오.
그런 다음 현지 항생제인 바시트라신을 시멘트 뚜껑 전체에 바릅니다. 다음으로, 페니실린을 근육 주사한 후 식염수를 오닐 피하 주사합니다. 동물을 우리에 넣고 의식이 생길 때까지 동물을 모니터링합니다.
그런 다음 동물을 방으로 돌려보내 회복하십시오. 회복 후. 실험이 끝날 때까지 매일 동물을 모니터링하여 감염 징후가 있는지 확인하고 통증과 고통을 평가합니다.
동물이 통증을 느끼는 것으로 보이는 경우 필요에 따라 1일 2회 kg당 0.1-0.5mg의 피하 부프레노르핀을 투여합니다. 또한 국소 바시트라신 치료제와 전신 페니실린 치료제가 투여됩니다. 수술 후 감염이 발생하고 수술 후 12시간 이상 증상이 지속되면 동물을 안락사시킵니다.
우리는방금 설치류에서 생존 가능한 정위 수술을 수행하는 방법을 보여드렸습니다. 이 절차를 수행할 때. 수술 중 멸균 환경을 유지하고 감염을 방지하기 위해 수술 후 동물을 면밀히 모니터링하고 가이드 캐뉼라의 위치가 정확하도록 동물을 에어 바에 올바르게 배치하는 것을 기억하는 것이 중요합니다.
그게 다야. 시청해 주셔서 감사드리며 실험에 행운을 빕니다.
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이 기사는 자유롭게 움직이는 동물의 세포외 신경전달물질 수준 모니터링에 대해 논의하며, 신경전달물질 방출과 행동을 연결합니다. 그것은 향상된 해부학적 및 화학적 해상도를 위한 생체 내 마이크로다이얼리시스 및 전기화학적 검출의 사용을 강조합니다.
Survivable stereotaxic surgery in rodents enables precise implantation of guide cannulas and microdialysis probes for in vivo measurement of extracellular neurotransmitter levels. This capability is critical for interrogating CNS pharmacodynamics, supporting target validation, and de-risking mechanistic hypotheses in neuropsychiatric and neurodegenerative drug discovery. The approach provides high anatomical and chemical resolution, facilitating translational continuity from early discovery through preclinical research.
This method integrates into the discovery-to-preclinical continuum by enabling hypothesis-driven interrogation of CNS targets and pathways in live animal models.