Methodenartikel

Voorbereiding van de Rat Brain Aggregate Cultures for Neuron en Glia Development Studies

DOI:

10.3791/1304

⸱

30 september 2009

 , 
1Department of Veterinary Integrative Biosciences, Texas A&M University (TAMU)

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Een protocollen voor een embryonale hersenen van de rat totale cultuur-systeem is beschreven. Multipotente voorlopercellen in de aggregaten kunnen ontwikkelen en differentiëren tot neuronen, astrocyten en oligodendrocyten.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Een in vitro systeem dat recapituleert de ontwikkeling en differentiatie van voorlopers tot rijpe neuronen en glia in het centrale zenuwstelsel (CZS), zou een krachtig platform voor neurowetenschappers aan Axo-gliale interacties, eigenschappen en differentiatie van multipotente voorlopercellen, en de progressie van oligodendrogliale onderzoeken lijn cellen op cellulair en moleculair niveau. We beschrijven hier een CNS aggregaat cultuur systeem van embryonale rat forebrains, die kan worden gehandhaafd in een serum-vrij medium tot 3-4 weken en wordt in ons laboratorium als een model om neuron-glia interactie en CNS myelinisatie te bestuderen. Deze video clip zal tonen hoe te isoleren en deze CNS geaggregeerde culturen groeien van E16 rat hersenen. Bovendien, uit dezelfde hersenen dissectie, kan hoogverrijkt regelmatig los neuronale culturen gemakkelijk worden verkregen en gebruikt voor diverse studies over CNS neuronen of gebruikt worden voor co-culturen met andere cellen.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Voorbereiding voor dissectie

Chirurgische instrumenten: steriliseren alle dissectie schaar en pincet door de autoclaaf

Dekglaasje reiniging:

  1. Geniet van alle dekglaasjes (15 mm in diameter voor de 24-wells plaat) in 1L gras beker in 33% HCl voor minimaal 24 uur
  2. Wassen met stromend water gedurende 10 minuten met af en toe te schudden alle overblijvende HCl te verwijderen
  3. Spoelen met Millipore water
  4. Drainwater uit
  5. Geniet van coverslips in 95-98% ethanol
  6. Overdracht coverslips een schone tissue op een vlakke plaat en de lucht droog de de....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Vroege studies de vorming van synapsen en volwassen myeline in rotatie-gemedieerde vrij zwevende aggregaat culturen 1. De CNS totale cultuur beschreven systeem hier een combinatie van serum-vrij groei van multipotente progenitorcellen in drie dimensionale aggregaten met het gemak van de traditionele 2D-culturen om analyses van cel-ontwikkeling, migratie en differentiatie in vitro te vergemakkelijken. Het systeem kan worden aangepast en gebruikt voor neurale voorloper cel-onderzoek en voor on.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit onderzoek werd deels gefinancierd door start-up middelen uit Texas A & M University

....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Matthieu, J. M. Myelination in rat brain aggregating cell cultures. Neuroscience. 3, 565-56 (1978).
  2. Chen, Y. ing Isolation and culture of rat and mouse oligodendrocyte precursor cells. Nat. Protocols. 2, 1044-10 (2007).
  3. Watkins, T. A., Emery, B., Mulinyawe....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Kweek van CNS progenitorsembryonale rattenvoorhersenenenzymatische celdissociatieprotocol voor aggregaatvormingmet Matrigel gecoate dekglasjesneuronale gliale ontwikkelingCNS myelinisatiemodelgedissocieerde neuronale kweekcellsievingtechniek

Gerelateerde artikelen