Methodenartikel

Experimentele Metastase Assay

DOI:

10.3791/1942

⸱

24 augustus 2010

 , 
1Department of Biomedical Genetics, University of Rochester Medical Center, 2Department of Dermatology, University of Rochester Medical Center

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit artikel beschrijft de procedures van een experimentele metastase test die wordt gebruikt om de metastatisch potentieel van kanker bij de mens cellijnen te bepalen.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Metastase is de belangrijkste oorzaak van overlijden bij patiënten met kanker. Om te begrijpen van het mechanisme van metastase, was een experimenteel metastase assay bepaald aan de hand immunodeficiënte muizen. Dit artikel schetst de procedures die in deze test, inclusief monstervoorbereiding, intraveneuze injectie, en het kweken cellen van longmetastasen. In het kort werden een vooraf bepaald aantal van menselijke kankercellen voorbereid

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Monstervoorbereiding

  1. Grow cellen ~ 70% confluent in hun specifieke media met groeifactoren of FBS (bijvoorbeeld DMEM met 10% FBS voor de MC-1-cellen). Aspireren media van plaat-en voorzichtig een paar keer wassen met 1 x PBS (8 g / L NaCl, 0,2 g / L KCl, 1,15 g / L van Na 2 HPO 4 0.7 H 2 O, 0,2 g / L van KH 2 PO 4, pH 7,3).
  2. Aspireren PBS en voeg 2 ml van 0,05% trypsine in Versene (0,014 g / L van fenol rood en 0,2 g / L EDTA-Na in 1 x PBS, pH 7,2). Schud plaat cel onthechting te vergemakkelijken van de plaat. Let op de cellen onder een microscoop. Het duurt meestal 2-5 minuten voor de cell....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Metastase is de belangrijkste oorzaak van overlijden bij patiënten met kanker. Het gaat om vier belangrijke stappen: losmaken van kankercellen uit hun primaire loci, in het verkeer brengen (intravasation), hun exit uit de circulatie (extravasatie), en overleving en de groei in een verre orgaan. Metastasen in de mens wordt beschouwd als een langzaam proces en vaak gemanifesteerd na jaren van latentie. Het bestuderen van de progressie in een tijdig, was de bovenstaande relatief snel experimentele test opgericht in immunod.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit protocol werd getest en geoptimaliseerd in eerste instantie in het laboratorium van Dr Richard Hynes (MIT). De financiering wordt verstrekt door de NYSTEM IDEA Award (voor LX) en Ruth L. Kirschstein National Research Service Award (voor LX).

....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
DMEMInvitrogen10313-021
FBSHycloneSH30088.03
HBSSInvitrogen14175-095
NaClSigma-AldrichS9888
KClMallinckrodt Baker Inc.6838-04
Na2 HPO4.7H2OMallinckrodt Baker Inc.7896-04
KH2PO4Mallinckrodt Baker Inc.7100-12
Phenol redSigma-AldrichP3532
EDTA-NaEMD Millipore4010
Trypan BlueInvitrogen15250-061
Trypsin 2.5%Invitrogen15090-046
EthanolUltrapure200-CSGP
50 ml Falcon TubeVWR international89039-656
Microcentrifuge TubesAxygen ScientificMCT-175-C
Falcon 70μm Cell StrainerBD Biosciences352350
5ml Falcon Culture TubeVWR international60818-576
HemacytometerHausser Scientific15170-208
1 ml syringeBD Biosciences329650
30 ½ gauge needleBD Biosciences305106
Mouse restrainerPlas Labs Inc.551-BSRR
Surgical scissorsFisher Scientific08-940
ForcepsFisher Scientific08-902
Dissecting MicroscopeNikon InstrumentsSMZ1500
Benchtop CentrifugeThermo Fisher Scientific, Inc.75003491

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
  2. Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis r....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Injectie in de staartimmuundefici nte muizenlongmetastasencelkweekcellevensvatbaarheiddissectiemicroscoopmetastatisch vermogenkankercellijnenkwantificering van metastasen

Gerelateerde artikelen