Name: Perinatal 국소 빈혈의 Hypoxic 허혈성 뇌증 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-11-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: 배우세요 신생아 저산소성 허혈성 뇌증 연구를 위한 쥐 모델 수술법. 좌측 경동맥 결찰과 저산소 챔버 처리 후 TTC 염색으로 뇌경색 부위를 확인하는 방법을 익혀보세요.

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미국 심장 협회와 천 년 3 월에 의해 자금 지원.

이 프로토콜은 실험 동물의 사용을위한 건강 지침 국립 연구소에 의해 스탠포드 대학 abides에서 기관 애니멀 케어 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 신생아 랫 히에 모델 <ol><li> 3-4 유도에 대한 %와 1-2 %; 포스트 나탈 일 (쿨러) 7 스프 라그 - 돌리 랫 새끼가 (찰스 리버 연구소, 주식 회사, 윌밍턴, MA) (Aerrane, 백스터, 디어 필드, IL isoflurane과 완벽하게 anesthetized 아르 유지 보수). </li><li> 작은 절개는 왼쪽 일반적인 경동맥의 동맥 (CCA)를 노출 (엑스트라 씬 아이리스 가위 # 14088-10, 좋은 과학 도구 병원, 포스터 시티, CA)를 목에 이루어집니다. </li><li> CCA는 5-0 실크 봉합사 (5-0 실크, Ethicon, 소머, 뉴저지)과 출혈도 잡았입니다. </li><li> 절개는 cyanoacrylate 접착제 (엘머스 제품 병원, 콜럼버스, OH)으로 닫힙니다. 절개는 테이프로 덮여 있으며, 마취가 중지됩니다. 새끼들은 댐에 반환하고 1-2시간에 대한 회복하다 수 있습니다. </li><li> 펍스 그러면 37 100 분 92% 질소와 균형을 8 % 산소를 포함하는 hypoxic 챔버 ° C.에 배치됩니다 8퍼센트 oxygen/92 %의 질소 가스 (Airgas, 새크라멘토, CA) 플라스틱 커버와 복 마우스 케이지에 튜브를 통해 흐름. 커버가 케이지에 맞게 만들어 직경 2cm의 구멍을 가지고있다 한 8 %의 산소 가스 탱크 및 다른 연결된 튜브를받을 수있는 중 가스 flowout 수 있습니다. 챔버는 물을 욕조에 배치되고 사용하기 전에 예열하고 그 내부에 온도계가 hypoxia의 시작하기 전에 37 ° C를 등록해야합니다. </li><li> hypoxia의 백분의 끝에, 새끼가 복구를 위해 자신의 댐을 다시 반환됩니다. </li><li> 24시간 hypoxia의 끝 후에 새끼는 isoflurane과 깊은 마취에 의해 euthanized 있습니다. 뇌 조직은 염분, pH를 7.4 (시그마 화학 CO, 세인트 루이스, MO) 버퍼 인산의 추위 1퍼센트 TTC의 해결책 다음, 차가운 정상적인 생리와 perfused 있습니다. TTC는 빛과 보호 보관해야합니다. </li><li> 두뇌가 제거하고 얼음에 1-2분, 4 코로나 섹션 간격 3mm (레벨 1-4)를 냉각하는 것은 bregma 1.8에 해당하는 opticchiasm과 infundibulum 수준에서 rostrally 시작 버렸어요의 ~ 2.0 mm 수준 성인 마우스 뇌. </li><li> 뇌 조각이 TTC 용액에 열중하고 4 % paraformaldehyde / PBS 하룻밤에 고정 다음, 8 분 ° C 37 incubated 수 있습니다. TTC는 빛을 구분하므로,이 시간 동안 빛으로부터 조각 거리 유지. </li><li> TTC 자국이 섹션은 스캔과 디지털됩니다. 경색 면적 (흠없는 지역), ipsilateral 북반구의 영역, 그리고 contralateral 북반구의 면적 : 이미지 J (NIH, 베데스다, MD), 다음은 각 수준에 대한 측정을 사용합니다. 1, 2, 3, 4 (경색 / ipsilateral 반구의 영역의 면적) 또는 : %는 슬라이스마다 지역으로 계산됩니다 infarcted. 경색의 퍼센트 볼륨의 합계 (A 1 + 2 + 3 + 4) * 3mm로 계산됩니다. 피질 또는 striatal 부상 분야도 별도로 비슷한 방식으로 계량하실 수 있습니다. </li></ol> 대표 결과 <img src="/files/ftp_upload/old/955_2008_9_2_2/955_Fig-01.png" alt="그림 1" width="660" height="190" /> 그림 1. TTC와 함께 대표 히에 코로나 레벨 1-4 얼룩. TTC 스테인드 코로나 섹션 경색의 영역 (흰색)을 보여줍니다.

