Fly Climbing Assay: een methode om algemene voortbeweging in Drosophila melanogaster te testen

Samenvatting

Bron: Gevedon, O., et al. In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster. J.Vis. Exp. (2019).

Deze video beschrijft een eenvoudige methode om vliegbeweging te kwantificeren en toont de uitgevoerde klimtest.  De vliegklimtest is een algemene test van de motorische functie die afhankelijk is van een negatieve geotaxis-respons.

Protocol

Dit protocol is een fragment uit Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).

1. Klimtest (Aangepast van Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))

1. Valideer de klimtest. Test in deze studie de klimtest op basis van eerder beschreven methodologie door Ali et al., met behulp van Elav^C155>UAS-Tau^R406W (met lagere klimkansen) en Elav^C155>UAS-GFP (controle) en Elav^C155>UAS-mCherry (controle) vliegen.
2. Draai de vliegen in een testkamer, één lijn per keer (gebruik geen CO 2-anesthesie) en laat ze 5 minuten herstellen. Als het testen op verschillende dagen wordt uitgevoerd, voert u de test op hetzelfde tijdstip van de dag uit. In deze studie werden alle klimtesten 's middags uitgevoerd om te controleren op circadiaanse effecten op de voortbeweging.
   OPMERKING Vermijd het blootstellen van de vliegen aan direct zonlicht tijdens het testen; dit zal hun klimvermogen verstoren.
3. Tik met geweld op de kamer (gemarkeerde kant naar beneden) op een muismat die 3 keer op een stevig oppervlak is geplaatst, zodat alle vliegen de test onderaan beginnen. Observeer vliegbeweging over een periode van 10 s.
4. Registreer het aantal vliegen dat de 5 cm-lijn binnen deze tijd bereikt of passeert, evenals het totale aantal geteste vliegen. Herhaal het protocol en wacht 1 minuut tussen elke proefversie op minimaal 3 proefrelicaties per regel.
   OPMERKING In deze studie bevatte elke flacon tussen 2 en 19 vliegen voor de eerste screening (mannelijke vliegen) en tussen 6 en 21 vliegen voor de mutante deficiëntieanalyse van gekruiste vrouwelijke lijnen.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package