Een techniek wordt gepresenteerd voor de in-vivo collectie van interstitiële vloeistof monsters van weefsel relevante sites (hier, experimenteel ontstoken huid) voor het meten van biochemische bemiddelen pijn en ontsteking.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Mens in-vivo Bioassay voor de weefsel-specifieke meting van nociceptieve en ontstekingsmediatoren
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Deze in-vivo menselijke bioassay kan worden gebruikt om menselijke vrijwilligers en patiënten te bestuderen. Monsters worden verzameld van relevante sites, zoals weefsel van de huid via aseptisch ingebracht microdialyse katheters (Dermal Dialyse, Erlangen, Duitsland). Geïllustreerd in dit voorbeeld is het verzamelen van interstitiële vocht uit experimenteel ontstoken huid in menselijke vrijwilligers. Monsterneming kan gecombineerd worden met andere experimentele tests. Bijvoorbeeld, de gelijktijdige beoordeling van lokaal vrijgegeven biochemicaliën en subjectieve gevoeligheid voor pijnprikkels in experimenteel ontstoken huid biedt de kritische biochemische-gedragsmatige link naar biomarkers van pijn en ontsteking te identificeren. Gepresenteerd assay in de levende menselijke organisme zorgt voor mechanistisch inzicht in de weefsel-specifieke processen die ten grondslag liggen pijn en / of ontsteking. De methode is ook zeer geschikt om de effectiviteit van bestaande of nieuwe interventies te onderzoeken - zoals de nieuwe kandidaat-geneesmiddelen - gericht op de behandeling van pijnlijke en / of ontstekingen. Dit artikel geeft een gedetailleerde beschrijving van het gebruik van microdialyse technieken voor het verzamelen van interstitiële vloeistof uit experimenteel ontstoken huid laesie van de menselijke proefpersonen. Interstitiële vloeistof monsters worden meestal verwerkt met behulp van multiplex bead array-immunoassays waardoor het testen van maximaal 100 analyten in monsters zo klein in volume als 50 microliter.
Protocol
Inductie van experimentele ontsteking:
- Een van de eerste graad zonnebrand is veroorzaakt in niet-gebruinde huid van een dij met behulp van een gekalibreerd, ultraviolet B bron (Saalmann multitester SBB LT 499, Saalmann GmbH, Hereford, Duitsland). De verbranding door de zon wordt veroorzaakt 24 uur vóór het begin van een microdialyse experiment door het toepassen van drie maal het bedrag van de UVB-licht nodig is om volledige roodheid van de blootgestelde huid, of drie keer de minimale erytheemdosis (MED) veroorzaken. De MED wordt bepaald in elk vak voor de aanvang van de studie. Accurate levering van energie is verzekerd met een UV-meter (RM 12, Dr Grobel ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Het gecombineerde gebruik van microdialyse technieken en multiplex immunoassay technologie is een waardevolle real-time, in-vivo menselijke bioassay inzicht te geven in biochemische gebeurtenissen in weefsel van belang. Gecombineerd met gedragstesten, zoals pijn tests, de methode maakt het mogelijk het bestuderen van de complexe interacties van biochemicaliën bemiddelen pijn en ontsteking. De methode is veelbelovend voor 1) het identificeren van weefsel-specifieke biomarkers bemiddelen pijn en ontsteking, 2) het verstrekken van mechanistisc.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te melden.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen | |
|---|---|---|---|---|
| Microdialysecatheter | Instrument | Dermal Dialysis | NA | |
| Pump 22 | Instrument | Harvard Apparatus | 552219 | |
| Saalmann Multitester SBB LT 400 | Instrument | Saalmann GmbH | NA | |
| RM-12 IP-65 Radiometer | Instrument | Dr. Grobel UV Elektronik GmbH | 82120000/81112100 | |
| Complete Proteinase Inhibitor | Reagens | Roche Group | 11836145001 | |
| Microcentrifugebuisje | Instrument | E&K Scientific | 380150-X | |
| Albumine 5% | Reagens | ZLB Behring | NA | |
| Ringer-lactaat | Reagens | Hospira Inc. | NA | |
| Xylocaine-MPF | Overig | AstraZeneca | NA | |
| Spuit 1mL | Instrument | BD Biosciences | 309602 |
Referenties
- Angst, M. S., Clark, J. D., Carvalho, B., Tingle, M., Schmelz, M., Yeomans, D. C. Cytokine profile in human skin in response to experimental inflammation, noxious stimulation and administration of a COX-inhibitor: A microdialysis study. Pain. 139, 15-27 (2008).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