<ol><li>Rice, J. E. 3rd, Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+neurology%22%5BJournal%5D)">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Annals of neurology. 9 (2), 131-141 (1981).</li>
<li>Vannucci, R. C., Vannucci, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perinatal+Hypoxic-Ischemic+Brain+Damage%3A+Evolution+of+an+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Perinatal Hypoxic-Ischemic Brain Damage: Evolution of an Animal Model.</a> Dev Neurosci. 27 (2-4), 81-86 (2005).</li>
<li>Bona, E., Hagberg, H., Loberg, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+moderate+hypothermia+after+neonatal+hypoxia-ischemia%3A+short-+and+long-term+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+research%22%5BJournal%5D)">Protective effects of moderate hypothermia after neonatal hypoxia-ischemia: short- and long-term outcome.</a> Pediatric research. 43 (6), 738-738 (1998).</li>
<li>Trescher, W. H., Ishiwa, S., Johnston, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hypothermia+and+hyperthermia+on+attentional+and+spatial+learning+deficits+following+neonatal+hypoxia-ischemic+insult+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+brain+research%22%5BJournal%5D)">Effects of hypothermia and hyperthermia on attentional and spatial learning deficits following neonatal hypoxia-ischemic insult in rats.</a> Behavioural brain research. 151 (1-2), 209-209 (2004).</li>
<li>Mishima, K., Ikeda, T., Yoshikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+post-hypoxic-ischemic+hypothermia+markedly+delays+neonatal+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+development%22%5BJournal%5D)">Brief post-hypoxic-ischemic hypothermia markedly delays neonatal brain injury.</a> Brain development. 19 (5), 326-326 (1997).</li>
<li>Young, R. S., Olenginski, T. P., Yagel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+graded+hypothermia+on+hypoxic-ischemic+brain+damage%3A+a+neuropathologic+study+in+the+neonatal+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">The effect of graded hypothermia on hypoxic-ischemic brain damage: a neuropathologic study in the neonatal rat.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 14 (6), 929-929 (1983).</li>
<li>Bederson, J. B., Pitts, L. H., Germano, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+2%2C3%2C5-triphenyltetrazolium+chloride+as+a+stain+for+detection+and+quantification+of+experimental+cerebral+infarction+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Evaluation of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 17 (6), 1304-1304 (1986).</li>
<li>Cai, J., Kang, Z., Liu, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+therapy+reduces+apoptosis+in+neonatal+hypoxia-ischemia+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Hydrogen therapy reduces apoptosis in neonatal hypoxia-ischemia rat model.</a> Neuroscience letters. 441 (2), 167-167 (2008).</li>
<li>Grow, J., Barks, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+hypoxic-ischemic+cerebral+injury+in+the+term+infant%3A+current+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+perinatology%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of hypoxic-ischemic cerebral injury in the term infant: current concepts.</a> Clinics in perinatology. 29 (4), 585-585 (2002).</li>
<li>Aden, U., Halldner, L., Lagercrantz , H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggravated+brain+damage+after+hypoxic+ischemia+in+immature+adenosine+A2A+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Aggravated brain damage after hypoxic ischemia in immature adenosine A2A knockout mice.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 34 (3), 739-739 (2003).</li>
</ol>

