Aorta Ring Assay

Summary

Angiogenese, is het kiemen van de bloedvaten van de reeds bestaande vaatstelsel, verbonden aan zowel natuurlijke en pathologische processen. Hier laten we zien een aorta-ring-test die het mogelijk maakt angiogene potentiators en remmers direct worden toegevoegd aan aorta-ringen in cultuur. Kieming en uitgroei neovessel kan worden bepaald door het inspecteren van de aorta-ringen over een periode van 6-12 dagen.

Abstract

Angiogenese, is het kiemen van de bloedvaten van de reeds bestaande bloedvaten geassocieerd met zowel natuurlijke en pathologische processen. Verschillende angiogenese assays betrekking hebben op de studie van individuele endotheelcellen in kweekomstandigheden (1). De aorta-ring test is een angiogenese model dat is gebaseerd op de orgelcultuur. In deze test, angiogene schepen groeien van een deel van de aorta (gewijzigd van (2)). In het kort, de muis thoracale aorta is uitgesneden, zijn de vetlaag en de adventitia verwijderd, en ringen van ongeveer 1 mm lang worden voorbereid. Individuele ringen zijn vervolgens ingebed in een kleine vaste koepel van kelder matrix extract (BME), cast binnen afzonderlijke wells van een 48-well plaat. Angiogene factoren en remmers van angiogenese kan direct worden toegevoegd aan de ringen, en een gemengde co-cultuur van aorta-ringen en andere celtypes gebruik kunnen worden gebruikt voor de studie van de paracriene angiogene effecten. Kiemen wordt waargenomen door de inspectie onder een stereomicroscoop over een periode van 6-12 dagen. Vanwege de grote variatie wordt veroorzaakt door de onregelmatigheden in de aorta segmenten, experimenten in de 6-plicates is sterk aangeraden. Neovessel uitgroei wordt bewaakt het hele experiment en beeld gebracht met behulp van fase microscopie, en de supernatanten worden verzameld voor het meten van de relevante angiogene en anti-angiogene factoren, celdood markers en nitriet.

Protocol

Een dag voor het experiment:

1. Laat BME (verminderde groei factor, Cultrex, Trevigen) te ontdooien op ijs of bij 4 ° C, eenmaal ontdooid te houden op het ijs opnieuw te stollen te voorkomen.

Dag van het experiment:

1. Muizen (6-7 weken oud) worden verdoofd en bloedde uit.
2. Verwijder de thoracale aorta in een petrischaal gevuld met koude steriele PBS.
3. Voer de mechanische reiniging van de omliggende vetweefsel. Let op, voorkomen dat ze uitdrogen van de aorta op elk moment.
4. Met behulp van een chirurgisch mes, slice Aorta gelijkmatig in een mm ringen. De snede moet uniform zijn en schoon zij....

Discussion

Aorta-ring-test is een gunstig hulpmiddel op de weg te evalueren angiogene en anti-angiogene factoren. De schepen die uit groeien van aorta-ringen werven gladde spiercellen en pericyten te associëren met de endotheelcellen buis, wat betekent dat ze anatomisch vergelijkbaar met neovessels in vivo. Bovendien is de muis aorta-ring test houdt het voordeel van de enorme serie van transgene tools beschikbaar voor deze soort. Toch zijn er verschillende nadelen aan de aorta-ring test. Eerste schepen uitgroei in viv.......