Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Drosophila Neuromusculaire junction (NMJ) kwantificering: een methode om synaptische morfologie en functie te beoordelen

4.8K weergaven

30 april 2023

In dit artikel

Samenvatting

Bron: Castells-Nobau, A., et al. Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology. J.Vis. Exp. (2017).

De Drosophila neuromusculaire verbinding (NMJ) wordt gebruikt als model om de morfologie en functie van synapsen te bestuderen. Deze video beschrijft belangrijke kenmerken die onderzoekers kwantificeren om de NMJ te karakteriseren. Het voorbeeldprotocol demonstreert een software die de kwantificering automatisch kan uitvoeren.

Protocol

Dit protocol is een uittreksel uit Castells-Nobau et al., Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology, J. Vis. Exp. (2017).

1. Vereisten voorafgaand aan beeldverwerking

  1. Voer Drosophila open boekpreparaten uit van derde instar zwervende larven (L3), zoals eerder beschreven.
  2. Co-immunolabel Drosophila NMJ terminals met behulp van een combinatie van twee markers: Dlg-1 of Hrp samen met Brp voor analyse met "Drosophila NMJ Morphometrics", en Syt of Csp samen met Brp voor analyse met "Drosophila<....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

figure-results-1
Figuur 1: Voorbeelden van ongepaste macrosegmentatieresultaten. Resultaat afbeeldingen na het uitvoeren van "Drosophila NMJ Morphometrics" of "Drosophila NMJ Bouton Morphometrics". Delen van de synaptische terminal zijn niet opgenomen in de gele omtrek (A). Delen van de achtergrond worden in de synaptische terminal opgenomen door de gele omtrek (B). Blauwe skeletlijn str.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
<strong>Immunostaining</strong>Dilution
Mouse anti-discs large 1Developmental Studies Hybridoma BankAFFN-DLG1-4D61/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit)
Rabbit anti-horseradish peroxidaseJackson IR323-005-0211/500
Rabbit anti-SynaptotagminGift from Hugo BellenJan-00
Mouse anti-Cysteine string proteinDevelopmental Studies Hybridoma BankDCSP-1(ab49)1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit)
Mouse anti-BruchpilotDevelopmental Studies Hybridoma Banknc82Jan-50
Goat anti-mouse Alexa Fluor 488Life technologiesA110291/200
Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568Life technologiesA110111/500
Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling KitThermoFisherZ25006
ProLong Gold Antifade MountantThermoFisherP36930
<strong>Equipment</strong>
Confocal microscope or fluorescence microscopeLeica SP5
Zeiss Axio imager
ComputerMac or Pc
<strong>Software</strong>
FIJI

Tags

Drosophila NMJbeeldanalysemicroscopische kwantificeringDLG1-markerBRP-markerbouton-analyseactieve zonesmorfometrische software