Cisterna 마그나 마우스에서 뇌척수의 직렬 그룹에 대한 기술

절차는 마우스를 마취하고 수술 부위를 준비하는 것으로 시작됩니다. 그런 다음 마우스를 입체 기기에 엎드려 놓습니다. 피부의 시상 절개는 후두부보다 열등하게 만들었고, 정중선을 통한 피하 조직과 목 근육이 뭉툭하게 분리되었다.

그런 다음 몸체가 고정된 머리와 135도 각도를 이루도록 몸의 뒤쪽 부분을 눕히고, CI 흉골 마그나의 경막을 유리 모세혈관으로 관통하고 CSF를 수집합니다. CSF 샘플링 후 근육을 재정렬하고 피부를 봉합하며, 탈수를 방지하기 위해 약 1ml의 0.9% NACL 식염수를 피하에 주입하고 마우스가 회복될 때까지 따뜻하게 유지합니다. 안녕하세요, 제 이름은 컬럼비아 대학교 최고의 연구소(The Top Institute of Columbia University)의 카렌 더프(Karen Duff) 박사 연구실에서 근무하는 리우(Liu)입니다.

오늘은 마우스의 시스템 매거진에서 대뇌 척추의 유체를 수집하는 방법을 보여 드리겠습니다. 이 기술을 사용하면 2-3개월 간격으로 동일한 마우스에서 최대 3회 연속 CSF 샘플을 수집할 수 있습니다. 우리 실험실에서는 이 기술을 사용하여 알츠하이머병의 형질전환 마우스 모델의 다양한 연령에서 CSFA 베타 또는 타우 수치를 측정하고 이러한 값을 뇌의 값과 연관시킵니다.

마지막으로, 우리는 질병 진행에 대한 잠재적인 생물학적 지표로서 CSFA 베타 또는 타우 수치의 잠재력과 마우스에 대한 치료 시험에 관심이 있습니다. 시작하겠습니다. 이 절차를 위해서는 마이크로 피펫 극성으로 모세관을 만들 필요가 있습니다.

여기에 사용된 모세관은 Sutter Instruments의 BOA 규산염 유리 B 175 10으로, 열 지수는 300, 압력 지수는 300으로 설정된 Sutter P 87 화염 마이크로 피펫 극성의 모세관을 당깁니다. 유리 모세관은 길이가 5cm이고 끝이 가늘어집니다. 모세 혈관의 끝은 내경이 약 0.5mm가되도록 가위로 다듬습니다.

수술 절차는 마취 중에 복강내 투여된 케타민 100mg과 킬로그램당 10mg의 자일라진으로 마우스를 마취하고 섭씨 37도의 인큐베이터에서 마우스를 따뜻하게 유지하는 것으로 시작됩니다. 동물이 발가락 꼬집음 금단 반사로 완전히 마취되었다고 판단한 후 목을 면도한 다음 David kink의 것과 같은 입체 기구에 마우스를 놓습니다. 발열 패드와 직접 접촉하여 직장 온도 프로브를 삽입하여 패드의 열이 마우스의 체온에 따라 조정될 수 있도록 합니다.

머리 어댑터로 머리를 고정하고 10% 포비돈 요오드와 70% 에탄올로 목 피부를 3회 면봉으로 닦은 다음 머리 또는 후두부의 뒤쪽 부분보다 아래쪽 시상 절개를 만듭니다. 다음 단계는 무딘 집게를 사용하여 해부 현미경으로 수행해야 합니다. 피하 조직과 근육 M을 벤터 서비스로 분리하고 M 직근 capita dorsalis major를 분리하여 흉골 마그나의 경막 물질이 노출되도록 한 쌍의 마이크로 견인기를 적절하게 사용하여 근육을 분리하십시오.

마지막으로 머리가 몸체에 대해 135도 각도로 마우스를 눕힙니다. 이제 마우스에서 CSF를 수집할 준비가 되었습니다. 흉골 Magno에서 CSF를 수집하는 이 기술은 이전에 발표되었습니다.

C 그림 1 A는 해부 현미경 아래에 있습니다. 경막 물질은 수질과 주요 혈관이 보이는 반짝이는 투명한 역 삼각형으로 나타납니다. 동맥 경막 척추 C 그림 1 B. 수질과 인접한 CSF 공간의 순환 맥동을 볼 수 있습니다.

멸균 면봉으로 경막 물질을 닦아내고, 동맥 등쪽 척추 측방의 경막 물질을 통해 모세혈관을 CI 흉골 마그나로 침투시킵니다. 모세혈관이 올바르게 삽입되면 저항에 눈에 띄는 변화가 있고 CSF가 모세혈관으로 흘러 들어갑니다. CSF를 채취한 후 조심스럽게 모세관을 제거하고 내경이 1mm인 폴리에틸렌 튜브를 사용하여 3ml 주사기로 연결합니다.

CSF를 0.5ml 튜브에 주입합니다. 튜브에 라벨을 붙이고 드라이 아이스에 즉시 얼립니다. 일단 얼면 CSF를 섭씨 영하 80도의 냉동고로 옮깁니다.

방금 시연된 샘플링 기법은 매우 부드러우며 2-3개월 간격으로 동일한 마우스에서 후속 CSF 샘플을 채취할 수 있습니다. 따라서 목을 샘플링한 후 근육과 피부를 재정렬하고 봉합사로 봉합해야 합니다. 절개 부위를 봉합한 후 생리식염수 0.9%NACL 약 1ml를 피하주사하여 마우스에 수분을 공급합니다.

마우스가 회복될 때까지 약 섭씨 37도에서 예열한 상태로 유지하십시오. 수술 1일차와 7일차에 체중을 모니터링하십시오. 방금 마우스의 시스템 매거진에서 대뇌 척수액을 수집하는 방법을 보여 드렸습니다.

이 절차를 수행할 때 기억해야 할 세 가지 중요한 사항이 있습니다. 먼저 Cy Magna의 ator가 가능한 한 많이 노출될 수 있도록 마우스의 머리와 몸통을 정위 프레임에 적절하게 배치합니다. 둘째, 모세혈관으로 경도계를 관통할 때 혈관을 조심스럽게 피하십시오.

그렇지 않으면 샘플이 혈액에 오염될 수 있습니다. 마지막으로, 저체온증을 예방하기 위해 전체 절차 동안 마우스를 따뜻하게 유지하는 것을 잊지 마십시오. 저체온증은 생쥐에게 해로울 뿐만 아니라 베타 생산 또는 키가 큰 저인산화 관계를 유도하여 결과에 상당한 영향을 미칠 수 있습니다.

좋아요, 그게 다입니다. 지켜봐 주셔서 감사드리며 실험에 행운을 빕니다.