Methodenartikel

Larvale voortbewegingstest: methode met hoge doorvoer om neurobehaviorale toxiciteit van een verbinding in zebravislarven te bestuderen

30 april 2023

In dit artikel

Samenvatting

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bron: Zhang B., et al. Het bestuderen van Neurobehavioral Gevolgen van Milieuverontreinigende stoffen op Zebrafish Larven. J.Vis. Exp. (2020)

Dit artikel beschrijft de gedragsreactie van zebravissen op giftige verbindingen door de larvebeweging te monitoren. Het protocol kijkt verder naar een voorbeeld van de reactie van zebravislarven op milieuverontreinigende stoffen.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Voorbereiding op de gedragstest

  1. Breng 800 μL belichtingsoplossing over in elke put van de 48 putmicroplaat.
    OPMERKING: Gebruik 16 putten voor elke groep (d.w.z. de regeloplossing, 5 μg/L en 50 μg/L-groep).
  2. Gebruik een pipetpunt van 1 ml om 200 μL belichtingsoplossing met één larve uit de glazen petrischaal over te brengen in één put van de 48 putmicroplaat.
  3. Breng 4 ml belichtingsoplossing over in elke put van de 6-putmicroplaat.
    OPMERKING: Gebruik een 6 put microplate voor elke groep.
  4. Gebruik een pipetpunt van 1 ml om 200 μL blootstellingsoplossing met twee larven in elke put van de 6-putmicroplaat over te brengen.
    OPMERKING: Elke groep heeft zes herhalende groepen.
  5. Zorg ervoor dat de temperatuur van de testruimte vóór de testruimte 28 °C 2 uur is.
    OPMERKING: Gedragstests worden meestal 's middags uitgevoerd.

2. Voortbeweging en padhoektest

  1. Sla het protocol op en zet het licht van de testruimte uit.
  2. Acclimatiseren van de larven in het systeem gedurende 10 minuten en klik op de knop "Experiment" "Uitvoeren" op zijn beurt, kies vervolgens de map waar de experimentbestanden worden opgeslagen en voer de naam van het resultaat in.
  3. Klik op de knop "Achtergrond" "Start" om de test te starten.
  4. Klik beurtelings op de knop "Experiment" "Stop" om het experiment te stoppen wanneer de test eindigt.
    OPMERKING: Het systeem toont de gegevens die zijn getest wanneer het systeem stopt. De gegevens omvatten de bijgehouden afstand bij drie snelheidsklassen en padhoeknummers bij acht hoekklassen van elke minuut. Voor de bewegingstest in het gepresenteerde voorbeeld wordt de totale afstand in elke lichtperiode (10 min) berekend en het verschil tussen de controlegroep en de behandelingsgroepen vergeleken.
  5. Breng de 48 putmicroplaat terug naar de lichtincubator voor andere experimenten.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
48-well-microplate Corning 3548Embyros housing
6-well-microplate Corning 3471Embyros housing
Zebrabox Viewpoint ZebraBox Behavior instrument
ZebraLab Viewpoint ZebraLab Behavior software
Pipette Eppendorf 3120000267Transfer solution

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Zebrafish LarvaeLocomotion AssayNeurobehavioral ToxicityEnvironmental PollutantHigh Throughput MethodBehavioral TestingLight Dark CycleDistance TraveledCompound Exposure48 Well Plate

Gerelateerde artikelen