설치류 출생 후의 히에 모델 recapitulates 대뇌 hypoxia은 신생아에서 페리 - 산후 기간 동안 발생하는 설치 모델입니다. 광범위한 histological 및 immunocytochemical 특성화 연구 칠일 오래된 설치류은 세번째 임신 인간 태아의 7 모델 유사한 뇌의 성숙을 갖고 증명하고있다. 쥐 히에 모델은 저체온증과 같은 개입은 3 확인되었습니다 페리 - 나탈 hypoxia 2의 뇌 손상의 메커니즘을 이해하기위한 매우 유익한되었습니다. 이 모델은 처음에는 쥐에 완벽하게 그리고 더 최근의 생쥐 8 맞게되었다. 언급을 보증 구체적인 기술적인 세부 사항이 있습니다 : <ol><li> CCA의 결합하기 전에, 결합 조직 및 CCA를 빠뜨리다 수 있습니다 미주 nervus을 제거하십시오. CCA의 성공적인 결합을 통해 결합 사이트 위의 선박 색상은 흰색으로 바뀝니다해야합니다. 또는, 그것은 또한 ligate 이중 두 내고 사이트의 중간에 절단하는 것이...

<table><tbody><tr><td>Sprague-Dawley 쥐 새끼</td><td>동물</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>수술</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>8% Oxygen/ 92% Nitrogen 가스</td><td>수술</td><td>Airgas</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride</td><td>시약</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>인산완충생리식염수 (PBS) pH 7.4</td><td>시약</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>시약</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr></tbody></table>

perinatal 국소 빈혈의 hypoxic 허혈성 뇌증 모델

The Hypoxic Ischemic Encephalopathy Model of Perinatal Ischemia

Hypoxic - 허혈성 뇌증 (히에)는 출생시 질식 발생 체계의 결과이다. 히에과 neonates의 25 %는 정신 지체, 뇌성 마비 및 간질을 포함하여 심각한 및 영구 neuropsychological sequelae을 개발합니다. 히에의 결과는 히에와 신생아의 뇌 손상을 줄이기 위해 치료 전략을 파악하고 개발하는 것이 중요하고, 파괴 및 영구 있습니다. 이를 위해, hypoxic - 허혈성 뇌 손상에 대한 신생아 쥐 모델이 인간의 조건을 모델로 개발되었습니다. 히에 모델 처음 Vannucci 외 1 확인되었으며 이후 광범위하게 perinatal hypoxia - 국소 빈혈이로 인한 뇌 손상의 메커니즘을 파악하고 잠재적인 치료 중재에게 3,4를 테스트하는 데 사용되었습니다. 히에 모델은 두 단계 프로세스입니다 hypoxic 환경에 노출 다음 왼쪽 일반적인 경동맥의 결합을 포함한다. 출혈도 잡았 경동맥에 ipsilateral 반구의 대뇌 혈류 (CBF)이 있기 때문에 윌리스의 원을 통해 부수적인 혈류의 감소하지 않고 있지만 낮은 산소 긴장과 ipsilateral 북반구에서 CBF가 크게 감소하고 일방적 허혈성 부상 결과 . 허혈성 뇌 조직을 얼룩 및 식별 2,3,5 - triphenyltetrazolium 염화물 (TTC)의 사용은 원래 쥐 대뇌 국소 빈혈 5 성인 모델 개발되었고, 최대 72 초기 시간 지점에서 뇌성 infarctin의 범위를 평가하는 데 사용됩니다 허혈성 이벤트 6 시간 이후. 이 비디오에서는, 우리는 출생 후의 쥐 두뇌에있는 hypoxic - 허혈성 손상 모델 및 TTC의 얼룩을 사용하여 경색 크기의 평가를 보여줍니다.

hypoxic - 허혈성 뇌 손상에 대한 출생 후의 쥐 모델은 인간의 신생아 hypoxic 허혈성 뇌증 (히에)의 잘 설립 모델입니다. 이 문서에서는, 우리는 포스트 나탈 쥐 새끼의 히에의 모델을 설명합니다.

Perinatal 국소 빈혈의 Hypoxic 허혈성 뇌증 모델

저산소성 허혈성 뇌병증(Hypoxic-Ischemic Encephalopathy, HIE)은 출생 시 발생하는 전신 질식의 결과로 나타납니다. HIE가 있는 신생아의 25%에서 중증의 ...

