Dit protocol is een fragment uit Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).
1. Klimtest (Aangepast van Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))
<ol><li>Valideer de klimtest. Test in deze studie de klimtest op basis van eerder beschreven methodologie door Ali et al., met behulp van ElavC155>UAS-TauR406W (met lagere klimkansen) en ElavC155>UAS-GFP (controle) en ElavC155>UAS-mCherry (controle) vliegen.</li>
	<li>Draai de vliegen in een testkamer, één lijn per keer (gebruik geen CO 2-anesthesie) en laat ze 5 minuten herstellen. Als het testen op verschillende dagen wordt uitgevoerd, voert u de test op hetzelfde tijdstip van de dag uit. In deze studie werden alle klimtesten 's middags uitgevoerd om te controleren op circadiaanse effecten op de voortbeweging. OPMERKING Vermijd het blootstellen van de vliegen aan direct zonlicht tijdens het testen; dit zal hun klimvermogen verstoren.</li>
	<li>Tik met geweld op de kamer (gemarkeerde kant naar beneden) op een muismat die 3 keer op een stevig oppervlak is geplaatst, zodat alle vliegen de test onderaan beginnen. Observeer vliegbeweging over een periode van 10 s.</li>
	<li>Registreer het aantal vliegen dat de 5 cm-lijn binnen deze tijd bereikt of passeert, evenals het totale aantal geteste vliegen. Herhaal het protocol en wacht 1 minuut tussen elke proefversie op minimaal 3 proefrelicaties per regel. OPMERKING In deze studie bevatte elke flacon tussen 2 en 19 vliegen voor de eerste screening (mannelijke vliegen) en tussen 6 en 21 vliegen voor de mutante deficiëntieanalyse van gekruiste vrouwelijke lijnen.</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>VWR&amp;reg; Drosophila Vial; Narrow</td><td>VWR</td><td>75813-160</td><td></td></tr><tr><td>VWR&amp;reg; General-Purpose Laboratory Labeling Tape</td><td>VWR</td><td>89097-912</td><td></td></tr><tr><td>Standard mouse pad</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereoscope</td><td>Motic</td><td></td><td>Model SMZ-168</td></tr><tr><td>Drosophila Incubator</td><td>VWR</td><td>89510-750</td><td></td></tr><tr><td>R software package</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fly climbing assay: een methode om algemene voortbeweging in drosophila melanogaster te testen

Fly Climbing Assay: A Method to Test General Locomotion in Drosophila melanogaster

Bron: Gevedon, O., et al. <a href="https://www.jove.com/video/59720/in-vivo-forward-genetic-screen-to-identify-novel-neuroprotective">In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster</a>. J.Vis. Exp. (2019).
Deze video beschrijft een eenvoudige methode om vliegbeweging te kwantificeren en toont de uitgevoerde klimtest.  De vliegklimtest is een algemene test van de motorische functie die afhankelijk is van een negatieve geotaxis-respons.

Fly Climbing Assay: een methode om algemene voortbeweging in Drosophila melanogaster te testen

Source: Gevedon, O., et al. In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).
This ...

-First, obtain a set number of adult Drosophila. The testing chamber for the climbing assay is composed of two vials taped together. One of these vials should be marked with a line. Without carbon dioxide anesthesia, which can impair climbing behavior, transfer a set number of flies to the testing chamber. Allow the flies to recover for a predetermined amount of time. With the marked side of the chamber down, firmly tap the chamber on a mouse pad placed on a solid surface. This will force the flies to the bottom of the chamber. The climbing assay takes advantage of Drosophila's natural tendency to climb upwards against gravity, a behavior called negative geotaxis. During the trial, the flies shouldn't be exposed to direct sunlight because the flies might display phototaxis behavior, or movement in response to light stimulus. Record the number of flies that reach or pass the line. Then obtain the percent pass rate by dividing this number by the total number of flies tested. Allow the flies to recover before repeating the trial. In the example, we will observe a fly climbing assay being used to assess Drosophila motor function after chemical mutagenesis. -To begin, collect homozygous flies from lines belonging to the ENU mutagenized collection of Drosophila mutants mapped to the second chromosome. Flip the flies aged 10 to 12 days into a testing chamber without anesthesia one line at a time and allow them to recover for five minutes. With the five-centimeter line marked side down, forcibly tap the chamber three times on a mouse pad placed on a solid surface so that all flies begin the assay at the bottom. Observe fly locomotion over a period of 10 seconds. Record the number of flies that reach or pass the five-centimeter line within this time as well as the total number of flies tested. Wait one minute before starting a second trial. Repeat a minimum of three trial replicates per line.

fly-climbing-assay-method-to-test-general-locomotion-drosophila

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

Biologie

Drosophila melanogaster (fruit fly)

Drosophila melanogaster (fruitvlieg)

Adult

Volwassene

14.0K Views. -Eerst, verkrijg een vast aantal volwassen Drosophila. De testkamer voor de klimtest bestaat uit twee op elkaar vastgeplakte buisjes. Een van deze buisjes moet gemarkeerd zijn met een lijn. Zonder koolzuurverdoving, die het klimgedrag kan verstoren, breng een vast aantal vliegen over naar de testkamer. Laat de vliegen een vooraf bepaalde tijd herstellen. Met de gemarkeerde kant van de kamer naar beneden, tik stevig op de kamer op een muismat die op een stevige ondergrond ligt. D...

Fly Climbing Assay: een methode om algemene voortbeweging in Drosophila melanogaster te testen

Abstract

Protocol

<table><tbody><tr><td>VWR&reg; Drosophila Vial; Narrow</td><td>VWR</td><td>75813-160</td><td></td></tr><tr><td>VWR&reg; General-Purpose Laboratory Labeling Tape</td><td>VWR</td><td>89097-912</td><td></td></tr><tr><td>Standard mouse pad</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereoscope</td><td>Motic</td><td></td><td>Model SMZ-168</td></tr><tr><td>Drosophila Incubator</td><td>VWR</td><td>89510-750</td><td></td></tr><tr><td>R software package</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Fly Climbing Assay: een methode om algemene voortbeweging in Drosophila melanogaster te testen

In dit artikel

Samenvatting

Protocol

Materialen

Trefwoorden

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package