Method Article

Cultuur van Mouse Neurale Stem Cell Voorlopers

DOI:

10.3791/152

February 25th, 2007

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze video beschrijft de methode die wordt gebruikt voor het isoleren van neuroprecursors uit de ontwikkelingslanden cortex van embryonale muizen. De procedure voor het verwijderen van embryo's uit de baarmoeder, het ontleden van de corticale weefsel, en verteren de geïsoleerde cerebrale cortex wordt weergegeven.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Primaire neurale stamcellen culturen zijn nuttig voor het bestuderen van de mechanismen die ten grondslag liggen aan het centrale zenuwstelsel ontwikkeling. Stamcelonderzoek zal ons begrip van het zenuwstelsel en kan ons in staat stellen om behandelingen voor momenteel ongeneeslijke hersenziekte ziekten en verwondingen te ontwikkelen. Daarnaast moet stamcellen worden gebruikt voor stamcelonderzoek gericht op de gedetailleerde studie van de mechanismen van neurale differentiatie en transdifferentiatie en de genetische en omgevingsfactoren signalen die direct de specialisatie van de cellen in bepaalde celtypes. Deze video demonstreert een techniek die gebruikt wordt om cellen van de embryonale dag 12,5 muis dorsale voorhersenen splitsen. De dissectie procedure omvat het oogsten E12.5 muis embryo's uit de baarmoeder, het verwijderen van de "skin" met fijne ontleden tang en uiteindelijk het isoleren van stukjes van de cerebrale cortex. Na de dissectie, is het weefsel verteerd en mechanisch gescheiden. De geresuspendeerde gescheiden cellen worden vervolgens gekweekt in "stamcel" media dat de groei van neurale stamcellen gunsten.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Muis neurale precursoren (NPC's) werden geïsoleerd uit embryo E12.5 cortex.
  2. Huid-en mesenchymale lagen werden verwijderd uit ontleed telencephalic blaasjes.
  3. Blaasjes werden geïncubeerd in 0,05% trypsine met 0,02% EDTA en 0,2% BSA in HBSS gedurende 20 minuten bij 37 ° C.
  4. Trypsinisatie werd gestopt door een gelijk volume van 1 mg / ml soja trypsine-remmer (Sigma # T6522) in HBSS.
  5. Tissue digesten werden losgemaakt met behulp van verschillende rondes van tritureren met vuur gepolijst pasteurpipetten.
  6. Cellen werden eenmaal gewassen met 0,2% BSA in HBSS en uitgeplaat op 50.000 cellen / ml op laminine-gecoate dekglaasjes in de media met....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Grote vooruitgang in ons begrip van CNS ontwikkeling en stamcelbiologie zijn mogelijk gemaakt door ons vermogen om te oogsten, te isoleren en cultuur embryonale neurale stamcellen. Deze video toont de ontleding van E12.5 muis hersenschors en de daaropvolgende disaggregatie en het kweken van embryonale neurale stamcellen. Veel andere andere, soortgelijke middelen zijn succesvol toegepast door andere onderzoekers.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Straight Iris ScissorsToolFine Science Tools14060-11
Medium ScissorsToolFine Science Tools15024-10
Micro ScissorsToolFine Science Tools15002-08
Bent ForcepsToolFine Science Tools11251-35

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).
  2. Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of hu....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Neural Stem CellsMouse Embryo DissectionCerebral Cortex IsolationTissue DigestionMechanical DissociationLaminin CoatingPoly D LysineFlow CytometryHema CytometerStem Cell Media

Related Articles