출생 후 7일 된 Sprague-Dawley 쥐 새끼에게 미세수술을 통해 왼쪽 총경동맥 결찰을 시행하여 저산소성 뇌병증 허혈 모델을 유도합니다. 1~2시간의 회복 기간을 거친 후, 새끼 쥐들을 37 °C의 저산소 챔버에 100분 동안 둡니다.그 후 새끼들은 안락사 시킬 때까지 어미에게 돌려보냅니다. 두 단계의 전신 관류 과정을 거친 후, 뇌를 적출하여 3 mm 두께의 절편으로 자릅니다. 그 다음, 경색 부위를 확인하기 위해 절편을 1% 2, 3, 5, triphenyltetrazolium chloride 또는 TTC 용액으로 염색합니다.안녕하세요, 저는 스탠퍼드 대학교 의과대학 신경과 및 신경과학과의 Andre Lab 소속 Hi tango입니다. 오늘은 신생아 저산소성 허혈성 뇌손상 모델 제작 절차를 보여드리겠습니다. 저희 연구실에서는 새로운 치료법 개발이라는 최종 목표를 가지고 신생아 뇌의 저산소성 허혈성 뇌병증 기전을 연구하기 위해 이 절차를 사용하고 있습니다.그럼 시작하겠습니다. 절차를 시작하기 위해, 생후 7일 된 스프레이 돌리(spray dolly) 쥐 새끼를 완전히 마취시킵니다. 유도 시에는 4%, 유지 시에는 1~2%의 ISO fluorine을 사용합니다.몇 분 후, 발가락 꼬집기 테스트를 실시하여 새끼 쥐가 마취되었는지 확인합니다. 그런 다음 면봉을 사용하여 10% povidone iodine를 도포하고, 이어서 70% isopropyl alcohol로 새끼 쥐의 목 부위를 소독합니다. 다음으로 Fine Science Tools의 멸균된 초미세 홍채 가위를 사용하여 중앙선에서 왼쪽으로 약 5mm 지점에 작은 절개를 넣고, 둔성 박리를 통해 왼쪽 총경동맥(common carotid artery, CCA)을 노출시킵니다.CCA를 얽어맬 수 있는 결합 조직과 미주 신경을 반드시 제거하십시오. 그 다음 Ethicon사의 5-0 실크 봉합사를 사용하여 CCA를 결찰하십시오.결찰 부위 위쪽 혈관의 색은 결찰 직후 흰색으로 변해야 합니다. 결찰 후에는 시아노아크릴레이트 접착제로 절개 부위를 폐쇄하고 테이프로 덮어줍니다. 그런 다음 마취를 중단하고 새끼 쥐가 의식을 회복하는지 확인하십시오.새끼 쥐를 따뜻한 패드가 깔린 회복 상자에 넣습니다. 필요에 따라 다른 새끼 쥐들에게도 동일한 절차를 반복합니다. 새끼 쥐들을 어미 쥐에게 돌려보내기 전 최소 5분 동안 상태를 관찰합니다.실험 전 새끼 쥐가 1~2시간 동안 회

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

대형 동물 모델은 신생아 질식의 생리학과 약리학의 시험에서 좋은 병진 값을 가진다. 신생아 piglets를 사용하여, 우리는 조직과 지역 혈류 역학, 생화학 및 pathologic 경로와 상관 관계가있는 산소 수송을 공부의 장점을 가지고 신생아 질식을 시뮬레이션 할 수있는 실험 프로토콜을 개발합니다.

신생아 질식의 돼지 모델

이 비디오는 신생아 저산소성-허혈성 뇌 손상을 연구하기 위한 마우스 모델을 만드는 절차를 보여줍니다. 외과적으로 허혈을 유도하고 동물에게 저산소증을 가하여 뇌 손상을 악화시키는 단계를 설명합니다. 마지막으로, 결과로 생성된 뇌 병변을 평가하는 방법을 보여주어 마우스 모델이 추가 과학적 조사를 위해 준비되었는지 확인합니다.

