Intraductale injectie: het leveren van injectie mix in de kanalen van de muis borstklier

Samenvatting

Bron: Xiang, D., et al. Modelleren van borstkanker via een intraductale injectie van Cre-expressing Adenovirus in de muis borstklier. J. Vis. Exp (2019).

Deze video beschrijft een intraductale injectietechniek waarbij we injectiemix leveren in de kanalen van de borstklieren van muizen.

Protocol

1. Intraductale injectie

1. Gebruik aseptische technieken tijdens de chirurgische ingreep.
2. Maak een incisieplaats op de huid op een lengte van ~1 cm tussen de twee vierde inguinale MGs (Figuur 1). Scheid de huidflap (met de MG) voorzichtig van het pariëtale peritoneum om de borstkanaalboom te visualiseren.
3. Houd de tepel voorzichtig vast met de tang van Watchmaker en verwijder de buitenste tepel zonder een nabijgelegen huid te knippen, met behulp van een microdissectieschaar.
4. Laad ~3–5 μL Ad-Cre injectiemengsel in een 25 μL Hamilton spuit met een 33 G metalen naafnaald aangebracht. Schat het volume van het injectiemengsel in de spuit op basis van de blauwe kleurstof in het mengsel.
   OPMERKING: Gebruik een kleiner volume (bijv. 3 μL) bij het injecteren in MG's van 3-4 weken oude vrouwtjes en een groter volume (bijv. 10 μL) bij het injecteren in MG's van zogende vrouwtjes.
5. Houd de rand van de huidflap voorzichtig vast met een fijn gebogen pincet en injecteer het Ad-Cre injectiemengsel langzaam in de tepel, terwijl u ondertussen de verspreiding van blauwe kleurstof in de borstkanaalboom controleert. Houd de injectiesnelheid zo laag mogelijk om schade aan het ductale lumen te voorkomen.
   OPMERKING: Geïnjecteerde vloeistof (zoals geïllustreerd door de meegeleverde bromofenolblauwe kleurstof) die zich over de hele ductale boom verspreidt zonder in het stromale compartiment te lekken, duidt op een succesvolle intraductale injectie.
6. Trek de naald voorzichtig uit de tepel om lekkage van de geïnjecteerde vloeistof te voorkomen.
7. Onderzoek de distale kant (d.w.z. uit de buurt van de tepel) van de MG of de omgeving van de geïnjecteerde tepel. Merk op dat zwelling blauwe kleurstof (d.w.z. kleurstof die zich verspreidt in het nabijgelegen stroma) duidt op een injectie met een borstvetkussen in plaats van een succesvolle intraductale injectie.
8. Sluit de chirurgische wonden (vanaf 1.2) in de huid met wondclips.

2. Postoperatieve zorg

1. Verwijder de muis uit de anesthesie en plaats deze op een verwarmingskussen in een schone kooi voor herstel.
2. Meloxicam subcutaan toedienen bij 5 mg/kg opnieuw, 24 uur na de operatie.
3. Controleer de algemene omstandigheden van het dier en zoek gedurende 5 dagen naar tekenen van infectie op de incisieplaats.
4. Wondclips worden ~ 7-10 dagen na de operatie verwijderd.

Resultaten

Figuur 1: Schematisch schema van de intraductale injectie van het Ad-Cre virus in een MG. (A) Incisieplaats in de middellijn tussen de twee vierde MG's. (B) Intraductale injectie van Ad-Cre met een blauwe kleurstof (voor een betere visualisatie) in een van de vierde MG's. (C) Sluiten van de incisie in de huid door wondclips

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
33-gauge needle	Hamilton	7803-05	point style 3 blunt
7mm Reflex Clip	Braintree Scientific	RF7 CS
Adenovirus, Ad-K5-Cre	University of Iowa Viral Vector Core	Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)
Adenovirus, Ad-K8-Cre	University of Iowa Viral Vector Core	Ad5mK8-nlsCre
Bromophenol Blue	Sigma-Aldrich	B0126-25G
Hamilton syringe	Hamilton	7636-01	0.025 mL
Micro-dissecting scissors	Pentair	9M	Watchmaker's Forceps
Micro-dissecting tweezers	Dumont	M5