Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Lokale hittesondetest: een methode om nociceptie van hoge temperaturen bij Drosophila-larven te beoordelen

1.5K weergaven

30 april 2023

In dit artikel

Samenvatting

Bron: Chattopadhyay, A., et al. Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae. J.Vis. Exp. (2012).

Drosophila-larven hebben speciale sensorische neuronen - nociceptoren - waarvan de reactie op potentieel schadelijke thermische stimuli aversief - of zogenaamd "nocifensief" - gedrag bij het dier veroorzaakt. Deze video beschrijft een methode om thermische nociceptie te beoordelen door larvaal gedrag op te nemen als reactie op lokale toepassing van een warmtesonde op de cuticula. Deze methode wordt daarom de lokale hittesondetest genoemd.

Protocol

Dit protocol is een uittreksel uit Chattopadhyay et al., Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2012).

1. Lokale hittesondetest

We leveren een schadelijke thermische stimulus aan een individueel larvaal lichaamssegment met behulp van een op maat gemaakte thermische sonde vervaardigd door Pro-Dev Engineering (zie tabel met materialen). Hoewel deze sonde optimale ontwerpkenmerken heeft (een kleine metalen punt van ~ .07 mm2 gebied en de mogelijkheid om een ingestelde punttemperatuur nauwkeurig te handhaven van 23 °C tot 65 °C....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

figure-results-1
Figuur 1: Experimentele opstelling voor lokale warmtesondetest. De warmtesonde wordt aangestuurd door een thermische regeleenheid die wordt gebruikt om de temperatuur van de sonde in te stellen en te handhaven. De sonde wordt loodrecht op de anteroposterior-as gehouden en gebruikt om de larve onder een hoek van 45° ten opzichte van het horizontale vlak te stimuleren. Sondecontact wordt specifiek gemaakt bij abdominale seg.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Thermal ProbePro-Dev EngineeringCustom-built on demandContact information can be provided on request
Leica DFC290 12v/400mA Color cameraLeica Microsystems12730080Any equivalent camera will do.
Leica MZ6 microscopeLeica MicrosystemsPart number for MZ6 zoom body (optics carrier) is 10445614
Schott Ace Modulamp UnitSchott AGA20500
Schott Dual Gooseneck 23 inch Fiber Optic Light GuideSchott AGSchott A08575
Thermal Control UnitTSCI corp.Custom BuiltDetails can be provided on request
Zeiss Stemi 2000 microscopeCarl Zeiss, Inc.NT55-605Any equivalent microscope will do.
ForcepsFine Science ToolsFS-1670
PaintbrushBlick Art Materials06762-1002
35 X 10 mm Polystyrene Petri DishFalcon BD351008We have not tested alternative dishes.
Piece of vinylOffice Depot480009

Trefwoorden

Thermische nociceptieactivering van nociceptorenterugtrekreflexlokale hitteapplicatielarven in het derde stadiumstimulatie van sensorische neuronenmeting van gedragslatentiethermo nociceptief gedrag