신생아 저산소성-허혈성 뇌 손상의 마우스 모델 확립

출처: Jantzie, L. L., et. al입니다. Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats(쥐에서 양막내 지방다당류를 사용한 산전 저산소증-허혈을 사용한 미숙아 뇌병증 모델링). J. Vis. Exp. (2015)이 비디오는 자궁 혈류를 제한하고 LPS를 주입하여 태아 쥐에서 저산소성 허혈성 및 염증성 상태를 유도하는 프로토콜을 보여주며, 조산 연구와 관련된 신경 염증 및 뇌 발달 장애를 모델링합니다.

태아기 쥐의 뇌병증을 모델링하기 위한 저산소성 허혈성 및 염증성 질환 유도

주산기 질식에 따른 저산소성 허혈성 뇌병증은 동물 모델을 사용하여 연구할 수 있습니다. 우리는 신생아 저산소성-허혈성 뇌병증의 새끼 돼지 모델을 확립하는 데 필요한 절차를 보여줍니다.

신생아 저산소 - 허혈성 뇌증의 돼지 모델

혈전색전성 뇌졸중 모델은 재개통 치료를 최적화하기 위한 중요한 도구입니다. 본 연구에서는 혈전증 및 경색을 유발하는 일과성 대뇌 저산소성 허혈성(tHI) 모욕에 기초한 쥐 혈전성 뇌졸중 모델을 보고하며, 뇌졸중 환자와 유사한 치료 창에서 조직 플라스미노겐 활성제(tPA) 매개 섬유소용해에 호의적으로 반응합니다.

과도 대뇌 저산소증 - 허혈을 기반으로 혈전 성 뇌졸중 모델

Encephalopathy of prematurity는 조산으로 인한 손상과 관련된 중추 신경계 이상을 포함합니다. 이 보고서는 융모막염을 모방한 자궁 내 일시적인 전신 저산소증-허혈 및 양수 내 지질다당류 투여(LPS)에 대한 임상적으로 관련된 쥐 모델, 그리고 감염 자극 및 태반 관류 부족이 CNS 발달에 미치는 관련 영향을 설명합니다.

미숙아의 모델링 뇌증은 흰쥐의 내부 - 양수 리포 폴리 사카 라이드와 태아 저산소증 - 허혈을 사용하여

신생아 뇌졸중은 조기 뇌 손상의 중요한 원인으로, 연구를 위해 일관된 국소 손상 패턴과 높은 재현성을 가진 번역 모델이 필요합니다. 이 연구는 만삭 등가 설치류에서 비출혈성, 편측성 국소 허혈-재관류 손상을 생성하기 위한 자세한 수술 절차를 설명합니다.

P10 쥐에서 신생아 뇌졸중의 과도 중간 대뇌 동맥 폐색 모델

우리는 출생 후 하루에 일방적인 경 동맥 폐색을 수행 7-10 CD-1 신생아 hypoxic-허 혈 성 (HI) 모델을 만드는 새끼 마우스와 뇌 손상의 영향을 조사. 우리는 운영 되지 않은 정상 쥐에 비해 이러한 마우스 neurobehavioral 함수 공부.

신생아 Hypoxic-허 혈 성 뇌 손상의 마우스 모델에서 Neurobehavioral 평가

이 방법은 P17 페렛에서 염증 과민성 허혈성 및 고산소 뇌 손상을 설명하여 여러 후기 조산아에서 경험한 장기간 염증과 산화 뇌 손상 사이의 복잡한 상호 작용을 모델링합니다.

염증 과민성 후기 조저산소-허혈성 뇌 손상의 페렛 모델

본 원고는 저산소증-허혈을 앓고 있는 신생아 마우스의 다중 깊이 전극을 이용한 연속 비디오 EEG 레코딩방법을 설명합니다.

신생아 쥐의 저산소증-허혈 중 연속 비디오 뇌전도

배우세요 신생아 저산소성 허혈성 뇌증 연구를 위한 쥐 모델 수술법. 좌측 경동맥 결찰과 저산소 챔버 처리 후 TTC 염색으로 뇌경색 부위를 확인하는 방법을 익혀보세요.

Perinatal 국소 빈혈의 Hypoxic 허혈성 뇌증 모델

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