Temperatuurgradiënttest: een methode om de temperatuurvoorkeur bij Drosophila-larven te testen

Abstract

Bron: Liu, J., et al. A Temperature Gradient Assay to Determine Thermal Preferences of Drosophila Larvae. J.Vis. Exp. (2018).

Drosophila-fruitvliegen kunnen kleine temperatuurveranderingen onderscheiden en daarom omgevingen met gunstige thermische omstandigheden selecteren. Deze video beschrijft een gedragstest die de temperatuurvoorkeur van Drosophila-larven test op een lineaire thermische gradiënt.

Protocol

Dit protocol is een uittreksel uit Liu et al. Een temperatuurgradiënttest om thermische voorkeuren van Drosophila-larven te bepalen, J. Vis. Exp. (2018).

1. Temperatuurverloop instellen

1. Eenrichtingsgradiënt voorbereiden
   1. Om tijdens de test een vochtige omgeving te creëren, plaatst u de twee aluminium blokken die zijn verbonden met twee waterbaden op natte papieren handdoeken, gescheiden door 10 cm (figuur 1A).
   2. Zet de twee waterbaden ~2 uur aan voordat u de test start om voldoende tijd te hebben voor de temperatuur van de aluminiumblokken om....

Results

Figuur 1: Enkele en bidirectionele gradiënttestopstellingen. (A) Single-directionele gradiënt setup met twee aluminium assay platen op twee aluminium blokken. De temperaturen van de aluminium blokken worden geregeld door circulerend water uit twee waterbaden. (B) De opstelling van de drie aluminium blokken, waterbaden en een aluminium plaat (250 x 220 mm) voor een bidirectionele gradiënt........

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Gradient assay apparatus
PolyScience 9106, Refrigerated/Heated 6L Circulating Bath	Thomas Scientific	9106	This model is discontinued. Updated replacement models include: 1186R00 and 1197U04 for 120 V, 60 Hz, or 1184L08 and 1197U04 for 240 V, 50 Hz.
Aluminum assay plate (for single directional gradient)			Outer size: 14 x 10.1 x 0.9 cm, inner size: 12.9 x 8.7 x 0.8 cm, black anodized.
Aluminum plate (for bidirectional gradient)			25 x 22 x 0.2 cm, black anodized.
Aluminum block			Outer size: 25.5 x 5 x 1.4 cm, parameters of inner channels are shown in Figure 1D.
Connector for aluminum blocks and tubing	McMaster-Carr	91355K82
Tygon Sanitary Silicone Tubing	Tygon	57296	1/4" ID x 3/8" OD x 1/16" wall
Name	Company	Catalog Number	Comments
Items and reagents for assay
Pestle	USA Scientific	17361	Pestle for 1.5 mL microcentrifuge tubes
Thermometer	Fluke	51II
Thermocouple	Fluke	K type
Universal microplate lid	Corning	6980A77
35 mm dish	Corning	9380D40
Labeling tape (for bidirectional gradient)	Fisher Scientific	15-951	Fisherbrand labeling tape 2 in x 14 yds
Agarose	Invitrogen	16500500	Prepare 1% solution
Sucrose	Sigma	S0389-5KG	Prepare 18% solution right before starting assay
Paint brush	Fisher Scientific	11860
50 mL centrifuge tubes	Denville	C1062-P
Scoopula	Fisher Scientific	14-357Q
500 mL round wide-mouth bottle	Pyrex	1395-500
Cell strainer (300 mm pore)	PluriSelect	43-50300	Optional item for larvae washing
Cardboard box (vial tray)	Genesee Scientific	FS32-124