Dissectie van Saccharomyces Cerevisiae Asci

Samenvatting

Micromanipulatie van de gistcellen is nodig voor de meiose genetische analyse of om diploïde zygoten te selecteren. Deze micromanipulations worden uitgevoerd met behulp van de microneedle van een dissectie microscoop. De microneedle wordt gebruikt om de cellen te verplaatsen en wordt gecontroleerd door een micromanipulator die beschikbaar zijn met een verschillende mate van automatisering.

Samenvatting

Gist is een zeer soepel model systeem dat wordt gebruikt om veel verschillende cellulaire processen te bestuderen. De gemeenschappelijke stam laboratorium

Protocol

Bouw van diploïde stammen
Protocol voor de productie van diploïden door voortplanting

1. De initiële stammen moeten worden geslagen op YPD, of selectief medium, indien nodig, om enkele kolonies te produceren. De twee haploïde stammen moeten zijn van tegengestelde mating type (dwz Mata en MATα).
2. Met behulp van een steriele enting lus kies een klein deel van een kolonie van een van de twee haploïde stammen. Op een nieuwe plaat YPD streep de lus een keer in een rechte lijn over de plaat. Markeer de richting van de streep met een pijl op de onderzijde van de plaat.
3. Herhaal dit voor de tweede stam op dezelfde YPD plaat. Dit keer streak d....

Discussie

Gist dissectie is een nuttig instrument om nieuwe stammen te selecteren met de gewenste markers. Bij het bepalen van de theoretische groeipatroon van vier ascosporen is het belangrijk om te kijken naar het genotype van het vegetatieve cel. Als er een plasmide aanwezig is, moet men weten of het is single, laag of hoog te kopiëren, omdat dit zal invloed hebben op die ascospore (s) het plasmide ontvangen en zullen van invloed zijn voorspellingen en de conclusies ten aanzien van de stammen wordt gemanipuleerd.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Singer MSM System 200	Microscoop	Singer Instruments	NA
D-sorbitol	Reagens	BioShop Canada	SOR508
Tris	Reagens	BioShop Canada	TRS001
Zymolyase 100T	Reagens	Seikagaku Corporation	120493
Gistextract	Reagens	BioShop Canada	YEX401
Peptonen	Reagens	BioShop Canada	PEP 403
D-glucose	Reagens	BioShop Canada	GLU501
Yeast nitrogen base	Reagens	BioShop Canada	YNB406
Bio-tryptonen	Reagens	BioShop Canada	TRP402
Natriumchloride	Reagens	BioShop Canada	SOD002
Kaliumacetaat	Reagens	BioShop Canada	POA 301
Agar	Reagens	BioShop Canada	AGR003
Adeninesulfaat	Reagens	BioShop Canada	ADS201
L-uracil	Reagens	BioShop Canada	URA 241
L-tryptofaan	Reagens	BioShop Canada	TRP 100
L-histidine	Reagens	BioShop Canada	HIS 200
L-arginine	Reagens	Amresco	0877-100G
L-methionine	Reagens	BioShop Canada	MET 222
L-tyrosine	Reagens	BioShop Canada	TYR 333
L-isoleucine	Reagens	BioShop Canada	ISO 910
L-valine	Reagens	BioShop Canada	VAL 201
L-lysine	Reagens	BioShop Canada	LYS 101
L-phenylalanine	Reagens	BioShop Canada	PHA 302
L-glutaminezuur	Reagens	BioShop Canada	GLU 202
L-threonine	Reagens	BioShop Canada	THR002
L-leucine	Reagens	BioShop Canada	LEU 222