Bijen kunnen worden geconditioneerd in een appetitief olfactorische leren paradigma (PER-conditioning). Het gebruik van geuren als prikkels, hebben we een methode waarin het gedrag wordt vastgelegd, terwijl tegelijkertijd Calcium Imaging wordt gebruikt om de geur oproept activiteit te meten in champignon lichaam neuronen In vivo.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
In vivo Ca 2 + - Beeldvorming van Mushroom Body neuronen tijdens Olfactorische Leren in de Honey Bee
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De in vivo en semi-in vivo voorbereiding voor Calcium beeldvorming is ontwikkeld in ons laboratorium door Joerges, Kuttner en Galizia meer dan tien jaar geleden, aan geur opgeroepen activiteit te meten in de antennale lob 1. Vanaf dat moment is het voortdurend verfijnd en toegepast op verschillende neuropiles in de bij hersenen. We beschrijven hier de voorbereiding die momenteel worden gebruikt in het lab om de activiteit te meten in champignon lichaam neuronen met behulp van een dextran gekoppeld calcium-gevoelige kleurstof (Fura-2). We retrogradely vlek paddestoel lichaam neuronen door het injecteren van kleurstof in hun axonen of soma regio. Wij richten ons op het verminderen van de invasiviteit, om een voorbereiding waarin het nog steeds mogelijk om te trainen met behulp van de bij PER conditionering te bereiken. Wij zijn in staat om toezicht te houden en te kwantificeren de gedragsmatige respons door het opnemen van electro-myograms van de spier die de PER (M17) 2 controles.
Na de fysiologische experiment de verbeelde structuren worden onderzocht in meer detail met behulp van confocale scanning microscopie om de identiteit van de neuronen te pakken.
Protocol
Bee Voorbereiding en Back-fill
- Catch honingbij voedermachines bij bijenkorf en chillen op het ijs voor immobilisatie.
- Mount in plexiglas opname kamers 3. Fix ogen en thorax aan de wanden van de opname kamer met een laag smeltpunt harde was.
- Trek glazen capillairen zoals vaak gebruikt voor elektrofysiologie en breken bij de tip om een tip diameter van ca. verkrijgen. 10μm. Cover topje van de capillair met kleurstof pasta. Dye pasta bestaat uit een 10:01 mengsel van Fura-2 dextran en lysine altijd op de juiste tetramethylrodamine dextran.
- Voor de kleuringsprocedure immobiliseren antennes met kleinigheden of n-eicosa....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
In deze presentatie hebben we doorlopen alle stappen om te onderzoeken in vivo calcium signalen in de honingbij. We pasten deze techniek paddestoel lichaam neuronen, maar beeldvorming kan worden gedaan op alle neuronen waarvoor een kleuring techniek kan worden vastgesteld. Hebben we ons gericht op de neuronen in de olfactorische route van de honingbij. De experimenten zijn uitgevoerd in een donkere kamer. De set up is verlicht met een lange golf licht dat uit leugens van de optische waarneming bereik van de hon.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Dankbetuigingen
Dit werk wordt gefinancierd door de DFG.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| harde was met laag smeltpunt Deiberit 502 | Dr. Böhme Schöps Dental GmbH | ||
| FURA-2 dextraankaliumzout, 10 000 MW | Invitrogen | F-3029 | Beschermen tegen licht. |
| tetramethylrhodamine dextran 10 000 MW | Invitrogen | D-3312 | Beschermen tegen licht. |
| n-eicosaan | Sigma-Aldrich | 21, 927-4 | |
| Kwik Sil adhesief | World Precision Instruments, Inc. | KWIK SIL | |
| Imaging-opstelling | TILL Photonics | ||
| CCD-camera | Imago | ||
| CED | Texas Instruments |
Referenties
- Joerges, J., Küttner, A., Galizia, C. G., Menzel, R. Representations of odors and odor mixtures visualized in the honeybee brain. Nature. 387 (6630), 285-288 (1997).
- Rehder, V. Quantification of the honeybee's proboscis reflex by electromyiographic recordings....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
