Dit artikel beschrijft de procedures van een experimentele metastase test die wordt gebruikt om de metastatisch potentieel van kanker bij de mens cellijnen te bepalen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Metastase is de belangrijkste oorzaak van overlijden bij patiënten met kanker. Om te begrijpen van het mechanisme van metastase, was een experimenteel metastase assay bepaald aan de hand immunodeficiënte muizen. Dit artikel schetst de procedures die in deze test, inclusief monstervoorbereiding, intraveneuze injectie, en het kweken cellen van longmetastasen. In het kort werden een vooraf bepaald aantal van menselijke kankercellen voorbereid
Protocol
1. Monstervoorbereiding
- Grow cellen ~ 70% confluent in hun specifieke media met groeifactoren of FBS (bijvoorbeeld DMEM met 10% FBS voor de MC-1-cellen). Aspireren media van plaat-en voorzichtig een paar keer wassen met 1 x PBS (8 g / L NaCl, 0,2 g / L KCl, 1,15 g / L van Na 2 HPO 4 0.7 H 2 O, 0,2 g / L van KH 2 PO 4, pH 7,3).
- Aspireren PBS en voeg 2 ml van 0,05% trypsine in Versene (0,014 g / L van fenol rood en 0,2 g / L EDTA-Na in 1 x PBS, pH 7,2). Schud plaat cel onthechting te vergemakkelijken van de plaat. Let op de cellen onder een microscoop. Het duurt meestal 2-5 minuten voor de cell....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Metastase is de belangrijkste oorzaak van overlijden bij patiënten met kanker. Het gaat om vier belangrijke stappen: losmaken van kankercellen uit hun primaire loci, in het verkeer brengen (intravasation), hun exit uit de circulatie (extravasatie), en overleving en de groei in een verre orgaan. Metastasen in de mens wordt beschouwd als een langzaam proces en vaak gemanifesteerd na jaren van latentie. Het bestuderen van de progressie in een tijdig, was de bovenstaande relatief snel experimentele test opgericht in immunod.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Dankbetuigingen
Dit protocol werd getest en geoptimaliseerd in eerste instantie in het laboratorium van Dr Richard Hynes (MIT). De financiering wordt verstrekt door de NYSTEM IDEA Award (voor LX) en Ruth L. Kirschstein National Research Service Award (voor LX).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 10313-021 | |
| FBS | Hyclone | SH30088.03 | |
| HBSS | Invitrogen | 14175-095 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S9888 | |
| KCl | Mallinckrodt Baker Inc. | 6838-04 | |
| Na2 HPO4.7H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 7896-04 | |
| KH2PO4 | Mallinckrodt Baker Inc. | 7100-12 | |
| Fenolrood | Sigma-Aldrich | P3532 | |
| EDTA-Na | EMD Millipore | 4010 | |
| Trypanblauw | Invitrogen | 15250-061 | |
| Trypsine 2,5% | Invitrogen | 15090-046 | |
| Ethanol | Ultrapure | 200-CSGP | |
| 50 ml Falcon-buis | VWR international | 89039-656 | |
| Microcentrifugebuisjes | Axygen Scientific | MCT-175-C | |
| Falcon 70μm celzeef | BD Biosciences | 352350 | |
| 5 ml Falcon-kweekbuis | VWR international | 60818-576 | |
| Hemocytometer | Hausser Scientific | 15170-208 | |
| 1 ml spuit | BD Biosciences | 329650 | |
| 30 ½ gauge naald | BD Biosciences | 305106 | |
| Muishouder | Plas Labs Inc. | 551-BSRR | |
| Chirurgische schaar | Fisher Scientific | 08-940 | |
| Pincet | Fisher Scientific | 08-902 | |
| Dissectiemicroscoop | Nikon Instruments | SMZ1500 | |
| Benchtop-centrifuge | Thermo Fisher Scientific, Inc. | 75003491 |
Referenties
- Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
- Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis r....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
