Soft Agar Colony Formation Assay: een methode om effecten van nieuwe verbindingen op de proliferatie van kankercellen te testen

Samenvatting

Bron: Horibata A. et. al., Usage of the Soft Agar Colony Formation Assay to Identify Inhibitors of Tumorigenicity in Breast Cancer Cells. J. Vis. Exp. (2015).

Deze video beschrijft een zachte agar kolonievormingstest om de effecten van een PADI-enzymremmer en BB-Cl-amidine op borstkankertumorigeniciteit in vitrote testen. Deze test maakt ook de kwantitatieve beoordeling van het celtransformatiepotentieel in de context van genetische verstoringen mogelijk.

Protocol

1. Bereiding van 3% 2-Hydroxyethyl Agarose

1. Voeg in een schone, droge glazen fles van 100 ml 0,9 g 2-hydroxyethylagarose (Agarose VII) toe, gevolgd door 30 ml gedestilleerd water.
2. Magnetron het mengsel gedurende 15 sec en wervel voorzichtig. Herhaal deze stap nog minstens drie keer totdat het agarosepoeder volledig is opgelost.
3. Autoclaaf de oplossingsbevattende fles gedurende 15 minuten.
4. Laat de agarose-oplossing afkoelen tot RT voor verder gebruik. Bewaar de oplossing bij RT.

2. Voorbereiding van de onderste laag: 0,6% Agarose Gel

1. Verwarm meerdere pipetten van 5 ml en 10 ml voor in een....

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Zeiss Axiopot	Carl Zeiss Microscopy	1021859251
Inverted Microscope	Olympus	CKX41
DMEM/F-12	Lonza BioWhittaker	12-719F
HyClone Donor Equine Serum	Fisher Scientific	SH30074.03
Penicillin Streptomycin	Life Technologies	15140-122
2-Hydroxyethylagarose: Type VII, low gelling temperature	Sigma-Aldrich	39346-81-1